亚洲免费av电影一区二区三区,日韩爱爱视频,51精品视频一区二区三区,91视频爱爱,日韩欧美在线播放视频,中文字幕少妇AV,亚洲电影中文字幕,久久久久亚洲av成人网址,久久综合视频网站,国产在线不卡免费播放

        ?

        Orbitrap高分辨質(zhì)譜法高通量篩查生化藥品、中成藥與保健品中非法添加的13種消化類化學(xué)藥物

        2018-04-18 03:22:13郭常川張迅杰賀美蓮
        分析測試學(xué)報 2018年3期
        關(guān)鍵詞:中成藥質(zhì)譜基質(zhì)

        郭常川,孫 華,石 峰*,邢 晟,張迅杰,李 可,賀美蓮,姜 瑋,3*

        (1.山東省食品藥品檢驗研究院,山東 濟南 250101;2.山東大學(xué) 藥學(xué)院,山東 濟南 250012;3.山東大學(xué) 化學(xué)與化工學(xué)院,山東 濟南 250100)

        消化不良是一種臨床癥候群,主要由胃動力障礙所引起,包括胃蠕動差的胃輕癱和食道反流病,是一種發(fā)病人群很廣的常見疾病。近年來,市面上出現(xiàn)很多針對消化不良癥狀的聲稱“純天然”、“無化學(xué)添加”的生化藥品、中成藥或保健品。然而,此類產(chǎn)品質(zhì)量良莠不齊,一些不法分子為片面追求治療效果、獲取經(jīng)濟暴利,擅自在其中添加化學(xué)藥品,不僅違反了《藥品管理法》和《食品安全法》的規(guī)定,還嚴(yán)重危及廣大人民群眾的身體健康。中成藥、生化藥品或保健品若在說明書中明確注明含有某種化學(xué)成分,則符合法律法規(guī);若未注明卻被檢出,則為非法添加。因此,為嚴(yán)厲打擊非法添加行為,保證人民群眾的食品和用藥安全,亟需開發(fā)快速、準(zhǔn)確、高靈敏、高選擇性的用于非法添加消化類化學(xué)藥物的快速篩查方法。

        當(dāng)前,已報道的非法添加檢測手段以液質(zhì)聯(lián)用法(LC-MS)[1-3]為主,也有關(guān)于高效液相色譜法(HPLC)[4]、薄層色譜法(TLC)-表面增強拉曼(SERS)聯(lián)用法[5-6]、膠束電動色譜法[7]的報道。Orbitrap高分辨質(zhì)譜儀(Orbitrap HRMS)是最新的高分辨質(zhì)譜技術(shù),分辨率可達(dá)1 000 000以上,質(zhì)量精度可達(dá)0.1~1 ppm[8],可進(jìn)行高精度的目標(biāo)物或非目標(biāo)物的篩查。近年來,Orbitrap 高分辨質(zhì)譜技術(shù)的應(yīng)用日益增多,已用于食品安全[9-10]、藥品安全[11]、中成藥成分分析[12]、藥物動力學(xué)[13]、蛋白組學(xué)[14]、代謝組學(xué)[15]研究等領(lǐng)域。

        本文首次將超高效液相色譜-Orbitrap高分辨質(zhì)譜聯(lián)用(UHPLC-HRMS)技術(shù)用于消化類化學(xué)藥物非法添加的快速篩查、鑒定和定量研究。通過Full MS/dd-MS2(Data-dependent MS2) 模式,在一個分析周期(10 min)內(nèi)完成對樣品的高精度一級、二級掃描,得到準(zhǔn)確質(zhì)量數(shù)和準(zhǔn)確碎片離子信息,同時對潛在的陽性樣品進(jìn)行定量分析。本方法具有快速、準(zhǔn)確、高靈敏度、高選擇性的特點,為打擊非法添加行為提供了新手段、新技術(shù)。

        1 實驗部分

        1.1 儀器與試劑

        Thermo Q Exactive PlusTM超高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用系統(tǒng)包括Ultimate 3000液相泵、自動進(jìn)樣器、柱溫箱以及Orbitrap高分辨質(zhì)譜部分(Thermofisher Scientific,德國);XCalibur 4.0軟件(Thermofisher Scientific,美國)用以質(zhì)譜儀控制和數(shù)據(jù)處理;Mettler XS205電子天平(Mettler Toledo,瑞士);KQ-300 GDV溫控超聲儀(昆山舒美,中國);Sigma 3K15高速冷凍離心機(Sigma-Aldrich,德國);IKA Vortex3旋渦混勻器(IKA,德國)。色譜柱為Thermo Hypersil Gold C18(2.1 mm×100 mm,3 μm,Thermofisher Scientific,美國)。

        對照品左卡尼汀、法莫替丁、西咪替丁、鹽酸雷尼替丁、消旋山莨菪堿、甲氧氯普胺、奧美拉唑、雷貝拉唑鈉、泮托拉唑鈉、多潘立酮、西沙比利和枸櫞酸莫沙必利均購自中檢院,伊托必利購自加拿大TRC公司;HPLC級甲醇、乙腈以及超純水均購自Fisher公司(美國),HPLC級甲酸、甲酸銨、乙酸銨購自ACS恩科化學(xué)公司(美國);樣品來源:156批生化藥品(復(fù)方胃蛋白酶顆粒)來自2017年國家評價性抽驗檢品,38批中成藥、43批保健品來自山東省食品藥品監(jiān)督管理局或山東省各市、縣食品藥品監(jiān)督管理局抽樣。將未檢出以上13種成分的10批樣品混合均勻,作為陰性樣品基質(zhì)。10批陰性樣品編號分別為YC201700004,YC201700025,YC201700039,YC201700040,YC201700055,YC201700057,YC201700058,YC201700068,YC201700114,YC201700117。

        1.2 溶液的制備

        1.2.1對照品溶液的制備精密稱取各對照品適量,置于25 mL容量瓶中,加甲醇溶解并定容至刻度,搖勻,作為對照品儲備液(質(zhì)量濃度為200 mg/L)。向空白基質(zhì)中加標(biāo)準(zhǔn)品,配成相當(dāng)于實際樣品質(zhì)量濃度為8、40、200、400、800 μg/L的標(biāo)準(zhǔn)溶液和QC(質(zhì)量控制)溶液。

        1.2.2供試品溶液的制備取供試品約0.5 g,精密稱定,置于10 mL容量瓶中,加提取溶劑甲醇-水(50∶50,體積比)適量,超聲提取15 min,冷卻至室溫,加提取溶劑定容至刻度,上清液過濾膜,取續(xù)濾液即得供試品溶液。

        1.3 液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用條件

        1.3.1色譜條件色譜柱為Thermo Hypersil Gold C18(2.1 mm ×100 mm,3 μm)。流動相:0.1%甲酸水溶液(A)-乙腈(B),梯度洗脫程序:0~1.0 min,5%B;1.0~5.0 min,5%~85%B;5.0~7.5 min,85%B;7.5~7.6 min,85%~5%B;7.6~10.0 min,5%B。流速:300 μL·min-1;柱溫:40 ℃;自動進(jìn)樣器溫度:20 ℃;進(jìn)樣量:5 μL。

        1.3.2質(zhì)譜條件Q ExactiveTM質(zhì)譜系統(tǒng)配有HESI離子源,采用正離子模式,噴霧電壓為3.0 kV,毛細(xì)管和噴霧溫度分別為350 ℃和250 ℃。鞘氣和輔助氣壓力分別設(shè)為40、15 arb,S-lens RF電壓為50 V。噴霧氣和碰撞氣均為氮氣。使用校正溶液(含咖啡因、四肽MRFA和Ultramark 1621的混合溶液)每3 d校正1次質(zhì)量軸。掃描方式采用正離子Full MS/dd-MS2模式。Full MS一級全掃描范圍為m/z100~1 000,自動增益控制AGC、最大注入時間IT分別設(shè)為1.0e6和100 ms;dd-MS2數(shù)據(jù)依賴的二級掃描AGC設(shè)為2.0e5,最大IT設(shè)為50 ms,分離窗口設(shè)為1.0m/z。各化合物的歸一化碰撞能量設(shè)為20%、40%、60%。

        2 結(jié)果與討論

        2.1 方法的建立

        考慮到13種化合物的極性差異較大,故選擇甲醇-水(體積比50∶50)作為提取溶劑,結(jié)果表明其對13種化合物均有較高的提取效率,且濾液潔凈,無需進(jìn)一步凈化即可直接進(jìn)樣,簡化了樣品前處理。

        由于13種化合物結(jié)構(gòu)中均含有較多的N原子,正離子質(zhì)譜掃描模式下響應(yīng)高,因此選擇正離子模式。分別將13種化合物標(biāo)準(zhǔn)溶液流動注入質(zhì)譜儀進(jìn)行參數(shù)優(yōu)化,獲得相應(yīng)的準(zhǔn)分子離子峰,輸入至方法設(shè)置中。各化合物二級質(zhì)譜掃描的碰撞能量統(tǒng)一設(shè)為20%、40%、60%,得到的二級質(zhì)譜圖是在3種碰撞能量下二級質(zhì)譜圖的疊加,有效避免了采用單一碰撞能量可能導(dǎo)致的不同儀器間重現(xiàn)性差的情況。在建立的LC-MS聯(lián)用方法中,掃描方式選擇正離子Full MS/dd-MS2模式,此模式包含一次一級全掃描和一次數(shù)據(jù)依賴的二級掃描。一級質(zhì)譜全掃描采用70 000 FWHM分辨率,確保得到高分辨質(zhì)譜準(zhǔn)確質(zhì)量數(shù);二級質(zhì)譜掃描采用17 500 FWHM,保證高分辨掃描的同時加快掃描速度。

        對比了甲醇-水和乙腈-水混合體系作為流動相的效果,并在水相中分別添加了少量甲酸、甲酸銨、乙酸銨等。結(jié)果表明,乙腈-0.1%甲酸水體系能得到最佳的分離效果,獲得最佳的色譜峰形和較高的靈敏度,因此選擇乙腈-0.1%甲酸水體系作為流動相,并采用“1.3.1”所述梯度洗脫程序。

        2.2 專屬性

        稱取陰性樣品適量,按“1.2.2”方法處理得到空白基質(zhì)溶液,進(jìn)樣5 μL分析,空白基質(zhì)溶液的提取離子色譜圖顯示,各化合物保留時間處未出現(xiàn)干擾峰或干擾峰很小(遠(yuǎn)低于檢出限),對定量分析沒有影響,專屬性強。單次測定在10 min內(nèi)即可完成,分析效率高,尤其適用于高通量篩查。另取200 μg/L的QC溶液進(jìn)樣5 μL分析,記錄色譜圖(圖1)。

        化合物的保留時間、準(zhǔn)確質(zhì)量數(shù)和碎片離子信息如表1所示。理論質(zhì)量數(shù)與實際測得的質(zhì)量數(shù)相對偏差越小,表明篩查結(jié)果的可信程度越高。表1中13種分析物的實測和理論質(zhì)量數(shù)偏差均不超過3.08 ppm,顯示了Orbitrap HRMS高度可靠的質(zhì)量精度。代表性化合物雷尼替丁的二級質(zhì)譜圖及裂解機理如圖2所示,二級質(zhì)譜碎片離子輔助確證化合物的存在,裂解機理闡明了主要碎片離子的化學(xué)結(jié)構(gòu)及裂解途徑。

        表1 消化類藥物的保留時間和準(zhǔn)確質(zhì)量數(shù)測定Table 1 Retention time and accurate mass of digestive system drugs

        圖1 QC溶液(200 μg/L)的提取離子色譜圖Fig.1 Extracted ion chromatograms of digestive drugs in 200 μg/L spike solutionthe noted numbers were the same as those in Table 1

        2.3 檢出限

        逐級稀釋QC溶液并進(jìn)樣分析,記錄色譜圖,按照3倍信噪比計算檢出限。結(jié)果表明各化合物的檢出限均為1.0 μg/L。

        圖2 雷尼替丁的二級質(zhì)譜圖(A)以及碎片離子m/z 176.048 8(B)與m/z 270.090 7及m/z 125.005 6(C)的裂解機理Fig.2 MS2 mass spectra(A) and fragmention mechanisms of fragment ions m/z 176.048 8(B),m/z 270.090 7 and m/z 125.005 6(C)

        2.4 線性范圍與定量下限

        按“1.2.1”配制系列標(biāo)準(zhǔn)溶液,進(jìn)樣5 μL測定峰面積。以峰面積(y)對標(biāo)準(zhǔn)溶液質(zhì)量濃度(x,μg/L)擬合校正曲線,建立回歸方程。結(jié)果表明,13種化合物的峰面積與質(zhì)量濃度線性關(guān)系良好,線性范圍均為8.0~800 μg/L,相關(guān)系數(shù)(r)為0.998 5~1.000 0(表2)。以線性范圍最低點作為定量下限,13種化合物的定量下限均為8.0 μg/L。

        2.5 回收率、準(zhǔn)確度與精密度

        分別精密移取對照品儲備液10 μL、陰性供試品0.5 g,置于10 mL容量瓶中,加提取溶劑適量,超聲提取15 min,冷卻至室溫,加提取溶劑定容至刻度,上清液過濾膜,取續(xù)濾液即得供試品溶液(質(zhì)量濃度約為200 μg/L),平行制備6份。進(jìn)樣,按擬定方法測定回收率,計算平均回收率及相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)?;厥章势骄涤糜谠u價準(zhǔn)確度,RSD值用于評價精密度,實驗結(jié)果見表2,13種化合物的回收率為94.6%~106.2%,RSD為1.2%~2.9%。

        表2 13種消化類化學(xué)藥物的回歸方程,相關(guān)系數(shù)和回收率Table 2 Regression equation,correlation coefficient(r) and recovery of digestive system drug

        2.6 基質(zhì)效應(yīng)與穩(wěn)定性

        取200 μg/L的QC溶液和200 μg/L的純?nèi)軇φ掌啡芤海謩e進(jìn)樣,計算響應(yīng)值百分比,即為基質(zhì)效應(yīng)。結(jié)果表明13種化合物的基質(zhì)效應(yīng)均在92.3%~105.6%之間,表明空白基質(zhì)對化合物響應(yīng)影響很小。

        用空白基質(zhì)配制200 μg/L的標(biāo)準(zhǔn)溶液,分別在1、2、4、6、8、12、24 h進(jìn)樣,以各化合物的提取離子峰面積為指標(biāo),代入標(biāo)準(zhǔn)曲線計算濃度與實際濃度的比值(穩(wěn)定性)在94.5%~102.8%之間,由此可見配制的標(biāo)準(zhǔn)溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

        2.7 實際樣品分析

        將建立的高分辨質(zhì)譜法用于156批生化藥品、38批中成藥、43批保健品中非法添加消化類化學(xué)藥物的篩查。比較供試品和對照品的提取離子色譜圖、一級質(zhì)譜和二級質(zhì)譜,若供試品某成分的保留時間、一級質(zhì)譜準(zhǔn)確質(zhì)量、碎片離子準(zhǔn)確質(zhì)量均與對照品一致,則判定該成分為非法添加物。

        經(jīng)篩查發(fā)現(xiàn),156批生化藥品均未檢出左卡尼汀等13種化學(xué)藥物,而5批中成藥中檢出西咪替丁(含量為1.4~17.9 mg/g),3批保健品中檢出多潘立酮(含量8.61~14.3 mg/g),代表性陽性樣品(檢出多潘立酮)圖譜見圖3所示。以上結(jié)果表明消化類化學(xué)藥物非法添加在中成藥和保健品中較為突出。另一方面,156批生化藥品均未檢出非法成分,可能與其來源是正規(guī)藥品企業(yè)有關(guān)。以上結(jié)果表明本文所建立的高通量HRMS法具有良好的可靠性。

        圖3 代表性陽性樣品YW201708461的提取離子色譜圖(A)、一級質(zhì)譜圖(B)和二級質(zhì)譜圖(C)Fig.3 Extracted ion chromatogram(A),MS(B) and MS2(C) spectra of digestive drugs in representative positive sample YW201708461

        3 結(jié) 論

        本研究建立了一種快速篩查非法添加消化類化學(xué)藥物的方法,可在10 min 內(nèi)同時測定13種消化類藥物。該法選擇性好、靈敏度高、快速簡便、可操作性強、準(zhǔn)確可靠,極大地提高了檢測效率,適用于生化藥品、中成藥及保健品非法添加檢測,已用于日常檢測工作中,為監(jiān)管相關(guān)非法添加提供了有力的技術(shù)支持。

        參考文獻(xiàn):

        [1] Choi J Y,Heo S,Yoo G J,Park S K,Yoon C Y,Baek S Y.FoodAddit.Contam.:A,2015,32(7):1029-1039.

        [2] Heo S,Choi J Y,Yoo G J,Park S K,Baek S Y.Biomed.Chromatogr.,2017,31(4):6.

        [3] Kim E H,Seo H S,Ki N Y,Park N H,Lee W,Do J A,Park S,Baek S Y,Moon B,Oh H B,Hong J.J.Chromatogr.A,2017,1491:43-56.

        [4] Huang Y C,Lee H C,Lin Y L,Li C Y,Tsai C F,Cheng H F.FoodAddit.Contam.:A,2016,33(2):179-185.

        [5] Li H,Zhu Q X,Chwee T S,Wu L,Chai Y F,Lu F,Yuan Y F.Anal.Chim.Acta,2015,883:22-31.

        [6] Lv D Y,Cao Y,Lou Z Y,Li S J,Chen X F,Chai Y F,Lu F.Anal.Bioanal.Chem.,2015,407(5):1313-1325.

        [7] Maier V,Znaleziona J,Jirovsky D,Skopalova J,Petr J,Sevcik J.J.Chromatogr.A,2009,1216(20):4492-4498.

        [8] Zubarev R A,Makarov A.Anal.Chem.,2013,85(11):5288-5296.

        [9] Jia W,Shi L,Chu X.FoodChem.,2018,239:427-433.

        [10] Marín-Sáez J,Romero-González R,Garrido F A.J.Chromatogr.A,2017,1518:46-58.

        [11] Cheng Q,Shou L,Chen C,Shi S,Zhou M.J.Chromatogr.B,2017,1064:92-99.

        [12] Wang S S,Xu H Y,Ma Y,Wang X G,Shi Y,Huang B,Tang S H,Zhang Y,Li D F,Liang R X,Yang H J.J.Pharm.Biomed.Anal.,2015,111(Suppl C):104-118.

        [13] Zuo L,Zhong Q,Wang Z,Sun Z,Zhou L,Li Z,Xu T,Shi Y,Tang J,Du S,Zhang X.J.Pharm.Biomed.Anal.,2017,146:347-353.

        [14] Li X,Shi F,Gong L,Hang B,Li D,Chi L.Int.J.Nanomed.,2017,12:4443-4454.

        [15] Huang X H,Guo C N,Chen Z L,Liu Y H,He L M,Zeng Z L,Yan C Q,Pan G F,Li S P.J.Chromatogr.B,2015,1000:147-154.

        猜你喜歡
        中成藥質(zhì)譜基質(zhì)
        老年人便秘,中成藥如何選擇
        中老年保健(2022年3期)2022-08-24 02:58:54
        機插秧育苗專用肥——機插水稻育苗基質(zhì)
        金銀花扦插育苗基質(zhì)復(fù)配及驗證
        氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀在農(nóng)殘檢測中的應(yīng)用及維護(hù)
        骨質(zhì)疏松怎樣選擇中成藥
        不同栽培基質(zhì)對一品紅扦插苗的影響
        北京園林(2020年4期)2020-01-18 05:16:46
        骨質(zhì)疏松怎樣選擇中成藥
        直干藍(lán)桉容器育苗基質(zhì)的選擇
        吹掃捕集-氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用測定水中18種揮發(fā)性有機物
        棗霜化學(xué)成分的色譜質(zhì)譜分析
        人妻激情偷乱视频一区二区三区| 精品亚洲不卡一区二区| 人妖与人妖免费黄色片| 亚洲视频一区二区三区视频| 成人午夜性a级毛片免费| 日本a在线看| 青青草视全福视频在线| 国产一区二区三区视频网| 亚洲 另类 日韩 制服 无码| 中日韩欧美在线观看| 国产女主播视频一区二区三区| 一区二区三区人妻av| 成 人免费va视频| 欧美日韩亚洲成色二本道三区 | 中文字幕人妻丝袜乱一区三区 | 人妻妺妺窝人体色www聚色窝| 日本高清色惰www在线视频| 日韩精品一区二区亚洲专区| 国产欧美性成人精品午夜| 夜爽8888视频在线观看| 国产精品一区二区午夜久久| 国产三级精品av在线| 久久青青草原亚洲av无码麻豆| 国产精品刺激好大好爽视频| 亚洲精品99久91在线| 米奇欧美777四色影视在线| 无码国产精品一区二区高潮| 中文字幕有码一区二区三区| 日本av不卡一区二区三区| 久久久久亚洲精品无码蜜桃| 国产99视频精品免费视频免里| 国产成人夜色在线视频观看| 好大好爽我要高潮在线观看| 久久精品国产www456c0m| 欧美精品v欧洲高清| 99久久精品人妻少妇一| 亚洲精品久久久久久久不卡四虎 | 日本亚洲中文字幕一区| 三叶草欧洲码在线| 99久久99久久久精品久久| 国产精品高清国产三级国产av|