湯慶彩 何方洋 彭慶軍 賈芳芳 盧金榮 鄭迎春 （①北京勤邦生物技術(shù)有限公司 北京 102206 江蘇益客食品集團(tuán)有限公司 江蘇 南京 河北省辛集市畜牧局 ④北京市食品安全免疫快速檢測工程技術(shù)研究中心）

乙酰甲喹又名“痢菌凈”，與喹乙醇均屬于喹噁啉類合成藥物，具有廣譜抗菌性[1-3]。由于這兩種藥物價格低廉，并且具有促進(jìn)畜禽生長等優(yōu)點，因此被廣泛應(yīng)用于畜禽養(yǎng)殖業(yè)。乙酰甲喹和喹乙醇?xì)埩魧θ梭w會產(chǎn)生致癌性、抗藥性等不良后果，國際上大多數(shù)國家將其列為限用藥物，我國雖已制定“動物性食品中獸藥殘留最高限量”標(biāo)準(zhǔn)，但濫用和超標(biāo)使用獸藥的狀況仍十分嚴(yán)重[4-7]。目前檢測乙酰甲喹和喹乙醇藥物的方法有：液相色譜法、高效液相色譜法、液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法，酶聯(lián)免疫法等。

喹乙醇在動物體內(nèi)進(jìn)行代謝，其中3-甲基－喹噁啉-2-羧酸(MQCA)是該藥物的標(biāo)志性代謝物[9-11]，因此，在檢測喹乙醇?xì)埩袅繒r，通常情況下分析MQCA。在現(xiàn)有的監(jiān)控禽產(chǎn)品質(zhì)量風(fēng)險的系統(tǒng)中，MQCA相對乙酰甲喹來說，具有更高的監(jiān)控力度。因此，如果乙酰甲喹的代謝產(chǎn)物中包含MQCA，則會直接干擾產(chǎn)品的質(zhì)量判定。為確認(rèn)乙酰甲喹(痢菌凈)在雞體內(nèi)的代謝物是否包含MQCA，本文以黃羽肉雞為研究對象，以期為禽產(chǎn)品質(zhì)量風(fēng)險監(jiān)控及乙酰甲喹(痢菌凈)的使用提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 試驗動物 2017年4月25日，于北京周邊購買20只健康黃羽肉雞。

1.1.2 乙酰甲喹(痢菌凈)藥粉 所用乙酰甲喹(痢菌凈)藥粉共計3份，市場采購1份(以下簡稱藥粉1)、養(yǎng)殖戶提供2份(以下簡稱藥粉A和藥粉B)。

1.1.3 儀器設(shè)備 LC-20AD高效液相色譜儀：日本島津制作所；XEVO TQ超高效液相-質(zhì)譜聯(lián)用儀：沃特世科技(上海)有限公司(Waters)。

1.1.4 酶聯(lián)免疫試劑盒 喹乙醇代謝物殘留酶聯(lián)免疫檢測試劑盒(型號KA08003H)：北京勤邦生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)。

1.2 方法

1.2.1 分組 從20只健康黃羽肉雞中隨機(jī)選取2只宰殺，經(jīng)測定不含喹乙醇代謝物；將剩余18只分成3組，每組6只，第一組飼喂藥粉1，給藥量分別為0、5、10、50、100、200mg，代謝24h后宰殺；第二組飼喂藥粉A，給藥量分別為0、5、10、50、100、200mg，代謝24h后宰殺；第三組飼喂藥粉B，給藥量分別為0、5、10、50、100、200mg，代謝24h后宰殺。宰殺后，每只雞均取肌肉、肝臟，均質(zhì)后于-20℃冰箱儲存。

1.2.2 樣本前處理 液-質(zhì)聯(lián)用、ELISA兩種檢測方法，均是在酸性條件下使用乙酸乙酯提取雞肉中可能存在的喹乙醇代謝物。

2 結(jié)果與分析

2.1 測定藥粉

2.1.1 喹乙醇含量 分別使用50%甲醇-水將“藥粉1”、“藥粉A”、“藥粉B”配置成濃度為10μg/ml的溶液，使用高效液相色譜儀測定其中喹乙醇的含量。檢測結(jié)果表明：3種乙酰甲喹(痢菌凈)藥粉中均不含有喹乙醇，故排除因藥粉中含有喹乙醇而造成飼喂后產(chǎn)生MQCA的可能性。

2.1.2 喹烯酮含量 據(jù)已有研究結(jié)果，喹烯酮主要代謝物中包含MQCA[12-14]。分別使用50%甲醇-水將“藥粉1”、“藥粉A”、“藥粉B”配置成濃度為1μg/ml的溶液，使用高效液相色譜儀測定其中喹烯酮的含量。檢測結(jié)果表明：3種乙酰甲喹(痢菌凈)藥粉中均不含有喹烯酮，故排除因藥粉中含有喹烯酮而造成飼喂后產(chǎn)生MQCA的可能性。

2.2 喹乙醇代謝物

樣品制備后，使用液-質(zhì)聯(lián)用、酶聯(lián)免疫試劑盒同時測定，結(jié)果及對應(yīng)給藥量統(tǒng)計如附表：

附表 液-質(zhì)聯(lián)用法和酶聯(lián)免疫試劑盒法測定結(jié)果

3 結(jié)論與討論

3.1 藥粉間差異

目前市場銷售含乙酰甲喹(痢菌凈)成分的獸藥品牌眾多，純度不一，其有效含量存在差異，造成養(yǎng)殖環(huán)節(jié)使用量不易把控。

3.2 類似藥物干擾

通過測定上述三份乙酰甲喹(痢菌凈)藥粉，明確不含有喹乙醇、喹烯酮。若飼喂后產(chǎn)生喹乙醇代謝物，其來源排除由喹乙醇、喹烯酮在雞體內(nèi)代謝所產(chǎn)生。

3.3 產(chǎn)生喹乙醇代謝物

將乙酰甲喹(痢菌凈)藥粉按梯度飼喂黃羽肉雞，經(jīng)24h代謝，其代謝物中包含MQCA，且含量與給藥量呈正相關(guān)。

4 結(jié)語

（1）乙酰甲喹(痢菌凈)代謝物種類復(fù)雜，本次研究表明，MQCA是其代謝過程中的產(chǎn)物之一。關(guān)于乙酰甲喹(痢菌凈)代謝機(jī)制、代謝物種類等，有待更深入的研究。（2）養(yǎng)殖生產(chǎn)過程中，使用乙酰甲喹(痢菌凈)則直接干擾判定產(chǎn)品中MQCA含量。引導(dǎo)養(yǎng)殖個體規(guī)范用藥，整頓獸藥行業(yè)生產(chǎn)標(biāo)準(zhǔn)，需要更多企事業(yè)單位參與其中。

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