楊　萍　楊　帆　趙　月　邵　震　王夢潔　李宇軒　吳智春

(山東中醫(yī)藥大學(xué)中醫(yī)學(xué)院，山東　濟南　250355)

高血壓常伴重要靶器官損傷，左室肥厚(LVH)被公認(rèn)為是無心血管疾病的高血壓患者心血管病發(fā)病和死亡的獨立危險因子，是心力衰竭的前期病變〔1〕。病理狀態(tài)下，心肌膠原合成與降解失去平衡，膠原纖維不呈比例增生，導(dǎo)致心肌間質(zhì)纖維化，造成心肌肥厚及心功能不全〔2〕，使心力衰竭和猝死的風(fēng)險增加。中醫(yī)藥可多途徑、多向性拮抗腎素血管緊張素系統(tǒng)，減少心血管危險事件的發(fā)生〔3〕，在高血壓治療中具有降壓平穩(wěn)、有效保護靶器官、最大程度地減少不良反應(yīng)等明顯優(yōu)勢。臨床研究顯示，滋腎活絡(luò)方在平穩(wěn)降壓的同時可有效改善心功能〔4〕。本研究擬觀察滋腎活絡(luò)方聯(lián)合培哚普利對血壓及LVH的影響。

1　材料與方法

1.1實驗動物雄性自發(fā)性高血壓大鼠(SHR)24只，同源正常血壓(WKY)雄性大鼠8只，均為15周齡，購自北京維通利華實驗。動物中心，動物許可證號：SCXK(京)2012-0001。飼養(yǎng)條件：20℃～25℃，相對濕度50%～70%，12 h光照，自由攝食飲水。

1.2實驗試劑和儀器培哚普利(雅施達(dá))購自施維雅(天津)制藥有限公司，以蒸餾水溶解。滋腎活絡(luò)方由玄參、懷牛膝、黃連、毛冬青、丹皮、益母草、葶藶子和肉桂組成，諸藥均以典籍中工人的地道藥材，常規(guī)煎煮濃縮。水合氯醛，天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司；0.9%氯化鈉注射液，山東華魯制藥有限公司；BP-98A型智能無創(chuàng)尾血壓計-鼠儀，北京軟隆生物技術(shù)有限公司；Multiskan Mk3型酶標(biāo)儀，賽默飛世爾(上海)儀器有限公司；JA5003N電子天平，上海精密科學(xué)儀器有限公司。

1.3分組及給藥所有大鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)1 w后，SHR隨機分為模型組、培哚普利組和聯(lián)合用藥組各8只；另以WKY大鼠8只作為正常對照組。培哚普利組和聯(lián)合用藥組均給予培哚普利水溶液灌胃，1 mg/kg；聯(lián)合用藥組另給予滋腎活絡(luò)方灌胃，10.7 g生藥/kg，培哚普利組另給予等容量生理鹽水灌胃；模型組和正常對照組予等容量生理鹽水灌胃，2次/d。

1.4觀察指標(biāo)采用大鼠無創(chuàng)尾血壓測定法，分別于給藥0、4、8、12 w測量大鼠清醒狀態(tài)下平均動脈壓(MBP)，每只測量3次，取平均值。給藥12 w后，腹主動脈采血，分離血清，酶聯(lián)免疫吸附(ELISA)法檢測血清Ⅰ型前膠原羧基端前肽(PICP)、Ⅰ型膠原羧基末端交聯(lián)肽(ICTP)濃度，計算PICP/ICTP值。立即剖胸取出心臟,沿房室交界處去除大血管、心房、右心室游離壁,預(yù)冷的磷酸鹽緩沖液(PBS)沖洗,濾紙拭干后準(zhǔn)確稱取左心室質(zhì)量(LVM)，計算左室質(zhì)量指數(shù)(LVMI)，LVMI=LVM/體重。取大鼠心尖部心室肌組織，固定包埋制作石蠟切片，蘇木素-伊紅(HE)染色，觀測心肌細(xì)胞形態(tài)并照相。

1.5統(tǒng)計學(xué)方法應(yīng)用SPSS17.0軟件行單因素方差分析。

2　結(jié)　果

2.1動脈血壓動態(tài)變化不同時間點，模型組MBP均顯著高于正常對照組(P<0.05)。0 w時，模型組與各藥物組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。與模型組比較，聯(lián)合用藥組4、8、12 w MBP顯著降低(P<0.05)；培哚普利組8 w和12 w MBP顯著降低(P<0.05)。與培哚普利組比較，聯(lián)合用藥組4、8、12 w MBP均顯著降低(P<0.05)。見表1。

表1　各組MBP、體重、LVM、LVMI比較

與模型組比較：1)P<0.05；與培哚普利組比較：2)P<0.05；下表同

2.2各組LVM和LVMI比較正常對照組大鼠體重顯著高于其余三組(P<0.05)；SHR各組之間體重差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。培哚普利組和聯(lián)合用藥組LVM顯著低于模型組(P<0.05)，用藥組之間差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。正常對照組LVMI顯著低于模型組(P<0.05)；培哚普利組和聯(lián)合用藥組LVMI顯著低于模型組(P<0.05)，且聯(lián)合用藥組顯著低于培哚普利組(P<0.05)。見表1。

2.3各組血清PICP、ICTP濃度及PICP/ICTP比值見表2。模型組PICP濃度和PICP/ICTP比值顯著高于正常對照組，ICTP水平顯著低于正常對照組(均P<0.05)；聯(lián)合用藥組血清PICP濃度、PICP/ICTP比值均顯著低于模型組(均P<0.05)；培哚普利組與模型組比較上述指標(biāo)差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。

表2　各組血清PICP、ICTP、PICP/ICTP比較

2.4心肌形態(tài)學(xué)比較見圖1。HE染色可見正常對照組大鼠心肌細(xì)胞排列整齊、致密、結(jié)構(gòu)清晰，細(xì)胞核大小均一，胞質(zhì)染色均勻；模型組大鼠心肌細(xì)胞肥大、扭曲、排列紊亂、細(xì)胞核大小不規(guī)則，可見大量心肌纖維斷裂，心肌細(xì)胞間隙明顯擴大。用藥組上述病變減輕，以聯(lián)合用藥組效果最明顯。

圖1　大鼠心室肌縱切面圖(HE染色，×40)

3　討　論

隨著高血壓病程延長，心臟為維持正常泵血功能，通過結(jié)構(gòu)的改變對過度的壓力負(fù)荷進行代償，導(dǎo)致 LVH的產(chǎn)生。LVH病程進展過程中，心肌質(zhì)量增加，心室結(jié)構(gòu)重塑，進而成為充血性心力衰竭和復(fù)雜室性心律失常發(fā)生的獨立危險因素〔5〕。因此，臨床治療高血壓，不僅要控制血壓水平，更重要的是預(yù)防和逆轉(zhuǎn)LVH，降低心血管并發(fā)癥和病死率〔6〕，改善患者預(yù)后。

SHR是目前國際公認(rèn)最接近人類高血壓的動物模型，7～8周齡逐漸發(fā)生LVH，14周齡時血壓持續(xù)增高且心肌肥厚表型已經(jīng)非常顯著〔7〕。本實驗結(jié)果也證實該實驗動物具有較典型的高血壓LVH的病變特點，是一種用于該類疾病研究的較好模型。

LVH不僅存在心肌細(xì)胞肥大，同時伴有心肌間質(zhì)纖維化〔8〕，而心肌間質(zhì)膠原沉積是導(dǎo)致心肌纖維化的主要機制。心肌間質(zhì)主要由心肌成纖維細(xì)胞分泌的膠原纖維構(gòu)成，對維持心臟正常形態(tài)和功能起重要作用〔9〕。Ⅰ型心肌膠原纖維約占總膠原纖維的90%，生理狀態(tài)下，心肌膠原的合成與降解處于動態(tài)平衡，若這種平衡被打破，心肌膠原纖維不呈比例增生，將導(dǎo)致心肌間質(zhì)纖維化，造成心肌肥厚及心功能不全〔2〕，使發(fā)生心衰和猝死的風(fēng)險增加。PICP在膠原合成時被特異性蛋白酶酶切釋放入血，被認(rèn)為是體內(nèi)Ⅰ型膠原合成的指標(biāo)； ICTP為在Ⅰ型膠原降解過程中，被基質(zhì)金屬蛋白酶蛋白水解系統(tǒng)水解后的特異性蛋白，是I型膠原蛋白降解的標(biāo)志〔10〕。血清PICP是臨床間接評價左室重構(gòu)的較好指標(biāo)，血清PICP/ICTP比值升高被視作心肌膠原累積的標(biāo)志〔11〕，本實驗結(jié)果顯示模型大鼠存在心肌膠原沉積。

高血壓LVH屬中醫(yī)“風(fēng)眩并心脹”范疇，風(fēng)眩與肝火交織日久導(dǎo)致腎陰暗耗；病患多為中老年人，出現(xiàn)腎精虧虛，天癸竭的生理性腎虛；高血壓病程較長，久病及腎，諸多因素均加重腎精虧耗〔12〕；且治療過程中某些藥物的反應(yīng)亦可加重病理性腎虛〔5〕。由此可見，高血壓LVH雖病位在心，然病本在腎，腎陰不足貫穿本病始終?！白棠I活絡(luò)方”是基于補腎降壓治則治法形成的治療高血壓的經(jīng)驗方〔4〕，方中玄參清熱養(yǎng)陰，懷牛膝補肝腎、強腰膝、破血行瘀，共為君藥；黃連清熱燥濕，瀉火解毒，并有擴張血管、抗心律失常、抑制血栓形成之效；毛冬青清熱解毒；丹皮清熱涼血、活血散瘀，有防治動脈硬化之作用；益母草活血利尿、消腫；葶藶子瀉肺氣、行水，消腫；肉桂補火助陽，活血通經(jīng)，引火歸元。諸藥相伍，補中有瀉，升中有降，且皆入腎經(jīng)，可增強滋補腎陰之效。前期臨床研究顯示，本方在改善高血壓患者腎虛證的同時，能夠平穩(wěn)降壓，有效保護靶器官〔4〕。

本研究結(jié)果提示滋腎活絡(luò)方能夠提高培哚普利療效，有效降低SHR動脈血壓、減小左室質(zhì)量指數(shù)、糾正Ⅰ型膠原合成與降解的不平衡、抑制心肌肥大和心肌纖維化的病理性改變，有效控制LVH進程。

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