楊正南

(江蘇省南京鼓樓醫(yī)院集團(tuán)儀征醫(yī)院， 江蘇 儀征 211900)

乙型病毒性肝炎(viral hepatitis type B)又叫乙肝，是臨床上常見(jiàn)的傳染性疾病。此病是由乙肝病毒(HBV)感染引起的。目前，我國(guó)的乙肝病毒攜帶者約占全世界乙肝病毒攜帶者的47.24 %。乙肝表面抗原 (HBsAg)是乙肝病毒的外殼，本身不具有傳染性，只具有抗原性。因此，當(dāng)患者的HBsAg呈陽(yáng)性或低水平陽(yáng)性時(shí)，則表明其可能感染了乙肝病毒。但是，不同的實(shí)驗(yàn)室對(duì)HBsAg低水平陽(yáng)性的檢測(cè)結(jié)果存在較大差異，這就有可能造成不同的診斷結(jié)果[1]。而對(duì)HBsAg是否呈低水平陽(yáng)性的判斷，直接關(guān)系到患者的診斷結(jié)果和后續(xù)治療。因此，臨床上積極研究對(duì)HBsAg低水平陽(yáng)性樣本進(jìn)行有效確認(rèn)的方法，對(duì)降低乙型病毒性肝炎的誤診率具有十分重要的意義?；诖?，筆者對(duì)2014年6月至2016年5月期間江蘇省南京鼓樓醫(yī)院集團(tuán)儀征醫(yī)院收治的80例疑似HBsAg低水平陽(yáng)性患者進(jìn)行了以下研究。

1　資料與方法

1.1　一般資料

本次研究的對(duì)象為2014年6月至2016年5月期間江蘇省南京鼓樓醫(yī)院集團(tuán)儀征醫(yī)院收治的80例疑似HBsAg低水平陽(yáng)性患者。在這80例患中，有男性患者58例，女性患者22例，其年齡為18～70歲，平均年齡為（35.25±4.64）歲。此項(xiàng)研究已得到該院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)的批準(zhǔn)，且患者均自愿參與本次研究，并簽署了參與本次研究的知情同意書。

1.2　方法

1.2.1進(jìn)行血清HBsAg檢測(cè)的方法 1）在檢測(cè)當(dāng)日的清晨，抽取本組患者5ml的空腹靜脈血。2）將血樣放置1 h后，對(duì)血樣進(jìn)行10min左右的離心處理（處理速度為3000 r/min），并分離出血清。3）采用磁微?；瘜W(xué)發(fā)光法對(duì)這些患者的血清樣本進(jìn)行HBsAg檢測(cè)。在檢測(cè)期間，檢驗(yàn)人員須嚴(yán)格按照乙型肝炎表面抗原定量試劑盒（產(chǎn)品批號(hào)：20170317）的操作規(guī)程進(jìn)行相關(guān)操作。使用的儀器為Autolumo A200 型全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光測(cè)定儀，試劑盒與儀器均來(lái)自鄭州安圖生物工程股份有限公司。在檢驗(yàn)人員完成相關(guān)操作后，儀器可自動(dòng)完成檢測(cè)并判斷監(jiān)測(cè)結(jié)果，當(dāng)患者血清HBsAg的結(jié)果＞0.05 IU/mL時(shí)，即可判斷其血清HBsAg呈陽(yáng)性。

1.2.2進(jìn)行血清HBV-DNA載量檢測(cè) 1）對(duì)經(jīng)使用磁微?；瘜W(xué)發(fā)光法檢測(cè)出血清HBsAg呈低水平陽(yáng)性的血液標(biāo)本進(jìn)行編號(hào)，并留取標(biāo)本中HBV-DNA的成分，以做為進(jìn)行血清HBV-DNA載量檢測(cè)之用。2）采用PCR-熒光探針?lè)▽?duì)帶有編號(hào)的血液標(biāo)本進(jìn)行HBV-DNA載量檢測(cè)。在檢測(cè)期間，檢驗(yàn)人員須嚴(yán)格按照乙型肝炎病毒核酸定量試劑盒上熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)的說(shuō)明書進(jìn)行相關(guān)操作。使用的儀器為美國(guó)ABI 7000 型實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀，HBV-DNA呈陽(yáng)性的判斷標(biāo)準(zhǔn)為[2]：每毫升核酸拷貝數(shù)（Copies/ml）＞500。

1.3　統(tǒng)計(jì)學(xué)方法[3]

將本次研究中的數(shù)據(jù)錄入到SPSS 22.0軟件中進(jìn)行處理，計(jì)量資料用（±s）表示，采用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料用%表示，采用X2檢驗(yàn)。P＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)果

采用磁微?；瘜W(xué)發(fā)光法對(duì)這80例患者進(jìn)行HBsAg檢測(cè)的結(jié)果顯示，在這80例患者中，僅有23例患者的HBsAg呈低水平陽(yáng)性（占28.75 %）。然后，再采用PCR-熒光探針?lè)▽?duì)上述23例患者進(jìn)行HBV-DNA載量檢測(cè)。結(jié)果顯示，在這23例患者中，只有15例患者的血清中含有HBV-DNA（占65.22 %），其HBV-DNA的平均核酸載量值為7.306。

3　討論

在臨床上，采用磁微?；瘜W(xué)發(fā)光法對(duì)患者進(jìn)行HBsAg檢測(cè)，并得出COI（乙肝表面抗原定量）的水平在1.00～50.00之間，即可認(rèn)定其HBsAg呈弱陽(yáng)性。雖然采用磁微?；瘜W(xué)發(fā)光法檢測(cè)HBsAg結(jié)合了機(jī)體的抗體、抗原免疫反應(yīng)與發(fā)光原理，具有檢測(cè)的速度快、敏感度高、線性范圍寬、試劑貯存期較長(zhǎng)、操作簡(jiǎn)單等操作優(yōu)勢(shì)，但一旦遇到HBsAg的檢測(cè)表現(xiàn)在弱陽(yáng)性灰區(qū)時(shí)，就不能準(zhǔn)確地判斷患者是否感染了乙肝病毒?；颊咴诟腥玖艘腋尾《局螅纬刹《镜耐暾w粒需要由病毒蛋白和核酸共同進(jìn)行編碼復(fù)制，而在HBV 編碼的5個(gè)開(kāi)放閱讀框架中，HBsAg的編碼區(qū)位于第3個(gè)閱讀框架，HBsAg只是HBV-DNA的外殼蛋白，而其中是否含有HBV，并不能確定[4]。當(dāng)HBV感染人體后，還存在一段時(shí)間的“窗口期”，即當(dāng)人體感染HBV后，其機(jī)體的免疫功能會(huì)產(chǎn)生免疫反應(yīng)，消滅HBV，但不能產(chǎn)生HBsAb (乙型肝炎表面抗體)。而HBsAb一般在患者感染急性乙肝病毒的后期或者HBsAg 消失一段時(shí)間后才會(huì)出現(xiàn)，但在這個(gè)“窗口期”內(nèi)HBsAg和HBsAb 都無(wú)法被檢出。即使PCR實(shí)時(shí)熒光定量檢測(cè)技術(shù)可以準(zhǔn)確、及時(shí)的診斷感染性疾病，但依然無(wú)法突破“窗口期”這個(gè)病毒復(fù)制與人體免疫機(jī)制的難題。

HBsAg 的出現(xiàn)常伴隨HBV的存在 , 因此 HBsAg 是已感染 HBV 的標(biāo)志。通常情況下，HBsAg存在于HBV感染患者的血液、唾液、乳汁、汗液、精液、陰道分泌物及其他分泌物中。一般在感染乙肝病毒2～6個(gè)月后，到其谷丙轉(zhuǎn)氨酶合成量升高前的2～8 周這段期間內(nèi)，可在患者的血清中檢測(cè)出 HBsAg呈陽(yáng)性。如果此時(shí)患者的HBsAg呈現(xiàn)出低水平陽(yáng)性，則可使用PCR實(shí)時(shí)熒光定量檢測(cè)儀來(lái)進(jìn)一步檢測(cè)其體內(nèi)HBV-DNA的具體含量[5]。PCR實(shí)時(shí)熒光定量檢測(cè)技術(shù)可以直接測(cè)定病毒核酸載量，它有效地融合了光化學(xué)技術(shù)、基因擴(kuò)增與分子雜交機(jī)理，檢測(cè)的靈敏度較高，可以充分實(shí)現(xiàn)對(duì)擴(kuò)增產(chǎn)物的自動(dòng)分析，并反映出HBV的實(shí)際感染狀態(tài)。在本次研究中，筆者通過(guò)分析HBsAg 低水平陽(yáng)性與HBV-DNA載量之間的關(guān)系可以準(zhǔn)確診斷出HBsAg低水平陽(yáng)性的HBV感染患者的感染情況，為醫(yī)生的臨床診斷提供有效、可靠的數(shù)據(jù)支撐，從而避免在無(wú)法準(zhǔn)確診斷的情況下，使乙型肝炎病毒通過(guò)輸血、器官移植等途徑傳播感染。

相關(guān)的臨床研究結(jié)果表明，當(dāng)患者HBsAg呈現(xiàn)低水平陽(yáng)性，且其HBV-DNA載量的均值＜500時(shí)，即可表明其體內(nèi)存在HBV的外殼，但不存在HBV-DNA，故不具有病毒的復(fù)制性和傳染性；但是，當(dāng)患者HBsAg呈現(xiàn)弱陽(yáng)性或者陽(yáng)性，且其HBV-DNA載量的均值＞500時(shí)，即可診斷其已經(jīng)感染了HBV，其體內(nèi)存在完整的HBV, 且具有病毒的復(fù)制性和傳染性[6]。本次研究的結(jié)果顯示，采用磁微粒化學(xué)發(fā)光法對(duì)這80例患者進(jìn)行HBsAg檢測(cè)的結(jié)果顯示，在這80例患者中，僅有23例患者的HBsAg呈低水平陽(yáng)性（占28.75 %）。然后，再采用PCR-熒光探針?lè)▽?duì)上述23例患者進(jìn)行HBV-DNA載量檢測(cè)。結(jié)果顯示，在這23例患者中，只有15例患者的血清中含有HBV-DNA（占65.22 %），其HBV-DNA的平均核酸載量值為7.306。這說(shuō)明，通過(guò)磁微?；瘜W(xué)發(fā)光法檢測(cè)出的HBsAg低水平陽(yáng)性患者，其體內(nèi)不一定含有乙肝病毒，只能表明他們體內(nèi)含有乙肝病毒的蛋白外殼或者呈現(xiàn)假陽(yáng)性，也有可能其正處于乙肝潛伏期或慢性乙肝發(fā)展期，而蛋白外殼中是否含有乙肝病毒核酸，則需要進(jìn)一步結(jié)合PCR-熒光探針?lè)ㄟM(jìn)行檢測(cè)診斷。

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[2]李小永,溫懷凱,陶洪群,等.乙型肝炎患者病毒核酸載量與乙型肝炎病毒外膜大蛋白含量相關(guān)性的研究[J].中國(guó)衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志,2013,20(04)：793-794.

[3]趙倩瑜,張俊峰,衛(wèi)紅偉.乙型肝炎病毒表面抗原低水平陽(yáng)性血清的病毒核酸載量分析[J].中國(guó)現(xiàn)代藥物應(yīng)用,2014,25(15)：28-29.

[4]黃勁松,張軍霞,劉世國(guó),等.乙型肝炎病毒表面抗原低水平陽(yáng)性血清的病毒核酸載量分析[J].檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床,2014,23(06)：782-783.

[5]黃學(xué)忠,林佩佩,陳曉飛.乙型肝炎病毒核酸載量分析與血清標(biāo)志物檢測(cè)的應(yīng)用評(píng)價(jià)[J].臨床和實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志,2013,19(04)：311-312.

[6]趙碎娟,孫根妹,鄭明波.HBeAg陰性慢性乙型肝炎患者抗病毒治療中血清表面抗原大蛋白水平與乙型肝炎病毒核酸之間的關(guān)系[J].中國(guó)衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志,2012,14(04)04：818-820.