駱 沖,黃聰靈,朱富偉,謝書越,黃健祥,葉 倩,鄧義才,萬 凱*
(1.廣東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)產(chǎn)品公共監(jiān)測中心,廣東 廣州 510640;2.農(nóng)業(yè)部農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全檢測與評價重點實驗室,廣東 廣州 510640;3.農(nóng)業(yè)部農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全風(fēng)險評估實驗室(廣州),廣東 廣州 510640)
圖1 5種手性農(nóng)藥的結(jié)構(gòu)式
Fig.1 Molecular structure of five chiral pesticides
將新鮮的菜心、油麥菜分別用粉碎機粉碎勻漿。稱取粉碎后的樣品10.00 g于50 mL離心管中,加入10 mL乙腈,渦旋5 min,使樣品中的農(nóng)藥得到充分提取。然后向提取液中加入1.0 g NaCl和2.0 g無水硫酸鎂,渦旋1 min后,3 800 r/min離心5 min,取上層清液1.8 mL置于裝有30 mg PSA粉末和15 mg GCB粉末的2.0 mL離心管中,渦旋混勻1 min ,8 000 r/min離心2 min,取上層清液過0.22 μm 有機濾膜至進樣瓶中,經(jīng)UPLC-MS/MS 檢測,基質(zhì)外標(biāo)法定量分析。
色譜條件:色譜柱:CHIRALCEL OD-RH色譜柱(150 mm×4.6 mm,5.0 μm);柱溫:35 ℃;流動相為2 mmol/L乙酸銨水溶液(A)-乙腈(B);進樣量:5 μL;梯度洗脫程序:0~10 min,55%~50%B;10~11 min,50%~75%B;11~15 min,75%B;15~15.2 min,75%~55%B;15.2~25 min,55%B。
質(zhì)譜條件:離子源:電噴霧離子源ESI;加熱模塊:400 ℃;脫溶劑溫度:250 ℃;霧化氣流量:3 L/min;干燥氣流量:10 L/min;檢測方式:多反應(yīng)監(jiān)測方式(MRM),駐留時間均為0.05 s,其他質(zhì)譜參數(shù)見表1。
表1 5種手性農(nóng)藥的質(zhì)譜參數(shù)Table 1 Mass spectrometric parameters of 5 chiral pesticides
標(biāo)準(zhǔn)工作溶液:準(zhǔn)確移取一定量標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液至10.00 mL容量瓶中,用乙腈定容,分別配成0.005、0.01、0.05、0.1、0.5、1.0 mg·L-1的溶劑標(biāo)準(zhǔn)工作液,分別用菜心和油麥菜空白陰性樣品的提取液準(zhǔn)確配制相應(yīng)濃度的2種基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液。
在陰性菜心、油麥菜樣品中進行加標(biāo)回收實驗,加標(biāo)水平分別為0.01、0.1、0.5 mg·kg-1,加標(biāo)24 h后按照“1.2”方法提取凈化,然后在“1.3”條件下上機檢測,每個水平重復(fù)6次。同時配制相應(yīng)濃度的基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液,采用基質(zhì)外標(biāo)法定量分析。
合適的樣品前處理可達到去除樣品中的基體與其他干擾物質(zhì)、富集目標(biāo)物、定量轉(zhuǎn)換等目的。在QuEChERS提取方法中,加入無水硫酸鎂和氯化鈉能夠產(chǎn)生鹽析效應(yīng),使基質(zhì)中親水性成分的溶解度降低,促使溶劑相和水相分離,從而提高提取率。而一些吸附劑的加入會造成部分目標(biāo)物的損失[26]。本文前處理方法是經(jīng)過改良的QuEChERS方法,基本原理一致。
2.1.2凈化劑的優(yōu)化QuEChERS方法的凈化劑為PSA,本實驗所用基質(zhì)為葉菜,其色素含量較高,而GCB對色素具有很好的吸附作用,因此本實驗選擇PSA及GCB作為菜心提取液的凈化劑,并對其用量分別做了優(yōu)化。
實驗考察了加入10、20、30、40、50 mg PSA對1.8 mL提取上清液凈化效果的影響。發(fā)現(xiàn)隨著PSA量的加大,提取液的顏色逐漸變淺,5種手性農(nóng)藥的平均回收率增高,當(dāng)PSA用量為30 mg時,5種手性農(nóng)藥的回收率為77.9%~99.5%,再加大PSA的用量反而使某些農(nóng)藥的回收率降低,因此確定PSA粉的用量為30 mg。
固定PSA用量為30 mg,在1.8 mL提取上清液中考察GCB加入量為5、10、15、20、25、30 mg時對凈化效果的影響。結(jié)果顯示,GCB對色素具有強大的吸附作用,隨著GCB用量的增大,提取液顏色迅速變淺,在加入30 mg PSA和15 mg GCB的條件下,提取液顏色已基本呈無色透明。但隨著GCB加入量的增大,5種手性農(nóng)藥的回收率逐漸增高,當(dāng)GCB用量為15 mg時,回收率基本穩(wěn)定,GCB用量為20、30 mg時,部分農(nóng)藥的回收率反而降低,這可能是GCB吸附色素后,繼而吸附目標(biāo)化合物所致。故本實驗選擇GCB的用量為15 mg。
取“1.4”部分配制的對映體系列標(biāo)準(zhǔn)溶液和2種基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液在UPLC-MS/MS上測定,重復(fù)3次,以對映體濃度(x,mg·L-1)為橫坐標(biāo),3次進樣提取離子峰平均峰面積(y)為縱坐標(biāo),進行曲線擬合,獲得對映體的標(biāo)準(zhǔn)溶液、基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線方程和相關(guān)系數(shù)(表2)。結(jié)果表明,5種對映體手性農(nóng)藥在0.005~1.0 mg·L-1質(zhì)量濃度范圍內(nèi)呈良好線性,相關(guān)系數(shù)r2≥0.996 4,以標(biāo)準(zhǔn)曲線的最低檢測濃度為檢出限,得檢出限為0.005 mg·L-1。
表2 5種對映體手性農(nóng)藥在菜心中的保留時間、回歸方程、相關(guān)系數(shù)和基質(zhì)效應(yīng)Table 2 Retention times,regression equations,correlation coefficients(r2),and matrix effects for five enantionmers of chiral pesticide in flowering cabbage
對加標(biāo)樣品按照“1.5”方法處理,每個水平重復(fù)測定6次,同時配制相應(yīng)濃度的基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液,基質(zhì)外標(biāo)法定量,加標(biāo)回收率與相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)結(jié)果見表3。結(jié)果表明:5種手性農(nóng)藥在兩種葉菜中的平均回收率為68.8%~104%,RSD為1.0%~13.7%;以最低添加濃度計算方法的定量下限,以標(biāo)準(zhǔn)曲線最低濃度為方法檢出限,得5種手性農(nóng)藥在菜心、油麥菜基質(zhì)中的定量下限均為0.01 mg·kg-1,檢出限均為0.005 mg·kg-1。
表3 不同基質(zhì)中5種手性對映體的加標(biāo)回收率與相對標(biāo)準(zhǔn)偏差Table 3 Recoveries and relative standard deviation of five kinds of chiral enantiomers in different matrixs
圖2 菜心添加樣品的提取離子色譜圖Fig.2 Chromatogram of Chinese flowering cabbage(0.1 mg·kg-1 for each enantiomer)a-1.metalaxy-1;a-2.metalaxy-2;b-1.paclobutrazol-1;b-2.paclobutrazol-2;c-1.triadimefon-1;c-2.triadimefon-2;d-1. myclobutanil-1;d-2.myclobutanil-2;.e-1.famoxadone-1;.e-2 famoxadone-1
表4 甲霜靈在葉菜中的檢出結(jié)果Table 4 Determination results of metalaxyl in leaf vegetables
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