王 瑞 吳 桐 劉 悅 于明欣 陶小軍王海波

（遼寧中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，遼寧 大連 116600）

“毒”或者“毒性”作為中藥的一種性能在我國有悠久的歷史[1]。《黃帝內(nèi)經(jīng)》按毒性大小把藥物分為“無毒”“小毒”“有毒”“大毒”4類。2015版《中國藥典》一部收載83種毒性藥材及飲片，其中“大毒”10種、“有毒”42種、“小毒”31種，其余均應(yīng)屬“無毒”類[2]。遠(yuǎn)志為常用中藥，不屬于“有毒”類中藥，文獻(xiàn)報(bào)道常用劑量下其不良反應(yīng)較少，主要有過敏癥狀伴胸悶、皮膚瘙癢等。但是，生遠(yuǎn)志使用時(shí)間較長或者過量使用，可顯著抑制胃腸運(yùn)動(dòng)，引發(fā)胃腸脹氣和腸壁變薄等[3]，因此需要重視。本研究從急性毒性試驗(yàn)和胃腸病理組織學(xué)損傷的角度，比較了生遠(yuǎn)志和蜜遠(yuǎn)志對(duì)小鼠的胃腸急性毒性，為遠(yuǎn)志臨床合理應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)參考。

1 材料

1.1 藥物 遠(yuǎn)志飲片，購自大連權(quán)健中藥飲片有限公司，批號(hào)20160423；蜜遠(yuǎn)志，批號(hào)20161103，由遼寧中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院鞠成國副教授按文獻(xiàn)方法炮制制備[4]：遠(yuǎn)志藥材10份，加蜜3份，加水2份，潤悶3 h，60℃炒炙9 min炮制而成。

藥液制備：分別取遠(yuǎn)志或相當(dāng)于遠(yuǎn)志原藥材量的蜜遠(yuǎn)志100 g，依次加入1400 mL、1000 mL、600 mL蒸餾水，各煎煮1.5 h、1.5 h和1 h，合并3次濾液，揮發(fā)濃縮成50 mL，得藥液相當(dāng)于2 g生藥/mL。藥液高溫滅菌后，置4℃冰箱短期保存?zhèn)溆?。?shí)驗(yàn)中所用遠(yuǎn)志或蜜遠(yuǎn)志劑量均以水煎液對(duì)應(yīng)的生遠(yuǎn)志原藥材的量。

1.2 動(dòng)物 昆明小鼠，雌雄各半，18～22 g，遼寧長生生物技術(shù)有限公司，合格證號(hào)SYXK（遼）2013-0009，常規(guī)飼料飼養(yǎng)，自由飲水，處死前12 h禁食不禁水。

2 方法與結(jié)果

正式實(shí)驗(yàn)：分別各取小鼠60只，雌雄各半，每組10只，灌胃20 mL/kg給藥1次，測(cè)定藥物對(duì)小鼠的LD50。組別及劑量分組見表1。密切觀察給藥后4 h內(nèi)動(dòng)物反應(yīng)情況，4 h后每小時(shí)觀察1次，之后每日觀察2次，連續(xù)14 d，并記錄給藥小鼠皮毛、行為、分泌物、排泄物、死亡數(shù)和中毒反應(yīng)等，對(duì)瀕死及死亡小鼠及時(shí)大體解剖，其他小鼠觀察期結(jié)束后（實(shí)驗(yàn)第15 d）處死，也進(jìn)行肉眼大體解剖，若有器官出現(xiàn)體積、顏色、質(zhì)地等改變時(shí)，則對(duì)其以10%甲醛固定后，行HE染色后進(jìn)行病理學(xué)組織學(xué)檢查。統(tǒng)計(jì)各劑量的小鼠死亡率，用SPSS 11.5軟件以Bliss法計(jì)算遠(yuǎn)志和蜜遠(yuǎn)志的LD50。

表1 遠(yuǎn)志與等藥量蜜遠(yuǎn)志對(duì)小鼠的LD50測(cè)定結(jié)果

表1顯示，遠(yuǎn)志對(duì)小鼠灌胃給藥的LD50為19.3 g生藥/kg，95%可信限為16.8～21.8 g生藥/kg。蜜遠(yuǎn)志的LD50為31.8 g生藥/kg，95%可信限為26.8～36.8 g生藥/kg。經(jīng)解剖肉眼觀察，給藥遠(yuǎn)志后的死亡小鼠小腸上段有明顯瘀血、水腫，其他臟器未見明顯病變；給藥蜜遠(yuǎn)志后的死亡小鼠胃及小腸上段脹氣，小腸上段有輕度水腫、瘀血，其他臟器未見明顯病變。試驗(yàn)結(jié)束時(shí)，試驗(yàn)中存活小鼠體重、毛色、活動(dòng)情況等均未見明顯異常，處死存活小鼠觀察小鼠胃腸及其他臟器肉眼均未見有明顯病變，提示遠(yuǎn)志和蜜遠(yuǎn)志的胃腸反應(yīng)可能是可逆的，停藥后可恢復(fù)。

2.2 遠(yuǎn)志和蜜遠(yuǎn)志對(duì)小鼠急性胃腸毒性的病理組織學(xué)影響 圖1病理組織學(xué)結(jié)果顯示，正常組小鼠胃壁各層結(jié)構(gòu)清晰，黏膜層無炎細(xì)胞浸潤、糜爛及潰瘍，血管未見擴(kuò)張充血，胃黏膜下及肌層亦未見炎細(xì)胞浸潤，未見血管擴(kuò)張，血管內(nèi)皮細(xì)胞清晰完整未見腫脹；其腸壁平坦，各層結(jié)構(gòu)清晰，小腸黏膜絨毛內(nèi)偶見炎細(xì)胞、未見糜爛及潰瘍，絨毛內(nèi)血管略有充血，黏膜下及肌層未見炎細(xì)胞浸潤，未見血管擴(kuò)張，血管內(nèi)皮細(xì)胞清晰完整未見腫脹。

遠(yuǎn)志組小鼠胃壁表層1/3細(xì)胞輪廓存在，但細(xì)胞結(jié)構(gòu)消失，其間見炎細(xì)胞浸潤，血管未見擴(kuò)張充血，胃黏膜下及肌層見少許炎細(xì)胞浸潤，血管擴(kuò)張，血管內(nèi)皮細(xì)胞不清晰、明顯腫脹；其腸壁仍平坦，黏膜表層少許細(xì)胞輪廓存在，但細(xì)胞結(jié)構(gòu)消失，小腸黏膜層見炎細(xì)胞浸潤，絨毛內(nèi)血管擴(kuò)張充血，黏膜下及肌層亦見少許炎細(xì)胞浸潤，并見血管擴(kuò)張充血，血管內(nèi)皮細(xì)胞腫脹。

蜜遠(yuǎn)志組小鼠胃壁各層結(jié)構(gòu)清晰，黏膜層無炎細(xì)胞浸潤、糜爛及潰瘍，血管未見擴(kuò)張充血，胃黏膜下及肌層亦未見炎細(xì)胞浸潤，未見血管擴(kuò)張，血管內(nèi)皮細(xì)胞清晰完整未見腫脹；其腸壁仍平坦，腸黏膜2/3細(xì)胞輪廓存在，但細(xì)胞結(jié)構(gòu)消失，小腸黏膜層見炎細(xì)胞浸潤，絨毛內(nèi)血管結(jié)構(gòu)不清，黏膜下及肌層亦見炎細(xì)胞浸潤，并見血管擴(kuò)張，血管內(nèi)皮細(xì)胞不清晰、明顯腫脹。

比較以上病理檢查結(jié)果發(fā)現(xiàn)：遠(yuǎn)志和蜜遠(yuǎn)志對(duì)胃腸均有一定的組織損傷作用，相比小腸組織，兩者對(duì)胃組織的損傷要輕；相比蜜遠(yuǎn)志，生遠(yuǎn)志對(duì)小鼠胃腸損傷作用要重。

圖1 遠(yuǎn)志和蜜遠(yuǎn)志急毒試驗(yàn)對(duì)小鼠胃、小腸組織形態(tài)的影響（HE染色，×100）

3 討論

中藥的胃腸毒性反應(yīng)較常見，發(fā)病率高，致死率低，臨床多表現(xiàn)為惡心嘔吐、胃腸不適、食欲減退、腹脹、腹痛、腹瀉、便秘、便血、胃腸黏膜出血壞死等，嚴(yán)重者也可致死[1]。以上的胃腸毒性多與中藥所含的有毒物質(zhì)或其代謝產(chǎn)物以及方劑中某些藥物配伍后產(chǎn)生相互作用，通過直接或間接途徑影響胃腸組織結(jié)構(gòu)或生理功能。其中，腹脹、惡心嘔吐或便秘可能由于藥物成分影響胃腸神經(jīng)肌肉系統(tǒng)，抑制胃腸運(yùn)動(dòng)引起；藥物成分直接激活胃腸平滑肌M受體或抑制膽堿酯酶而增強(qiáng)蠕動(dòng)甚至導(dǎo)致痙攣引起腹痛、腹瀉；黑便和便血?jiǎng)t可能與藥物刺激上消化道和下消化道引發(fā)急性炎癥、潰瘍、出血壞死相關(guān)。例如，高濃度200%大黃給大鼠灌胃4～5日后導(dǎo)致腹瀉，掃描電鏡可觀察到結(jié)腸表面突起、錯(cuò)綜不均、杯狀細(xì)胞增多等刺激性炎癥反應(yīng)，其毒性成分可能是其蒽醌類成分[6]。

遠(yuǎn)志為《中國藥典》收載中藥，性溫，味苦、辛，有安神益智、交通心腎、祛痰、消腫功效，可用于治療心腎不交引發(fā)的健忘驚悸、失眠多夢(mèng)、神志恍惚、咳痰不爽等癥狀。研究發(fā)現(xiàn)[3]，遠(yuǎn)志含多種皂苷類成分，也含有糖脂類、生物堿類及揮發(fā)油等，其中遠(yuǎn)志皂苷是其鎮(zhèn)靜催眠、益智健腦的主要成分。本研究發(fā)現(xiàn)，等生藥量生遠(yuǎn)志LD50的19.3 g生藥/kg低于蜜遠(yuǎn)志LD50的31.8 g生藥/kg，提示蜜制后遠(yuǎn)志毒性可能降低；死亡小鼠解剖肉眼觀察到藥后胃、小腸水腫、瘀血，從病理組織學(xué)檢查也可發(fā)現(xiàn)：生遠(yuǎn)志和蜜遠(yuǎn)志對(duì)胃的組織損傷如破壞組織結(jié)構(gòu)、引發(fā)炎細(xì)胞浸潤、擴(kuò)張血管、損傷血管內(nèi)皮作用要輕于小腸，蜜遠(yuǎn)志的胃腸損傷作用也低于生遠(yuǎn)志。另外，本研究還發(fā)現(xiàn)，急毒試驗(yàn)結(jié)束后存活小鼠處死后未發(fā)現(xiàn)有明顯胃腸病變，提示遠(yuǎn)志和蜜遠(yuǎn)志的胃腸毒性可能是可逆的，因此小劑量和短期應(yīng)用遠(yuǎn)志或制劑相對(duì)安全。

吳暉暉等[7]發(fā)現(xiàn)生遠(yuǎn)志顯著抑制小鼠胃、小腸排空，蜜遠(yuǎn)志作用則較小。江娟等[8]發(fā)現(xiàn)生遠(yuǎn)志水煎液可顯著抑制小鼠胃腸運(yùn)動(dòng)，且其作用能被厚樸所拮抗。王建等[9]研究遠(yuǎn)志和遠(yuǎn)志皂苷毒性作用時(shí)發(fā)現(xiàn)，遠(yuǎn)志皂苷可能是遠(yuǎn)志胃腸毒性的主要成分；但是，夏厚林等[10]比較遠(yuǎn)志蜜炙前后化學(xué)成分變化后發(fā)現(xiàn)，蜜炙后，遠(yuǎn)志皂苷成分僅增加了0.1%，而其他有效成分浸出量則增加了13.9%，這提示遠(yuǎn)志的胃腸毒性可能還包括皂苷以外的成分。總之，有必要進(jìn)一步研究遠(yuǎn)志的胃腸抑制及胃腸毒性作用機(jī)制，改變炮制方法以提高遠(yuǎn)志有效成分含量、減少有害成分殘留，在臨床上倡導(dǎo)小劑量和短期應(yīng)用遠(yuǎn)志制劑，或者方劑使用上注意配伍以減少遠(yuǎn)志可能造成的胃腸不良反應(yīng)，從而惠及患者安全用藥。

[1]趙軍寧，葉祖光.中藥毒性理論與安全性評(píng)價(jià)[M].北京:人民衛(wèi)生出版社，2012:7，94-99.

[2]杜立平，王東升.2015年版《中國藥典》(一部)毒性藥材及飲片的歸納分析[J].中國藥房，2017，28(28):4023-4026.

[3]陸茵，馬越明.中藥藥理學(xué)[M].2版.北京:人民衛(wèi)生出版社，2016:246-247.

[4]楊偉峰，王建，劉麗娜，等.生遠(yuǎn)志及其總皂苷與蜜遠(yuǎn)志對(duì)大鼠胃腸電慢波的影響[J].中藥藥理與臨床，2010，26(3):28-31.

[5]國家食品藥品監(jiān)督管理局.中藥、天然藥物急性毒性研究技術(shù)指導(dǎo)原則[S].2005.

[6]嚴(yán)茂祥，陳芝蕓，項(xiàng)柏康.脾虛證大鼠血及結(jié)腸組織胃腸激素的變化[J].中華中醫(yī)藥雜志，2003，18(2):71-72.

[7]吳暉暉，王建，劉賢武，等.遠(yuǎn)志及其不同蜜炙品的急性毒性及其對(duì)胃腸運(yùn)動(dòng)的影響[J].四川中醫(yī)，2006，24(11):16-18.

[8]江娟，王建，李達(dá)，等.遠(yuǎn)志與厚樸不同煎煮時(shí)間及不同配比對(duì)小鼠胃腸運(yùn)動(dòng)的影響[J].西安交通大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版)，2009，30(3):380-382.

[9]王建，吳暉暉，武云，等.遠(yuǎn)志及其總皂苷與蜜遠(yuǎn)志的急性毒性比較研究[J].中藥藥理與臨床，2004，20(6):21-21.

[10]夏厚林，董敏，盛燕，等.遠(yuǎn)志蜜炙前后化學(xué)成分的對(duì)比研究[J].時(shí)珍國醫(yī)國藥，2006(9):1620-1621.