馮 杉 萇美燕 王婷婷 謝 昆 侯美辰

（北京中醫(yī)藥大學(xué)東方學(xué)院，北京 065001）

糖類成分包括單糖、低聚糖和多糖，是植物體內(nèi)含量最多的一類化學(xué)成分，常被視為無效成分。然而，隨科技的發(fā)展，人們發(fā)現(xiàn)一些中藥中的多糖具有較強(qiáng)的生物活性，多糖的研究引起了國內(nèi)外學(xué)者的重視。多糖在自然界高等植物、藻類、細(xì)菌類及動物體內(nèi)均有存在，分布極廣。真菌多糖是指從真菌子實(shí)體、菌絲體、發(fā)酵液中分離出的10個以上單糖單元構(gòu)成的高分子聚合物[1]。

1 多糖的來源與結(jié)構(gòu)

關(guān)于多糖較早的研究是作為疫苗的從細(xì)菌中得到的莢膜多糖，由此引發(fā)了世界醫(yī)學(xué)對真菌多糖的研究熱潮。真菌多糖來源[2]非常廣泛，例如從香菇、猴頭菇中分離的香菇多糖、猴頭菌多糖，從虎奶菇、茯苓菌核分離出的虎奶菇多糖、茯苓多糖，靈芝、冬蟲夏草、灰樹花等液體、固體培養(yǎng)條件下產(chǎn)生的靈芝多糖、冬蟲夏草多糖、灰樹花多糖等等。

真菌多糖通常是由D-葡萄糖、D-半乳糖、L-阿拉伯糖、L-鼠李糖、D-半乳糖醛酸和D-葡萄糖醛酸等聚合而成。因此，多糖經(jīng)酸水解后能生成多分子單糖。真菌多糖有四級結(jié)構(gòu)。一級結(jié)構(gòu)包括糖基的組成、排序、連接方式、異頭物構(gòu)型及糖鏈分支情況等，二級結(jié)構(gòu)指多糖骨架鏈間以氫鍵結(jié)合所形成的各種聚合體，三級結(jié)構(gòu)指由多糖的糖殘基中的羥基、羧基、氨基及其他基團(tuán)間通過非共價作用而形成的有規(guī)則的空間構(gòu)象，四級結(jié)構(gòu)是多聚鏈間以非共價鍵結(jié)合形成的聚集體[3]。

2 多糖的提取與分離

2.1 真菌多糖的提取

根據(jù)溶解性，真菌多糖可分為水溶性、酸溶性、堿溶性三類。因此，真菌多糖的提取可采用水提法、酸提法、堿提法、鹽提法、有機(jī)溶劑提法、酶提法等[4]，又可多種方法結(jié)合使用，如超聲液催化酶提取法、微波輔助熱水浸提法等。

（1）水提法：大部分真菌多糖可溶于水，遇醇沉淀，因此傳統(tǒng)提取方法多采用熱水浸提，然后用乙醇沉淀，此法適用于水溶性多糖。酸溶性多糖及堿溶性多糖則分別采用稀酸水提和稀堿水提后用醇沉淀。陳莉[5]確定了熱水浸提杏鮑菇多糖最佳提取工藝，使多糖提取率達(dá)7.92%。水提前可用高濃度醇浸提的方式除去部分蛋白質(zhì)、脂肪、色素等物質(zhì)，以減少水提粗多糖中的雜質(zhì)，提高多糖純度[6]。水提法簡便，且對設(shè)備要求低。但是，熱水浸提法具有耗時長、得率低的缺點(diǎn)，烯酸水提法和稀堿水提法則易造成多糖空間結(jié)構(gòu)的破壞而喪失活性。

（2）超聲提取法：超聲提取靈芝多糖與傳統(tǒng)水提法相比，提取時間縮短3/4，多糖得率提高30%以上[7]。孫源[8]對蛹蟲草多糖的提取方法和提取條件進(jìn)行深入研究，證實(shí)蛹蟲草多糖最佳提取方法為超聲波提取，在最佳條件下，多糖提取率高達(dá)15.48%。黃生權(quán)[9]對比酶解提取、凍融提取、蒸汽膨化提取、微波提取、超聲提取及兩兩結(jié)合等提取方法，發(fā)現(xiàn)微波協(xié)同超聲提取法對赤靈芝水溶性多糖和堿溶性多糖都有最佳提取率。

（3）酶解法：酶法提取多糖具有產(chǎn)率高、易除雜、提取條件可控等優(yōu)點(diǎn)。韓春然[10]利用纖維素酶和蛋白酶從黑木耳中提取出了相對分子質(zhì)量分別為3.17×105和1.83×105的兩種多糖。蔣中海[11]等利用纖維素酶2.0%、果膠酶2.0%、木瓜蛋白酶2.0%組成的復(fù)合酶提取松茸多糖，提取收率較高，且多糖分子量分布較寬。

2.2 真菌多糖的分離

（1）分級沉淀：實(shí)驗(yàn)室常用的分級沉淀方法有分部醇沉淀法、季銨鹽沉淀法、鹽析法、金屬絡(luò)合物法這樣幾種。其中以用乙醇分部沉淀最為常見，不同醇濃度下可沉淀出分子量不同的多糖，從而達(dá)到多糖的初步分離[12]。蔣俊[13]等通過調(diào)節(jié)乙醇濃度分別得到了40%～80%醇濃度下的多糖沉淀，并經(jīng)體外免疫活性測定表明，醇沉濃度為40%時，得到的多糖大分子部分占的比例較大且活性較高。

（2）柱層析分離法：真菌多糖的柱層析分離方法包括纖維素柱層析、纖維素陰離子交換柱層析、凝膠柱層析和親和柱層析。張衛(wèi)國[14]等采用乙醇分部沉淀及葡聚糖凝膠柱層析兩種方法結(jié)合考察紫芝菌絲體多糖的多糖組分，發(fā)現(xiàn)不同的乙醇濃度沉淀的多糖組分不同。

（3）超濾分離法：超濾法用于多糖分離，可將真菌多糖溶出液的微濾預(yù)處理和超濾純化相結(jié)合，可實(shí)現(xiàn)提取、分離和純化工藝的連續(xù)操作，省去分段工藝的不便，是一種具有研究價值的分離純化方法。利用微濾和不同截留分子量的超濾串聯(lián)，對姬松茸子實(shí)體粗多糖進(jìn)行分級純化，可將其按分子量分成4個級別，所得多糖質(zhì)量分布比例約為 5：1：3：1[15]。

3 真菌多糖的生物活性

3.1 抗腫瘤活性

腫瘤是嚴(yán)重威脅人類生命與健康的一類疾病。云芝多糖、香菇多糖、茯苓多糖等真菌多糖以其顯著療效、無毒副作用等特點(diǎn)引起了人們極大的興趣，并廣泛應(yīng)用于腫瘤的臨床治療上。李建軍[16]等發(fā)現(xiàn)靈芝多糖具有抗腫瘤作用，且以200 mg/kg體重的劑量抑瘤率最高，其作用機(jī)制可能是通過促進(jìn)荷瘤小鼠免疫細(xì)胞的增殖與分化，增加效應(yīng)免疫細(xì)胞的數(shù)量有關(guān)。

3.2 免疫調(diào)節(jié)作用

研究表明大多數(shù)真菌多糖的抗腫瘤活性是通過增強(qiáng)宿主免疫調(diào)節(jié)功能來實(shí)現(xiàn)的。真菌多糖能激活T、B淋巴細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、自然殺傷細(xì)胞等免疫細(xì)胞，能活化補(bǔ)體，促進(jìn)細(xì)胞因子生成，通過多條途徑對免疫系統(tǒng)發(fā)揮調(diào)節(jié)作用[17]。猴頭菇多糖[18]可明顯改善環(huán)磷酰胺引起免疫抑制小鼠的非特異性免疫、體液免疫及細(xì)胞免疫功能的低下狀況，具有較強(qiáng)的免疫調(diào)節(jié)作用，可從多靶點(diǎn)、多角度、多層次發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)作用。

3.3 抗氧化活性

人體因與外界持續(xù)接觸，呼吸、外界污染、輻射等因素使人體不斷產(chǎn)生自由基?，F(xiàn)代科學(xué)研究表明，癌癥、衰老或其他疾病大都與過量自由基的產(chǎn)生有關(guān)聯(lián)。研究抗氧化可以有效克服其所帶來的危害，所以抗氧化一直被保健品、化妝品企業(yè)列為主要研發(fā)方向之一。汪巖[19]經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)鳳尾菇菌絲體多糖在5 mg/mL表現(xiàn)最大的抗氧化活性，其對羥基自由基的清除率達(dá)到58.9%。張匯[20]等對黑靈芝菌蓋、菌柄和孢子粉多糖的抗氧化活性進(jìn)行考察，發(fā)現(xiàn)菌蓋多糖清除羥基自由基方面效果最佳。

4 展望

真菌多糖是一種特殊的生物活性物質(zhì)，其功效雖然十分顯著，被譽(yù)為21世紀(jì)的健康衛(wèi)士，但我國國內(nèi)大眾甚至醫(yī)務(wù)工作者對真菌多糖還比較陌生，因而未能充分發(fā)揮真菌多糖的作用。把真菌多糖作為今后醫(yī)學(xué)研究的主要課題之一，必將造福于廣大的人民，解決未來健康危機(jī)，為人類作出巨大貢獻(xiàn)。

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