高 松，宋 捷，林文棟，潘 強(qiáng)，彭 宇

（大連大學(xué) 醫(yī)學(xué)院，遼寧 大連 116622）

1 緒論

槲寄生為桑寄生科植物槲寄生Viscum coloratum（Kom.）Nakai的干燥帶葉莖枝，別名冬青、北寄生。功效為活血散瘀，疏通經(jīng)絡(luò)。用于治療風(fēng)濕性疾病及安胎等?，F(xiàn)代研究表明具有抗癌、調(diào)節(jié)免疫、調(diào)節(jié)血糖作用[1]。莊河市位于大連市北部地區(qū)，境內(nèi)山巒起伏，群峰疊嶂，屬千山山脈南延部分，森林、草場(chǎng)、植物資源豐富；其中槲寄生為其優(yōu)勢(shì)藥用資源。經(jīng)查中國(guó)期刊論文數(shù)據(jù)庫(kù)，未見(jiàn)關(guān)于莊河市產(chǎn)槲寄生質(zhì)量評(píng)定的相關(guān)報(bào)道。因此，為了保護(hù)該地區(qū)槲寄生的資源、并合理的開(kāi)發(fā)和利用好該植物資源，發(fā)展地區(qū)中藥產(chǎn)業(yè)，有必要對(duì)其質(zhì)量進(jìn)行評(píng)價(jià)，為今后的開(kāi)發(fā)利用提供理論依據(jù)。

2 實(shí)驗(yàn)材料和儀器

2.1 實(shí)驗(yàn)材料

供試品槲寄生于2018年3月采自莊河市，經(jīng)張素梅鑒定為桑寄生科植物槲寄生Viscum coloratum（Kom.）Nakai。

2.2 試劑

對(duì)照品：紫丁香苷，購(gòu)自北京世紀(jì)奧科生物技術(shù)有限公司，編號(hào)為C17H2409

甲醇：色譜純，批號(hào) 6000374475 Tedia，United States of America

磷酸（85%）：色譜純，批號(hào)201402122 天津市大茂化學(xué)試劑廠

甲醇、無(wú)水乙醇、75%乙醇、環(huán)己烷、乙酸乙酯、冰醋酸、鹽酸（均為分析純）

硅膠 羧甲基纖維素鈉

2.3 儀器

數(shù)控超聲波清洗器 KH-160TDE型 昆山禾創(chuàng)超聲儀器有限公司

高效液相色譜儀HITACHI LC2000 德國(guó)安捷倫公司

色譜柱（型號(hào)：ZORBAX Eclipse XDB-C18 4.6×250mm） 德國(guó)安捷倫公司

多用電熱套 DM型 龍口市先科儀器公司

3 實(shí)驗(yàn)方法

3.1 水分測(cè)試

根據(jù)《中華人民共和國(guó)藥典》通則-0832水分測(cè)定法中烘干法，測(cè)定莊河產(chǎn)槲寄生的含水量。槲寄生2 g，按照要求放入經(jīng)干燥后達(dá)到恒重的扁形稱量瓶，精密稱定。并按要求進(jìn)行測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 水分測(cè)試

3.2 總灰分測(cè)試

根據(jù)《中華人民共和國(guó)藥典》通則-2302總灰分測(cè)定法，測(cè)定莊河產(chǎn)槲寄生的總灰分。準(zhǔn)備供試品，粉碎后，過(guò)二號(hào)篩，混合均勻后準(zhǔn)確測(cè)量2 g，放入到事先已經(jīng)進(jìn)行燒灼，達(dá)到恒重狀態(tài)的坩堝中，準(zhǔn)確測(cè)量。并按要求加熱直至完全碳化。逐漸升溫，要求達(dá)到為500～600 ℃，完全灰化、恒重。平行測(cè)定3組，總灰分含量（%）。結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 灰分測(cè)試

3.3 酸不溶性灰分測(cè)試

將制得的灰份加入坩堝。將稀鹽酸10 m加入到坩堝之內(nèi)。覆蓋表面皿，水浴加熱10 min。用熱水沖洗表面皿，至5 mL，獲得洗液，加入坩堝之中。用無(wú)灰濾紙，進(jìn)行濾過(guò)，殘?jiān)盟磸?fù)洗滌，直到洗液無(wú)氯化物反應(yīng)。濾渣和濾紙放入干鍋內(nèi)干燥，熾灼，恒重，計(jì)算酸不溶性灰分含量（%）。結(jié)果見(jiàn)表2。

3.4 浸出物測(cè)定（熱浸法）

根據(jù)《中華人民共和國(guó)藥典》通則-2201浸出物（熱浸法）測(cè)定法，測(cè)定莊河產(chǎn)槲寄生的浸出物。

準(zhǔn)確稱量槲寄生2 g。放入容量為100～250 mL錐形瓶中，加入乙醇50～100 mL，密塞，稱重，靜置1 h。連接回流冷凝管，進(jìn)行提取，沸騰后，維持微沸1 h。靜置，冷卻，對(duì)稱重，并加入乙醇使重量與原來(lái)相同，搖勻。對(duì)上述溶液進(jìn)行過(guò)濾，取濾液25 mL，加入到蒸發(fā)皿當(dāng)中。用水域法蒸干，溫度要求為105℃，時(shí)間要求為3 h。冷卻30 min，精密測(cè)定體重。計(jì)算醇溶性浸出物含量（%）。

表3 浸出物含量

3.5 含量測(cè)定

照2015版藥典槲寄生項(xiàng)下高效液相色譜法測(cè)定。

供試品溶液 精確測(cè)量供試品細(xì)粉2 g，將供試品加入帶塞錐形瓶。將濃度為70%甲醛溶液25 mL加入到錐形瓶當(dāng)中，密塞，稱重。對(duì)其進(jìn)行超聲處理，靜置，冷卻，再次進(jìn)行測(cè)量。加入70%甲醛溶液，使重量與原來(lái)相當(dāng)，搖勻，濾過(guò)。

測(cè)定法 準(zhǔn)備對(duì)照品和供試品溶液，各吸取10μL，用液相色譜儀進(jìn)行測(cè)定，記錄結(jié)果。

均精密吸取紫丁香苷標(biāo)準(zhǔn)溶液2 μL，4 μL，6μL，8 μL，10 μL；取供試品溶液，均吸取 10 μL，用液相色譜儀測(cè)峰面積，進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)(X)，峰面積為縱坐標(biāo)(Y)，計(jì)算回歸方程[18]。

圖1 液相色譜儀測(cè)峰面積

圖2 供試品高效液相色譜圖

根據(jù)峰面積公式，y標(biāo)/y樣=(C標(biāo)×V標(biāo))/(C樣×V樣)，計(jì)算出:供試品溶液中紫丁香苷的含量為0.019%。

4 結(jié)論

2015版藥典規(guī)定：水分不得超過(guò)12.0%，總灰分不得超過(guò)9.0%，酸不溶性灰分不得超過(guò)2.5%。醇溶性浸出物不得超過(guò)20.0%，紫丁香苷含量不得少于0.040%。測(cè)試結(jié)果莊河市產(chǎn)槲寄生的水分含量為5.7%，總灰分含量為4.6%，酸不溶性灰分2.2%，均符合《藥典》的規(guī)定；但醇溶性浸出物含量為14.6%，紫丁香苷含量0.019%，不符合藥典的要求，故不能作為合格品入藥。就其原因可能與采集時(shí)間有關(guān)，有待于我們進(jìn)一步研究。