張　雨， 陳愛華， 吳楊平， 曹　奕， 姚國興

(江蘇省海洋水產(chǎn)研究所，江蘇南通 226007)

文蛤(M.meretrix)是我國沿海常見的一種重要經(jīng)濟貝類，隸屬于軟體動物門(Mollusca)、雙殼綱(Lamellibranchia)、異齒亞綱(Heterodonta)、簾蛤目(Veneroida)、簾蛤科(Veneridae)，為廣溫、廣鹽性埋棲型雙殼貝類。以遼寧遼河口沿海、山東萊州灣沿海、江蘇南部沿海、廣西合浦沿海和臺灣地區(qū)西部沿海的資源最為豐富[1]。目前，我國文蛤產(chǎn)業(yè)由于過度捕撈，以及文蛤棲息地的人為破壞，致使文蛤的資源量銳減，且養(yǎng)殖苗種多來自于未經(jīng)人工選擇的野生群體，由于野生環(huán)境與養(yǎng)殖環(huán)境有差異，野生苗種用于人工養(yǎng)殖的適應(yīng)性差，制約了文蛤養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)的發(fā)展。據(jù)了解，近年來江蘇地區(qū)出口文蛤數(shù)量以及貨值均有明顯下降。這很大程度上是因為沒有優(yōu)質(zhì)高值的文蛤品種，以及文蛤產(chǎn)量的下降。因此，對其進行優(yōu)良性狀選擇的遺傳改良，培育生長速度快、品質(zhì)優(yōu)、抗逆性強的新品種是解決文蛤養(yǎng)殖業(yè)目前存在問題的途徑之一。

為選育優(yōu)質(zhì)、高產(chǎn)、抗逆的文蛤良種，2007年開始，江蘇省海洋水產(chǎn)研究所文蛤良種場即開始了紅殼色文蛤新品種的選育。2009年開始建立紅殼色文蛤子1代選育系，經(jīng)過3代定向選育，培育出具有顯著形態(tài)特征的紅殼色的RRRF3選育系紅殼色文蛤。目前研究從早期生長[2]、消化酶[3]以及分子手段[4-5]比較了選育子代與普通殼色文蛤的差異，尚未見文蛤良種選育子代的養(yǎng)成比較。普通殼色文蛤子代殼色表型中基本上是普通殼色的，經(jīng)過選育的紅殼色選育子代殼色表型中基本上是紅殼色的，本研究利用這一表型特性做為標(biāo)記，以RRRF3選育系和自然對照組CG在室外開展同池(缸)的相同養(yǎng)殖密度的條件下的養(yǎng)殖對比試驗，以探究選育系RRRF3的生長特性，進而評價選育效果，補充紅殼色文蛤選育子代養(yǎng)殖數(shù)據(jù)，為今后的紅殼色文蛤選育工作提供指導(dǎo)依據(jù)。

1　材料與方法

1.1　試驗文蛤苗種的獲得

以紅殼色文蛤子2代為親本建成紅殼色文蛤子3代RRRF3選育系，同時以江蘇如東海區(qū)自然殼色文蛤為親本建立對照組CG，經(jīng)過幼蟲培育與附著稚貝培育以及室內(nèi)越冬后，獲得RRRF3與CG苗種。以此為試驗材料進行RRRF3與CG的養(yǎng)殖對比試驗。

1.2　RRRF3與CG的養(yǎng)殖對比試驗

利用RRRF3與CG殼色差異作為顯著區(qū)分標(biāo)記，通過同等條件下的養(yǎng)殖試驗，檢驗選育紅殼色文蛤的生長性能。根據(jù)養(yǎng)殖環(huán)境的不同分為同池塘綜合養(yǎng)殖比較和同圓缸養(yǎng)殖比較。在綜合養(yǎng)殖面積1.33 hm2的池塘中，用網(wǎng)片圈圍4 m×4 m的方形放苗區(qū)，將RRRF3與CG各16 000粒同數(shù)量混合后在區(qū)域放養(yǎng)。可控條件下養(yǎng)殖容器為面積3 m2的圓缸，RRRF3與CG各2 000粒同放養(yǎng)于1個缸中，試驗設(shè)計3個平行。為了計算3個試驗缸中RRRF3與CG的成活率，449日齡時起捕試驗中3個缸的所有文蛤，統(tǒng)計紅殼色與普通殼色個體數(shù)量，以計算RRRF3與CG的成活率。

1.3　相關(guān)指標(biāo)測定

RRRF3殼色穩(wěn)定且清晰可辨后，多次隨機取樣對殼色進行統(tǒng)計分析。殼色比例計算公式：

生長情況以殼長與粒質(zhì)量為指標(biāo)，電子數(shù)顯卡尺(精密度：±0.02 mm)與電子天平(精密度：±0.01 g)為測量工具。

日生長率計算公式為r=[(Lt/L0)1/t-1]×100%[6]。式中，r為日生長率(%)；Lt為結(jié)束時殼長(mm)；L0為開始時殼長(mm)；t為試驗天數(shù)(d)。

1.4　數(shù)據(jù)分析

數(shù)據(jù)均以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差(Mean±SD)表示，用Excel 2003作圖。使用SPSS 17.0進行統(tǒng)計分析，采用單因素方差(ANOVA)分析各生長期選系殼長的差異。

2　結(jié)果與分析

2.1　RRRF3與CG養(yǎng)殖對比試驗

2.1.1池塘養(yǎng)殖對比試驗由1圖可見，在養(yǎng)殖試驗中，RRRF3殼長生長快于CG。在245日齡至257日齡階段，兩者之間差異不顯著。至269日齡時，RRRF3殼長為5.42 mm，而CG殼長為 4.42 mm，兩者差異極顯著(P<0.05)。295日齡時，RRRF3殼長為7.16 mm，而CG殼長為4.93 mm，兩者差異極顯著(P<0.01)。此后的觀測中，RRRF3與CG的殼長差異極顯著(P<0.01)。表明隨著RRRF3的生長，生長優(yōu)勢越來越明顯。從245日齡至446日齡的觀測階段，RRRF3的日齡生長率為0.67，而CG的日齡生長率為0.61。

2.1.2圓缸養(yǎng)殖對比試驗由圖2可見，在各次取樣測量中，RRRF3殼長均大于CG。在245日齡RRRF3殼長為 5.24 mm，而CG殼長為4.4mm，兩者差異不顯著。至257日齡時，RRRF3殼長為6.14 mm，而CG殼長為4.42 mm，兩者差異極顯著(P<0.01)。此后的觀測中，兩者差異極顯著(P<0.01)。進一步說明隨著RRRF3生長，其生長優(yōu)勢越來越明顯。從245日齡至446日齡的觀測階段，RRRF3的日齡生長率為0.72，而CG的日齡生長率為0.70。

為了進一步探究圓缸養(yǎng)殖對比試驗中RRRF3與CG的生長及存活情況，449日齡時起捕3個圓缸養(yǎng)殖的所有文蛤，其文蛤生長存活情況見表1。3個平行試驗中的RRRF3的殼長均大于CG，殼長增長率為22.38%；粒質(zhì)量的增質(zhì)量率為68.21%。進一步說明與CG相比，RRRF3具明顯的生長優(yōu)勢。

3個平行試驗中RRRF3的成活率均高于對照組CG的。1號試驗圓缸中RRRF3的成活率為37.70%，CG的成活率為23.90%，RRRF3較CG高57.74%；2號試驗圓缸中RRRF3的成活率為80.40%，CG的成活率為69.30%，RRRF3較CG高16.02%；3號試驗圓缸中RRRF3的成活率為82.65%，CG的成活率為70.5%，RRRF3較CG高17.23%。1號試驗圓缸于2015年9月6日開始出現(xiàn)死亡現(xiàn)象，至9月16日趨于穩(wěn)定，可見在不利的環(huán)境條件下，RRRF3與CG相比顯示出了更強的抗逆性。

表1　圓缸養(yǎng)殖對比試驗中RRRF3與CG生長與存活情況

2.2　RRRF3的殼色表型

RRRF3文蛤殼色表型定義為紅殼色與非紅殼色2種，經(jīng)過多次隨機抽取RRRF3文蛤苗種取樣辨別殼色，取樣數(shù)量共計4 836粒，其中紅殼色文蛤4 592粒，紅殼色文蛤占比為94.95%(表2)。結(jié)果表明，經(jīng)過3代的殼色定向選育，文蛤殼色得到了穩(wěn)定遺傳。

3　討論

3.1　紅殼色文蛤子3代與對照組養(yǎng)殖效果差異分析

同池(缸)養(yǎng)殖生長比較試驗方法有效規(guī)避養(yǎng)殖環(huán)境條件差異而造成試驗組間的差異，確保數(shù)據(jù)的可靠性，它的重要前提是兩試驗組個體間存在持久可靠標(biāo)記。文蛤殼色是一個不隨環(huán)境條件變化而變化的質(zhì)量性狀。本試驗利用RRRF3的紅殼色作為區(qū)別于自然對照組的普通殼色的自身性狀標(biāo)記，比較兩者在同等養(yǎng)殖條件下的生長與存活情況。研究結(jié)果顯示，在室外養(yǎng)成階段，無論是池塘養(yǎng)殖條件下或圓缸中養(yǎng)殖RRRF3的生長快于自然對照組，且試驗中后期兩者差異極顯著(P<0.01)；缸養(yǎng)殖的3個平行組中RRRF3的存活率明顯高于CG的；存活率低的1#組試驗，RRRF3與CG兩者相比的差值大于另外2組的。這從一定程度上反映了在不利的環(huán)境下與CG相比，RRRF3顯示出了更強的抗逆性。

表2　RRRF3中紅殼色文蛤占比統(tǒng)計

3.2　紅殼色文蛤選擇育種效果的評估

選擇育種是通過不斷的對變異群體進行有計劃、有目的的反復(fù)篩選淘汰，增加群體內(nèi)有價值基因的出現(xiàn)頻率，降低不需要的基因頻率，以達到提高和穩(wěn)定主要經(jīng)濟性狀的目的，是培育新品種(系)的重要傳統(tǒng)方法[7-8]，已在水產(chǎn)育種中大規(guī)模應(yīng)用。

李國江等以“殼色-數(shù)量性狀復(fù)合選擇和自交-定向選育-小群體平衡”這一育種模式，培育出“中科紅海灣扇貝”新品種[9]。繼而張守都基于同代多點復(fù)合選育法和以家系構(gòu)建的方式，以紫色為標(biāo)記的基礎(chǔ)群體群體，進行了連續(xù)3年的群體選育，選育出生長性狀優(yōu)良的“中科2號”海灣扇貝新品系[10]。劉曉等通過對皺紋盤鮑紅殼色突變體進行定向選育和遺傳改良，育成了皺紋盤鮑“中國紅”(Chinese Red)品系[11]。何毛賢采用建系加選擇的育種技術(shù)培育出“南科珍珠紅”品系[12]。鄭懷平等經(jīng)過連續(xù)3代的選育，選育出了外觀色澤金黃、富含類胡蘿卜素以及具有抗氧化能力的華貴櫛孔扇貝“南澳1號”新品系[13]。該新品種貝殼、閉殼肌和外套膜均為金黃色，色澤純度達98.0%以上；在相同養(yǎng)殖條件下，1日齡類胡蘿卜素含量和10 ℃時的低溫耐受率分別是未經(jīng)選育的華貴櫛孔扇貝的10.8倍和2.9倍。閆喜武等是以福建莆田野生菲律賓蛤仔群體中選擇出的殼面具有斑馬紋的個體構(gòu)建基礎(chǔ)群體，以斑馬紋殼面為主要選育指標(biāo)采用群體選育技術(shù)，經(jīng)連續(xù)7代選育，培育出了菲律賓蛤仔新品種“斑馬蛤”[14]。在相同養(yǎng)殖條件下，與未經(jīng)選育的菲律賓蛤仔相比，2日齡生長速度差異不顯著，養(yǎng)殖成活率提高10.0%以上，對低溫、低鹽耐受力較強。杜曉東等以馬氏珠母貝野生子1代為基礎(chǔ)群體，以殼寬和殼長為選育指標(biāo)，采用群體選育輔以家系選育技術(shù)，經(jīng)連續(xù)5代選育出了馬氏珠母貝新品種“海選1號”[15]。在相同養(yǎng)殖條件下，與未經(jīng)選育的馬氏珠母貝相比，2日齡殼寬和殼長分別提高21.2%和20.8%，育珠期間母貝的留核率、珠層厚度和珍珠產(chǎn)量分別提高 22.3%、22.2%和24.7%。中國海洋大學(xué)“蓬萊紅”扇貝為基礎(chǔ)群體，采用家系選育結(jié)合個體選擇技術(shù)，開展BLUP和全基因組育種值評估，以生長速度為選育指標(biāo)，經(jīng)連續(xù)6代選育獲得櫛孔扇貝“蓬萊紅2號”[16]。在相同養(yǎng)殖條件下，2日齡貝平均殼高(8.61±0.43)cm，殼長(7.37±0.56)cm，較普通櫛孔扇貝生產(chǎn)用種增產(chǎn)53.46%，較“蓬萊紅”扇貝提高 25.43%，成活率較普通生產(chǎn)用種提高27.11%。

本研究中，以江蘇自然群體中的紅殼色群體為基礎(chǔ)群，以殼長生長以及紅殼色為選育指標(biāo)，采用群體選育輔以家系選育技術(shù)，經(jīng)連續(xù)選育，現(xiàn)已獲得紅殼色文蛤子3代。該選育系在生長與殼色純化中均獲得了較好的選育效果。生長上，無論是在池塘還是在圓缸中養(yǎng)殖，紅殼色文蛤均具有十分明顯的優(yōu)于普通殼色文蛤的生長快屬性；同時具有高成活的特性；在殼色純化方面，紅殼色純化比例從子1代的75%[17]增加至子2代的90%[2]，至子3代已達到了 94.95%，隨著世代的增加，殼色得到純化。再經(jīng)過多代的選育定能培育出具有特征殼色和優(yōu)良性狀的新品種。

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