★ 龔鵬飛 于歡 龔千鋒 黃小方

(1.江西中醫(yī)藥大學藥學院 南昌 330004; 2.江西中醫(yī)藥大學科技學院 南昌 330004)

蒼術為菊科植物茅蒼術Atractylodeslancea(Thunb.)DC.或北蒼術Atractylodeschinensis(DC.)Koidz.干燥根莖。主要產地為江蘇(茅山)和湖北等地的稱為“茅蒼術”或“南蒼術”；主要產地為河北、東北等地的蒼術稱“北蒼術”。蒼術具有祛風、散寒、健脾燥濕的作用,臨床上主要用于治療風寒感冒、水腫、腹瀉、濕阻脾胃、風濕痹痛等病[1]。蒼術炮制品有清炒、炒焦、麩炒、土炒、米泔水浸等多種，2015版《中國藥典》[2]收載生品蒼術和麩炒蒼術，而米泔水制也是蒼術炮制的一大特色，早在宋代《重修政和經史證類備用本草》就有記載，蒼術用米泔水浸泡2-3天，每天換水，至蒼術具米香，現在任然有很多地方一直應用這種炮制方法，米泔水炮制蒼術能顯著降低其過燥之性，增加健脾和胃之效[1]。近年報道，對蒼術的水洗、麩炒、烘制、土炒工藝都有研究；對炒蒼術的輔料麥麩做了化學、藥理研究[3]，并對樟幫蜜麩的制備工藝進行了研究，但是，江西建昌幫米泔水漂蒼術尚未見報道，不利于蒼術特色炮制品種的開發(fā)與利用[4]。近年來研究發(fā)現，β-桉葉醇、蒼術素是健脾和胃的主要成分之一[5-6]。而孟鶴[7]等人研究發(fā)現蒼術酮為燥性成分。此實驗通過高效液相測定β-桉葉醇、蒼術素及蒼術酮的含量，并通過星點設計-效應面法優(yōu)選使β-桉葉醇、蒼術素含量相對較高以及蒼術酮含量較低的米泔水炮制蒼術的工藝。蒼術米泔水工藝研究為其標準化生產奠定基礎，更為“建昌幫”特色炮制工藝的發(fā)展和傳承打下堅實基礎。

1 材料

HH-6 數顯恒溫水浴鍋(常州國華電器有限公司)；DFY-400高速中藥粉碎機(溫嶺市林大機械有限公司)；Ultimate3000 型高效液相全自動色譜儀 ( 美國Dionex 公司，PDA 二極管陣列紫外檢測器，Chromelon 色譜工作站)；AE240型1/10 萬電子天平( 瑞士梅特勒-托利多公司) ;SQP型Sartorius萬分之一電子天平(賽多利斯科學儀器有限公司)。

生茅蒼術片(樟樹市東北參茸藥站，批號 20160920，產地湖北)，經江西中醫(yī)藥大學鄧可眾副教授鑒定為菊科植物蒼術Atractylodeslancea(Thunb.)DC.的干燥根莖；大米(圣毅園現代農業(yè)發(fā)展有限公司，圣毅園生態(tài)米，產地長沙縣北山鎮(zhèn))。甲醇、乙腈(色譜純，西隴化工股份有限公司)；純凈水(哇哈哈)；標準品β-桉葉醇、蒼術素及蒼術酮(均為四川省維克奇生物科技有限公司，批號分別為140728、140805、16111403)。

2 方法與結果

2.1 蒼術炮制品的制備 根據預實驗、文獻資料[8-9]與工業(yè)化實際操作需要，將大米打碎成米粉，過4號篩，用時將米粉與水以2∶100 進行米泔水配比，充分攪拌形成混懸液即得米泔水溶液。再稱取30g生蒼術片放入500mL的燒杯中，加入適量的米泔水，待蒼術漂后，取出蒼術將上面的米泔水沖洗干凈，并放入烘箱40℃烘干至恒重，即得蒼術炮制品。

2.2 β-桉葉醇、蒼術素及蒼術酮的含量測定

2.2.1 對照品溶液的制備 精密稱取β-桉葉醇、蒼術素及蒼術酮對照品適量分別加甲醇溶解制成對照品母液，分別精密吸取2mL各對照品母液，用甲醇定容于10 mL 容量瓶中，制成標準品混合液，β-桉葉醇、蒼術素及蒼術酮濃度分別為：0.194 mg/mL、0.222 mg/mL、0. 600 mg/mL。

2.2.2 供試品溶液的制備 取米泔水漂蒼術樣品粉末 1.0 g(過四號篩)，置具塞錐形瓶中，加入30 mL甲醇溶液，稱重，30℃超聲60 min，放涼后并補足失重，靜置取上清液過 0.22 μm 微孔濾膜，注射入進樣瓶中待測定備用。

2.2.3 色譜條件 采用依利特C18色譜柱(4.6mm×250mm,5μm)，色譜條件參照陳佳等[10]的色譜條件進行調整，PDA全波段掃描檢測雙波長 203 nm(β-桉葉醇與蒼術酮)和340 nm(蒼術素)；流速 1.0 mg/mL，柱溫 30℃；流動相水A-流動相乙腈B，梯度洗脫(0～5.5 min，76%B；5.5～7.7 min，76～90%B；7.7～18 min，90%)。見圖1。

1.β-桉葉醇；2.蒼術素；3.蒼術酮

2.3 方法學考察

2.3.1 線性關系考察 將對照品的混合溶液的進樣量設為：20，16，12，8，4，2μL，按2.2.5的色譜條件，連續(xù)進樣。以進樣量為橫坐標，以峰面積為縱坐標，進行線性回歸。β-桉葉醇、蒼術素及蒼術酮回歸方程、相關系數和線性范圍見表1。

表1 線性回歸考察分析結果

2.3.2 精密度試驗 將2.2.1 項下標準品混合液進樣20 μL，按 2.2.3 色譜條件下連續(xù)進樣 6 次，計算得β-桉葉醇、蒼術素及蒼術酮的RSD值分別 0.51%、0.67%、0.45%，表明在此色譜條件下本儀器精密度較好。

2.3.3 重復性試驗 稱取同一蒼術炮制品 6 份，分別按 2.2.2 項進行制備供試品溶液，并按2.2.3 的色譜條件下進樣，測得β-桉葉醇、蒼術素及蒼術酮平均含量分別為0.7071%、0.1431%、3.5987%，RSD值分別 3.01%、1.88%、1.75%，表明在該條件下，本實驗重復性較好。

2.3.4 穩(wěn)定性試驗 取同一米泔水白術炮制品供試溶液，按2.2.3色譜條件下分別在 0，6，12，18，24，48 h 分別進樣 20 μL，計算得β-桉葉醇、蒼術素及蒼術酮的峰面積RSD值分別 0.83%、0.54%、1.39 %，表明在該條件下，白術炮制品供試溶液在48 h 穩(wěn)定性較好。

2.3.5 加樣回收試驗 精密稱取已知含量樣品(β-桉葉醇4.518 mg/mL、蒼術素mg/mL及蒼術酮21.954 mg/mL)6 份各1 g，按照2.2.2項下方法制備供試品溶液，并各加入β-桉葉醇、蒼術素及蒼術酮對照品適量,按照2.2.3色譜條件測定含量，計算得β-桉葉醇、蒼術素及蒼術酮的平均加樣回收率見表2。

表2 加樣回收率試驗結果

表3 星點設計結果

2.4 炮制工藝優(yōu)化

2.4.1 工藝優(yōu)化設計與結果 該優(yōu)選實驗采用3個因變量(蒼術酮、β-桉葉醇、蒼術素)進行優(yōu)選。根據黃小方等[11]的實驗改進設定A浸漂溫度、B浸漂時間、C米泔水用量(所漂蒼術質量的倍數)為自變量，制得因素水平表，共20份生蒼術飲片，每份30 g,如表3。分析計算β-桉葉醇、蒼術素、蒼術酮含量及其OD值.β-桉葉醇、蒼術素的含量越大越好，而蒼術酮的含量越小越好，通過Hassan[12]法計算OD值，dmax=(yi-ymin)/(ymax-ymin),dmin=(ymin-yi)/(ymax-ymin)。

2.4.2 模型擬合與響應面分析 應用響應面分析軟件Design Expert DX8.2分別對各因素(溫度、時間、用量)進行多元線性回歸，二項式方程擬合:OD=-0.101013-0.025424A+0.016999B+0.37241×C-1.36615×10-4AB+2.45×AC10-5+1.4562510-4BC+5.49812×10-4A2-7.49396×10-5B2-0.02569×10-2C2，R=0.8305，值較大接近1，說明該方程擬合度佳，預測性良好，P<0.01表示差異性極顯著。預測最優(yōu)條件為：米泔用量為7.42倍、漂洗時間72h、漂洗溫度 20 ℃，在此條件炮制下的蒼術含β-桉葉醇、蒼術素、蒼術酮的量預測值分別為：0.8178%、0.1433%、2.9854%，經加權折合綜合評分，折合系數OD為0.77。繪制不同變量間響應面值，見圖2。

圖2 因素間的三維效應面圖

2.4.3 最佳工藝驗證實驗 選取3批次生蒼術片各30g，按照優(yōu)選所得米泔水漂制的最佳工藝條件進行驗證試驗，重復3次，預測值與實際值偏差較小，誤差均在 5%以內，表明工藝預測性良好。

3 討論

本文采用星點設計研究米泔水漂制蒼術的工藝，以米泔用量、漂洗時間、漂洗溫度主要考查三個揮發(fā)油成分作為優(yōu)選指標，目的是優(yōu)選出能降低蒼術的燥性增強其健脾和胃功效的最佳工藝。本文采用三個指標的含量來評價優(yōu)選工藝，β-桉葉醇、蒼術素是蒼術健脾和胃的主要有效成分[5-6]，蒼術酮是燥性成分[13]。在蒼術在米泔水漂制過程中，β-桉葉醇、蒼術素、蒼術酮隨著溫度和時間的提升而含量而升高，但因漂洗的泔水在25℃以上很容易因微生物的存在而發(fā)酵，而一系列酵解反應過程可能促使了β-桉葉醇、蒼術素、蒼術酮及其他成分的產生，但如果漂洗時間太長會導致霉變影響藥材品質。本實驗考察結果顯示最佳工藝參數為 20 ℃、3d、7.28倍的米泔水用量，而米泔水漂制古法一般在春秋季漂制水溫為20℃左右，漂 1～7 d[8]與古法炮制的要求基本一致。本實驗優(yōu)選得到的最佳工藝預測性好OD值高，能為米泔米漂蒼術的炮制工藝研究提供一定的依據，為建昌幫米泔水漂蒼術飲片質量標準奠定基礎，為下一步對米泔水漂蒼術的藥效與炮制機理的相關性進行研究提供依據。

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