文/周慶民　馮萬宇*　徐 馨　張 艷

（黑龍江省獸醫(yī)科學研究所）

乳房炎是奶牛生產(chǎn)中最常見、最多發(fā)的疾病之一[1～3]，由于奶牛乳房炎發(fā)病原因復雜，治愈較難，其一旦發(fā)生，帶來的損失巨大[4～6]，因此，對于奶牛乳房炎必須早期診斷，采取有效措施在患病的初期就抑制或控制其發(fā)展，快速恢復，同時采取預(yù)防措施，最大限度地減少因本病的發(fā)生造成的經(jīng)濟損失[7～9]。為了驗證奶牛乳房炎早期診斷試劑盒臨床使用效果，本文對此進行了應(yīng)用效果試驗，取得了理想結(jié)果。

1　材料與方法

1.1　試驗?zāi)膛?/h3>

黑龍江省齊齊哈爾市梅里斯區(qū)奶牛養(yǎng)殖繁育基地，品種為中國荷斯坦奶牛。選擇3～6歲、產(chǎn)犢3～7個月的健康、無乳房炎臨床癥狀產(chǎn)奶牛318頭。

1.2　試驗藥品

奶牛乳房炎早期診斷試劑盒，黑龍江省獸醫(yī)科學研究所研制生產(chǎn)，生產(chǎn)批號為20150726；奶牛隱性乳房炎診斷液，黑龍江省獸醫(yī)科學研究所研制生產(chǎn)，生產(chǎn)批號為20150717。

1.3　飼養(yǎng)管理

舍飼，用TMR飼料每日飼喂3次，精飼料以玉米、豆粕為主，粗飼料以青貯玉米、羊草為主，精飼料與粗飼料搭配均勻，科學合理，營養(yǎng)均衡。飼料配方：青貯玉米43.8%、羊草10.5%、胡蘿卜1.2%、玉米22.6%、麩皮6.3%、豆粕13.7%、磷酸氫鈣0.5%、石粉0.9%、食鹽0.5%、產(chǎn)奶凈能6.967MJ/kg DM、粗蛋白質(zhì)17.6%、酸性洗滌纖維20.1%、鈣0.66%、磷0.42%。提供充足飲水，自由運動，機械化擠奶，1日3次。

1.4　試驗方法

常規(guī)飼養(yǎng)，專人管理。不改變奶牛原生產(chǎn)環(huán)境、飼養(yǎng)管理人員、飼喂方法、擠奶方法等。在擠奶前，按擠奶操作程序?qū)⑷轭^水洗、消毒、擦凈，擠去前3把奶后，擠入采樣器10mL，編號，同時記錄奶牛耳號，低溫保存。

同時用奶牛乳房炎顯微鏡體細胞計數(shù)法、奶牛隱性乳房炎診斷液、早期診斷試劑盒[10]對同一奶樣進行檢測。

1.5　判斷標準

顯微鏡體細胞計數(shù)法判斷標準：每毫升含體細胞個數(shù)，單位為萬/mL?！?”為29萬個/mL以下；“±”為30萬～49萬個/mL；“+”為50萬～79萬個/mL；“++”為80萬～149萬個/mL；“+++”為150萬～499萬個/mL；“++++”為500萬個/mL以上。

表1　顯微鏡體細胞計數(shù)法檢測結(jié)果

表2　隱性乳房炎診斷液檢測結(jié)果

表3　早期診斷試劑盒檢測結(jié)果

奶牛隱性乳房炎診斷液判斷標準：凝乳試驗無變化、混合物呈液狀、盤底無沉淀物可見（體細胞數(shù)在29萬個/mL以下），判斷為“-”；凝乳試驗略有變化、混合物呈液狀、盤底可出現(xiàn)微量沉淀、繼續(xù)搖晃即消失（體細胞數(shù)在30萬～49萬個/mL），判斷為“±”；凝乳試驗反應(yīng)輕微、反應(yīng)緩慢、盤底出現(xiàn)少量黏性沉淀、但不成膠狀、流動性大、搖動時沉淀物散布于盤底、并有一定的黏附性（體細胞數(shù)在50萬～79萬個/mL），判斷為“+”；凝乳試驗反應(yīng)明顯、反應(yīng)速度較快、盤底出現(xiàn)較多黏稠沉淀、呈膠狀、傾斜檢驗盤時沉淀物有明顯黏附于盤底面、并難以流動、旋轉(zhuǎn)檢驗盤時膠狀物有聚中心傾向（體細胞數(shù)在80萬～149萬個/mL），判斷為“++”；凝乳試驗反應(yīng)較重、反應(yīng)速度快、混合物幾乎完全形成膠狀物、并黏附于盤底、旋轉(zhuǎn)檢驗盤時難以散開（體細胞數(shù)在150萬～499萬個/mL），判斷為“+++”；凝乳試驗反應(yīng)嚴重、反應(yīng)瞬間完成、混合物立即呈膠狀物、牛奶尚未與診斷液完全混合就已經(jīng)凝成膠狀、牛奶出現(xiàn)夾心現(xiàn)象（體細胞數(shù)在500萬個/mL以上），判斷為“++++”。

奶牛乳房炎早期診斷試劑盒判斷標準：“-”為陰性，淺藍綠色（體細胞數(shù)為0～29萬個/mL）；“±”為疑似，淺綠色（體細胞數(shù)為30萬～49萬個/mL）；“+”為弱陽性，淡綠色（體細胞數(shù)為50萬～79萬個/mL）；“++”為陽性，綠色（體細胞數(shù)為80萬～149萬個/mL）；“+++”為強陽性，深綠色（體細胞數(shù)為150萬～499萬個/mL）；“++++”為極強陽性，墨綠色（體細胞數(shù)多于500萬個/mL）。

2　結(jié)果與分析

2.1　應(yīng)用顯微鏡體細胞計數(shù)法檢測奶牛乳房炎發(fā)病情況

由表1可以看出，檢測318頭奶牛中，體細胞數(shù)在49萬個/mL以下的奶牛201頭，占總數(shù)的63.21%；體細胞數(shù)在50萬個/mL以上的奶牛117頭，占總數(shù)的36.79%。

2.2　應(yīng)用奶牛隱性乳房炎診斷液檢測奶牛乳房炎發(fā)病情況

由表2可以看出，檢測318頭奶牛中，乳房炎陰性（-、±都判為陰性）牛218頭，占總數(shù)的68.55%；乳房炎陽性（+、++、+++、++++）牛100頭，占總數(shù)的31.45%。

2.3　應(yīng)用奶牛乳房炎早期診斷試劑盒檢測奶牛乳房炎發(fā)病情況

由表3可以看出，檢測318頭奶牛中，乳房炎陰性（-、±都判為陰性）牛206頭，占總數(shù)的64.78%；乳房炎陽性（+、++、+++、++++）牛112頭，占總數(shù)的35.22%。

2.4　三種診斷方法對比

圖1　三種方法檢測結(jié)果曲線圖

由圖1可以看出，三種方法檢測結(jié)果曲線圖走勢相似，但早期診斷試劑盒檢測結(jié)果曲線圖與顯微鏡體細胞計數(shù)檢測結(jié)果曲線圖更接近，說明早期診斷試劑盒檢測奶牛乳房炎準確率高。以顯微鏡體細胞計數(shù)法檢測結(jié)果為基準，奶牛隱性乳房炎診斷液法檢測準確率為94.65%，而早期診斷試劑盒檢測準確率為98.43%。

3　討論

3.1本試驗采用的三種奶牛乳房炎檢測方法都能較準確地檢出奶牛早期乳房炎的發(fā)生。顯微鏡體細胞計數(shù)檢測法是實驗室最基本的方法，準確性高，其它各種方法都以此為標準，確定其準確率，但操作復雜，技術(shù)性要求高，需要時間較長，耗時費力，可以用于實驗室確診，不太適合生產(chǎn)應(yīng)用，不易推廣應(yīng)用；隱性乳房炎診斷液使用簡

單、方便、快速，在現(xiàn)場就可快速操作，但使用時存在不是每頭牛都更換一個干凈診斷盤的情況，這樣導致在連續(xù)使用過程中因為沖洗診斷盤不干凈，影響反應(yīng)效果，容易出現(xiàn)誤差；奶牛乳房炎早期診斷試劑盒同樣具有隱性乳房炎診斷液使用簡單、方便、快速、在現(xiàn)場就可快速操作等優(yōu)點，而且單獨包裝，每頭牛1份，互不干擾，檢測結(jié)果準確，達到98.43%。

3.2本試驗?zāi)膛Ｊ沁x擇無臨床型乳房炎產(chǎn)奶牛，發(fā)生乳房炎的奶牛也是處于發(fā)病早期，乳汁中體細胞數(shù)量還不是特別多，超過150萬個/mL的牛只較少，多數(shù)集中在50萬～150萬個/mL。另外，這時病情還沒特別嚴重，對乳腺的損傷比較輕微，如果能夠及時發(fā)現(xiàn)乳房炎的發(fā)生，對于其治療，可以促使乳腺迅速恢復、快速治愈，是最佳時期。

3.3本試驗采取的三種檢測方法中，顯微鏡體細胞計數(shù)檢測法是對乳汁中體細胞逐個計數(shù)，累計每毫升乳中體細胞的數(shù)量；奶牛隱性乳房炎診斷液是采用表面活性劑使乳汁產(chǎn)生沉淀或形成凝塊，根據(jù)沉淀或形成凝塊的強弱，判定乳汁中體細胞數(shù)的范圍；早期診斷試劑盒是裂解乳汁中體細胞，釋放DNA，對DNA進行染色，根據(jù)染色變化判斷體細胞的數(shù)量。奶牛隱性乳房炎診斷液和早期診斷試劑盒都是間接地對體細胞進行計數(shù)。從使用情況和準確性等綜合來看，早期診斷試劑盒占有一定優(yōu)勢，在生產(chǎn)中容易推廣應(yīng)用。

3.4在奶牛乳房炎發(fā)生初期，臨床癥狀還不明顯，還處于隱性時期，其明顯的標志是牛乳中體細胞數(shù)量增多，但臨床中很難發(fā)現(xiàn)，因此，對乳房炎早期診斷，就能早期發(fā)現(xiàn)，及時采取有效措施，積極防治，有效地控制乳房炎的發(fā)展，最大限度地減少因乳房炎發(fā)生造成的損失。奶牛乳房炎早期診斷試劑盒的研制，很好地解決了奶牛生產(chǎn)中這一難題，簡便、快速、準確，對于及時預(yù)防、控制、治療奶牛乳房炎具有重要的作用。

4　結(jié)論

以顯微鏡體細胞計數(shù)法檢測結(jié)果為基準，奶牛隱性乳房炎診斷液法檢測準確率為94.65%，而早期診斷試劑盒檢測準確率為98.43%。乳房炎早期診斷試劑盒比隱性乳房炎診斷液的診斷準確率高3.78個百分點，更趨近于顯微鏡體細胞計數(shù)法的檢測結(jié)果。C

[1] 李宏勝，郁杰，羅金印，等. 我國部分地區(qū)個體奶牛場乳房炎細菌學調(diào)查[J]. 中獸醫(yī)醫(yī)藥雜志，2002，21（6）：14-17.

[2] 肖定漢. 奶牛病學[M]. 北京：中國農(nóng)業(yè)大學出版社，2002.

[3] 王建軍，稅麗. 奶牛乳房炎致病機理研究進展[J]. 中國畜牧獸醫(yī)，2009，36（12）：100-103.

[4] 薛永康，王新莊，閆躍飛，等. 奶牛乳房炎診斷方法研究進展[J]. 湖北畜牧獸醫(yī)，2016，37（8）：15-18.

[5] 陳國燦，王九峰，金嘉，等. 奶牛隱性乳房炎診斷新方法探討[J]. 中國獸醫(yī)雜志，2005，41（9）：31-32.

[6] 甘宗輝. 奶牛隱性乳房炎的發(fā)病特性及其對乳成分的影響：[碩士論文][D]. 揚州：揚州大學，2013.

[7] 魏光河，熊濤. 4種方法檢測奶牛隱性乳房炎的結(jié)果比較及分析[J]. 中國獸醫(yī)學報，2010，30（8）：1103-1106.

[8] 張廣斌. 奶牛隱性乳房炎檢測方法的比較研究[J]. 山東畜牧獸醫(yī)，2012，33（8）：6-8.

[9] 伊嵐. 奶牛乳房炎MT T檢測方法的建立和藥敏試驗研究：[碩士論文][D]. 楊陵：西北農(nóng)林科技大學，2005.

[10] 馮萬宇，周慶民，徐馨，等. 奶牛體細胞裂解方法的研究進展[J]. 養(yǎng)殖與飼料，2016（10）：6-7.