王雪鵬　劉俊志　陳　雷　趙　政　張開治

(北華大學(xué)附屬醫(yī)院神經(jīng)外科，吉林　吉林　132000)

1吉林大學(xué)中日聯(lián)誼醫(yī)院

手術(shù)是目前膠質(zhì)瘤較為有效的治療手段，但術(shù)后極易復(fù)發(fā)，且由于其對(duì)周圍腦組織高侵襲性和放化療的抵抗，術(shù)后患者的預(yù)后改善并不理想，中位生存時(shí)間僅有12～15個(gè)月〔1〕。因此，尋求新的治療方法及靶點(diǎn)一直是當(dāng)下該領(lǐng)域研究的熱點(diǎn)〔2〕。膠質(zhì)瘤的發(fā)病機(jī)制仍不清楚，可能涉及多種癌基因與抑癌基因的改變。基質(zhì)金屬蛋白酶(MMPs)是一類具有廣泛的降解細(xì)胞外基質(zhì)能力的蛋白酶家族，近年來發(fā)現(xiàn)MMP-28可能參與某些腫瘤及炎癥過程，但其對(duì)老年膠質(zhì)瘤的預(yù)后評(píng)估研究仍相對(duì)較少〔3,4〕。本研究通過檢測(cè)老年膠質(zhì)瘤患者術(shù)后MMP-28表達(dá)，分析其與臨床病理特點(diǎn)及預(yù)后的關(guān)系。

1　資料與方法

1.1一般資料選取2010年1月至2015年12月北華大學(xué)附屬醫(yī)院神經(jīng)外科及吉林大學(xué)中日聯(lián)誼醫(yī)院神經(jīng)外科收治的老年膠質(zhì)瘤患者68例。入組標(biāo)準(zhǔn)：①所有患者經(jīng)術(shù)后石蠟包埋和組織切片后確定病理診斷，且臨床資料齊全者。②術(shù)前均未接受任何化療、放療及其他抗腫瘤治療。③排除自身免疫性疾病、合并其他惡性腫瘤及嚴(yán)重心肝腎功能障礙。男37例，女31例；年齡60～79〔平均(66.4±3.9)〕歲；病灶直徑：1.4～5.7〔平均(2.4±0.8)〕mm；病灶部位額葉30例，顳葉18例，枕葉12例，頂葉8例；病理分期Ⅰ期9例，Ⅱ期30例，Ⅲ期13例，Ⅳ期16例。另外選擇50例因顱腦損傷行減壓術(shù)中切除的正常腦組織，年齡60～76〔平均(65.7±4.6)〕歲。兩組年齡、性別構(gòu)成比等基本資料比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

1.2方法所有標(biāo)本在手術(shù)切除后10 min內(nèi)行10%中性甲醛固定，石蠟包埋。采用免疫組化法(二步法)，將切片制成3 μm厚度的連續(xù)石蠟切片4張，常規(guī)二甲苯脫蠟、酒精梯度水化、10 mmol/L枸櫞酸鹽緩沖液(pH6.0)抗原熱修復(fù)、再染色。鼠抗人MMP-28單克隆抗體、二氨基聯(lián)苯胺(DAB)均購(gòu)自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司，結(jié)果由2名以上富有經(jīng)驗(yàn)的病理醫(yī)師共同診斷。

1.3免疫組化結(jié)果判讀MMP-28著色主要位于膠質(zhì)細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)、細(xì)胞間質(zhì)。判讀結(jié)果包括2個(gè)部分，分別為染色強(qiáng)度和染色細(xì)胞數(shù)量。具體方法如下：①染色強(qiáng)度：隨機(jī)選擇10個(gè)視野，計(jì)數(shù)1 000個(gè)陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)進(jìn)行半定量分級(jí)計(jì)分〔5〕，包括無著色(0分)、淡黃色(1分)、棕黃色(2分)、棕黃色(3分)；②染色細(xì)胞數(shù)量(以染色的陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)百分比表示)：分為≤5%(0分)、6%～25%(1分)、26%～50%(2分)、≥51%(3分)。將染色強(qiáng)度與染色細(xì)胞數(shù)量的得分相乘后即得到陽(yáng)性評(píng)分，其中0、1分為陰性(-)，2～3分為弱陽(yáng)性(+)，4～6分為中度陽(yáng)性()，7～9分為強(qiáng)陽(yáng)性()。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS20.0軟件進(jìn)行χ2或秩和檢驗(yàn)，采用Kaplan-Meier生存分析法分析MMP-28的表達(dá)與中位生存期的相關(guān)性。

2　結(jié)　果

2.1膠質(zhì)瘤組織與正常腦組織MMP-28蛋白表達(dá)水平比較MMP-28蛋白在膠質(zhì)瘤組織中的陽(yáng)性表達(dá)率(63.2%)及表達(dá)程度(-25例，+26例，11例，6例)均顯著高于正常腦組織陽(yáng)性表達(dá)率(12.0%，χ2=31.15，P<0.001)和表達(dá)程度(-44例，+5例，1例，0例，U=31.78，P<0.001)。

2.2MMP-28在膠質(zhì)瘤組織中的表達(dá)與臨床特點(diǎn)的關(guān)系隨著膠質(zhì)瘤病理分期、病灶直徑的增加，膠質(zhì)瘤組織中MMP-28蛋白陽(yáng)性表達(dá)率明顯升高(P<0.05)，而與年齡、性別、組織分型、病灶部位無明顯相關(guān)(P>0.05)。見表1。

表1　MMP-28在膠質(zhì)瘤組織中的表達(dá)與臨床特點(diǎn)的關(guān)系(n)

2.3MMP-28的表達(dá)與預(yù)后的相關(guān)性Kaplan-Meier生存分析法顯示，MMP-28陽(yáng)性膠質(zhì)瘤患者中位生存期為17.5(95%CI:15.3～19.7)個(gè)月，MMP-28陰性者中位生存期為20.2(95%CI:18.7～21.7)個(gè)月。經(jīng)Log-rank檢驗(yàn)，MMP-28陽(yáng)性者的中位生存期顯著低于陰性者(χ2=7.03，P=0.08)，見圖1。

圖1　膠質(zhì)瘤患者M(jìn)MP-28蛋白表達(dá)水平與中位生存期的關(guān)系

3　討　論

膠質(zhì)瘤的生物學(xué)特性復(fù)雜多樣，發(fā)展過程中可發(fā)生核分裂象增多、異型性改變及血管內(nèi)皮增生壞死等形態(tài)學(xué)改變，但其共同特點(diǎn)是惡性程度高，多呈侵襲性生長(zhǎng)，與正常腦組織界限不清，且由于所處位置的特殊性，手術(shù)難以完整切除，術(shù)后易出現(xiàn)原位復(fù)發(fā)〔6〕。與此同時(shí)，膠質(zhì)瘤細(xì)胞對(duì)常用化療藥物具有一定抗性，且血腦屏障和劑量限制都極大影響了術(shù)后輔助放化療的應(yīng)用效果〔7,8〕。近年研究發(fā)現(xiàn)，MMPs家族的表達(dá)異常與膠質(zhì)瘤的病理過程密切相關(guān)，MMPs可通過破壞腫瘤細(xì)胞周圍的細(xì)胞外基質(zhì)、抑制腫瘤新生血管形成、調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞的黏附作用等多種途徑發(fā)揮抗腫瘤作用〔9〕。本研究說明MMP-28在老年膠質(zhì)瘤的發(fā)生中發(fā)揮重要作用，可能與其惡性生物學(xué)行為有關(guān)。MMP-28的表達(dá)、活化直接影響膠質(zhì)瘤的侵襲性，膠質(zhì)瘤細(xì)胞系的侵襲性越強(qiáng)，其分泌的MMP-28越多。MMP-28可通過水解細(xì)胞外基質(zhì)中的酶及蛋白質(zhì)，并與其他MMPs家族成員共同參與腫瘤的侵襲、轉(zhuǎn)移過程。同時(shí)，隨著膠質(zhì)瘤病灶直徑、臨床分期的增加，膠質(zhì)瘤組織中MMP-28陽(yáng)性率明顯升高，與其他腫瘤的研究結(jié)果一致〔10,11〕，說明MMP-28的表達(dá)與膠質(zhì)瘤的侵襲力呈正比，一定程度上反映其病情和惡性程度，推測(cè)其可能原因是MMP-28的表達(dá)上調(diào)，促進(jìn)了腫瘤血管形成，從而增強(qiáng)了腫瘤細(xì)胞的侵性生長(zhǎng)、遷移能力〔12〕。

本研究表明MMP-28表達(dá)水平是膠質(zhì)瘤術(shù)后患者預(yù)后的一種獨(dú)立影響因素，MMP-28的高表達(dá)往往預(yù)示著不良預(yù)后，故可考慮作為膠質(zhì)瘤術(shù)后患者預(yù)后的一個(gè)預(yù)測(cè)指標(biāo)和潛在的治療靶點(diǎn)。Illman等〔13〕研究發(fā)現(xiàn)，與MMP-28表達(dá)陰性的膠質(zhì)母細(xì)胞瘤患者比較，MMP-28陽(yáng)性表達(dá)者死亡風(fēng)險(xiǎn)指數(shù)為2.75，死亡風(fēng)險(xiǎn)極大增加。國(guó)外有研究表明，抑制MMP-28的表達(dá)可能成為膠質(zhì)瘤抗侵襲性治療的靶點(diǎn)，從而調(diào)控ECM的降解，降低膠質(zhì)瘤細(xì)胞對(duì)周圍正常腦組織的侵襲力，改善預(yù)后〔14〕。

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