高 松,宋 捷,林文棟,潘 強(qiáng),彭 宇
(大連大學(xué) 醫(yī)學(xué)院,遼寧 大連 116622)
槲寄生為桑寄生科植物槲寄生Viscum coloratum(Kom.)Nakai的干燥帶葉莖枝,別名冬青、北寄生。功效為活血散瘀,疏通經(jīng)絡(luò)。用于治療風(fēng)濕性疾病及安胎等?,F(xiàn)代研究表明具有抗癌、調(diào)節(jié)免疫、調(diào)節(jié)血糖作用[1]。莊河市位于大連市北部地區(qū),境內(nèi)山巒起伏,群峰疊嶂,屬千山山脈南延部分,森林、草場(chǎng)、植物資源豐富;其中槲寄生為其優(yōu)勢(shì)藥用資源。經(jīng)查中國(guó)期刊論文數(shù)據(jù)庫(kù),未見(jiàn)關(guān)于莊河市產(chǎn)槲寄生質(zhì)量評(píng)定的相關(guān)報(bào)道。因此,為了保護(hù)該地區(qū)槲寄生的資源、并合理的開(kāi)發(fā)和利用好該植物資源,發(fā)展地區(qū)中藥產(chǎn)業(yè),有必要對(duì)其質(zhì)量進(jìn)行評(píng)價(jià),為今后的開(kāi)發(fā)利用提供理論依據(jù)。
供試品槲寄生于2018年3月采自莊河市,經(jīng)張素梅鑒定為桑寄生科植物槲寄生Viscum coloratum(Kom.)Nakai。
對(duì)照品:紫丁香苷,購(gòu)自北京世紀(jì)奧科生物技術(shù)有限公司,編號(hào)為C17H2409
甲醇:色譜純,批號(hào) 6000374475 Tedia,United States of America
磷酸(85%):色譜純,批號(hào)201402122 天津市大茂化學(xué)試劑廠
甲醇、無(wú)水乙醇、75%乙醇、環(huán)己烷、乙酸乙酯、冰醋酸、鹽酸(均為分析純)
硅膠 羧甲基纖維素鈉
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根據(jù)《中華人民共和國(guó)藥典》通則-0832水分測(cè)定法中烘干法,測(cè)定莊河產(chǎn)槲寄生的含水量。槲寄生2 g,按照要求放入經(jīng)干燥后達(dá)到恒重的扁形稱量瓶,精密稱定。并按要求進(jìn)行測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表1。
表1 水分測(cè)試
根據(jù)《中華人民共和國(guó)藥典》通則-2302總灰分測(cè)定法,測(cè)定莊河產(chǎn)槲寄生的總灰分。準(zhǔn)備供試品,粉碎后,過(guò)二號(hào)篩,混合均勻后準(zhǔn)確測(cè)量2 g,放入到事先已經(jīng)進(jìn)行燒灼,達(dá)到恒重狀態(tài)的坩堝中,準(zhǔn)確測(cè)量。并按要求加熱直至完全碳化。逐漸升溫,要求達(dá)到為500~600 ℃,完全灰化、恒重。平行測(cè)定3組,總灰分含量(%)。結(jié)果見(jiàn)表2。
表2 灰分測(cè)試
將制得的灰份加入坩堝。將稀鹽酸10 m加入到坩堝之內(nèi)。覆蓋表面皿,水浴加熱10 min。用熱水沖洗表面皿,至5 mL,獲得洗液,加入坩堝之中。用無(wú)灰濾紙,進(jìn)行濾過(guò),殘?jiān)盟磸?fù)洗滌,直到洗液無(wú)氯化物反應(yīng)。濾渣和濾紙放入干鍋內(nèi)干燥,熾灼,恒重,計(jì)算酸不溶性灰分含量(%)。結(jié)果見(jiàn)表2。
根據(jù)《中華人民共和國(guó)藥典》通則-2201浸出物(熱浸法)測(cè)定法,測(cè)定莊河產(chǎn)槲寄生的浸出物。
準(zhǔn)確稱量槲寄生2 g。放入容量為100~250 mL錐形瓶中,加入乙醇50~100 mL,密塞,稱重,靜置1 h。連接回流冷凝管,進(jìn)行提取,沸騰后,維持微沸1 h。靜置,冷卻,對(duì)稱重,并加入乙醇使重量與原來(lái)相同,搖勻。對(duì)上述溶液進(jìn)行過(guò)濾,取濾液25 mL,加入到蒸發(fā)皿當(dāng)中。用水域法蒸干,溫度要求為105℃,時(shí)間要求為3 h。冷卻30 min,精密測(cè)定體重。計(jì)算醇溶性浸出物含量(%)。
表3 浸出物含量
照2015版藥典槲寄生項(xiàng)下高效液相色譜法測(cè)定。
供試品溶液 精確測(cè)量供試品細(xì)粉2 g,將供試品加入帶塞錐形瓶。將濃度為70%甲醛溶液25 mL加入到錐形瓶當(dāng)中,密塞,稱重。對(duì)其進(jìn)行超聲處理,靜置,冷卻,再次進(jìn)行測(cè)量。加入70%甲醛溶液,使重量與原來(lái)相當(dāng),搖勻,濾過(guò)。
測(cè)定法 準(zhǔn)備對(duì)照品和供試品溶液,各吸取10μL,用液相色譜儀進(jìn)行測(cè)定,記錄結(jié)果。
均精密吸取紫丁香苷標(biāo)準(zhǔn)溶液2 μL,4 μL,6μL,8 μL,10 μL;取供試品溶液,均吸取 10 μL,用液相色譜儀測(cè)峰面積,進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)(X),峰面積為縱坐標(biāo)(Y),計(jì)算回歸方程[18]。
圖1 液相色譜儀測(cè)峰面積
圖2 供試品高效液相色譜圖
根據(jù)峰面積公式,y標(biāo)/y樣=(C標(biāo)×V標(biāo))/(C樣×V樣),計(jì)算出:供試品溶液中紫丁香苷的含量為0.019%。
2015版藥典規(guī)定:水分不得超過(guò)12.0%,總灰分不得超過(guò)9.0%,酸不溶性灰分不得超過(guò)2.5%。醇溶性浸出物不得超過(guò)20.0%,紫丁香苷含量不得少于0.040%。測(cè)試結(jié)果莊河市產(chǎn)槲寄生的水分含量為5.7%,總灰分含量為4.6%,酸不溶性灰分2.2%,均符合《藥典》的規(guī)定;但醇溶性浸出物含量為14.6%,紫丁香苷含量0.019%,不符合藥典的要求,故不能作為合格品入藥。就其原因可能與采集時(shí)間有關(guān),有待于我們進(jìn)一步研究。