錢旭東，周錦川，邵先安，王 東，沈子龍，葉 青，謝元璐

0 引 言

變應(yīng)性鼻炎(AR)與慢性鼻-鼻竇炎(CRS)均為鼻科常見多發(fā)疾病，前者為IgE介導(dǎo)的Ⅰ型變態(tài)反應(yīng)性疾病，后者多為慢性感染性炎。近年來兩者發(fā)病率不斷升高，對部隊官兵健康情況已造成顯著影響。有研究表明，駐徐部隊官兵變應(yīng)性鼻炎整體患病率17.1%，而確診的患者中已影響睡眠及軍事訓(xùn)練者分別有44.9%和75.6%[1]。蚌埠的住院軍隊病員耳鼻喉科疾病譜中，鼻科疾病發(fā)病率最高，其中慢性鼻-鼻竇炎高達22.43%，僅在鼻中隔偏曲(38.46%)之下[2]。目前變應(yīng)性鼻炎與慢性鼻-鼻竇炎發(fā)病機制尚未完全闡明，對我國軍人群體在兩種鼻科疾病的基礎(chǔ)方面進行有針對性的研究，有助于疾病臨床診治的進步，并改善廣大官兵的健康水平和生活質(zhì)量，提高部隊?wèi)?zhàn)斗力。白細胞介素-32(Interleukin-32，IL-32)是一種新近發(fā)現(xiàn)的細胞因子，研究顯示其參與多種炎癥性疾病及腫瘤的發(fā)生、發(fā)展，起到一定的促進作用[3]。本研究擬通過對變應(yīng)性鼻炎與慢性鼻-鼻竇炎住院軍隊病員的鼻黏膜組織中IL-32的表達情況進行檢測，以探討IL-32與變應(yīng)性鼻炎、慢性鼻-鼻竇炎發(fā)生發(fā)展的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1研究對象從2016年10月至2017年8月在我院耳鼻咽喉頭頸外科住院治療的軍人患者中，收集變應(yīng)性鼻炎并發(fā)鼻中隔偏曲患者、慢性鼻-鼻竇炎不伴鼻息肉(chronic rhinosinusitis without nasal polyps，CRSsNP)患者、慢性鼻-鼻竇炎伴有鼻息肉(chronic rhinosinusitis with nasal polyps，CRSwNP)患者，同時收集單純鼻中隔偏曲患者作為對照組。①變應(yīng)性鼻炎并發(fā)鼻中隔偏曲組24例中，男20例，女4例，年齡19～40(28.9±6.5)歲，所有患者均符合《變應(yīng)性鼻炎診斷和治療指南(2015年，天津)》中變應(yīng)性鼻炎診斷標(biāo)準(zhǔn)，且近1月內(nèi)未接受抗組胺或激素等治療[4]。②慢性鼻-鼻竇炎不伴鼻息肉組26例中，男19例，女7例，年齡19～45(30.4±6.1)歲，所有患者均符合《慢性鼻-鼻竇炎診斷和治療指南(2012年，昆明)》中慢性鼻-鼻竇炎不伴鼻息肉診斷標(biāo)準(zhǔn)。③慢性鼻-鼻竇炎伴有鼻息肉組31例中，男26例，女5例，年齡22～53(34.7±7.9)歲，所有患者均符合上述指南中慢性鼻-鼻竇炎伴有鼻息肉的診斷標(biāo)準(zhǔn)[5]。④對照組17例中，男14例，女3例，年齡20～29(24.1±2.2)歲，以單純鼻中隔偏曲入院行手術(shù)治療，均已排除合并鼻科其他炎癥性疾病者。各組一般情況差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。本研究通過醫(yī)院倫理委員會審批(批準(zhǔn)號：123LL-16-32)，所有受試者均已充分告知并簽署知情同意書。

1.2標(biāo)本采集各組均于術(shù)中取患側(cè)鼻腔中鼻甲前端內(nèi)側(cè)相同位置鼻黏膜組織全層，以冰等滲鹽水洗去血液并用濾紙吸干。以分析天平稱取100 mg組織，眼科剪剪成小塊后置入玻璃勻漿管中，并加入預(yù)冷的1×PBS溶液1 mL。將玻璃勻漿管置入冰盒內(nèi)研磨5 min，制成組織勻漿后置于-20 ℃冰箱中過夜。反復(fù)凍融2次以使細胞裂解，2～8 ℃下5 000×g離心5 min，取上清液進行檢測，多余上清液保存于-80 ℃冰箱中。

1.3試劑與方法采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法(ABC-ELISA)測定組織勻漿及血清中IL-32的濃度。IL-32 ELISA試劑盒采購于Cusabio公司(CSB-E12074h)。所有操作步驟均嚴(yán)格按照說明書指示進行，光密度值由DNM-9602酶標(biāo)分析儀在450 nm處測得。

2 結(jié) 果

變應(yīng)性鼻炎并發(fā)鼻中隔偏曲組鼻黏膜組織勻漿中IL-32的平均濃度為(2.981±1.106)μg/L，慢性鼻-鼻竇炎不伴鼻息肉組為(3.007±0.813)μg/L，慢性鼻-鼻竇炎伴有鼻息肉組為(3.808±2.963)μg/L，3組間比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。此3組數(shù)據(jù)均明顯高于對照組的(1.150±0.285)μg/L，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。

3 討 論

變應(yīng)性鼻炎在我國的發(fā)病率呈不斷升高趨勢。目前在4%～38%，各地區(qū)視生活環(huán)境及污染程度等而異[6]。主流觀點認(rèn)為，AR的發(fā)病是由2型輔助類T細胞優(yōu)勢分化、1型輔助類T細胞反應(yīng)不足，導(dǎo)致B細胞分泌sIgE增多，促使肥大細胞等釋放組胺增加所致[7]。除了Th1/Th2失衡，Treg、Th9、Th17、Th22及Nods樣模式識別受體、嗜酸性粒細胞相關(guān)因子等在AR發(fā)生發(fā)展中的作用也日益受到關(guān)注[8-10]。

慢性鼻-鼻竇炎分為不伴鼻息肉和伴有鼻息肉兩類，即CRSsNP和CRSwNP。CRSwNP較CRSsNP炎性程度更高，機制更為復(fù)雜，且復(fù)發(fā)率較高。從組織病理學(xué)研究中可以發(fā)現(xiàn)，CRSwNP發(fā)病中Th2細胞往往占據(jù)關(guān)鍵地位，而CRSsNP更加傾向于Th1細胞主導(dǎo)的炎癥反應(yīng)，可見兩者雖然在臨床癥狀及體征上有一定程度的相似，但機制方面差別迥異[11]。另外，由于CRSwNP形成息肉的機制受到特異性體質(zhì)、感染源及嗜酸性粒細胞等較多因素影響，其與變應(yīng)性疾病是否有關(guān)系目前尚未明確[12-13]。

IL-32于1992年被Dahl等[14]發(fā)現(xiàn)由IL-2刺激NK細胞表達，遂稱為NK4轉(zhuǎn)錄本，后于2005年由Kim等[15]正式確定并命名。此后其作為一種功能多樣的新型促炎細胞因子而受到廣泛關(guān)注。IL-32有至少9種剪接變異體，其中以IL-32γ生物活性最強。其既可以被IFN-γ、TNF-α、IL-2、IL-12、IL-18等誘導(dǎo)T細胞、單核細胞、上皮細胞與自然殺傷細胞等釋放，也可誘導(dǎo)TNF-α、IL-1、IL-6、IL-10以及MIP-2等表達，可見IL-32同時對Th1、Th2兩方面的因子都有誘導(dǎo)作用，因此在縱橫交錯的細胞因子調(diào)控網(wǎng)絡(luò)中占據(jù)關(guān)鍵地位。另外，IL-32還參與機體免疫反應(yīng)和細胞凋亡的調(diào)節(jié)，在克羅恩病、胃癌、乙型病毒性肝炎、哮喘等多種炎癥或腫瘤疾病的發(fā)病機制中起到促進作用，但其具體作用機制目前說法不一，尚無定論[16]。

本研究顯示，IL-32在AR伴鼻中隔偏曲組中明顯比單純鼻中隔偏曲對照組表達量高(P<0.01)，可以認(rèn)為其參與了AR的發(fā)生、發(fā)展。AR與變應(yīng)性哮喘作為發(fā)作于呼吸道不同位置的同類疾病，同樣受到TNF-α、IL-6、IL-10等多種細胞因子的調(diào)控。而體內(nèi)IL-32水平升高可激活NF-κB途徑、p38 MAPK磷酸化通路、Caspase-1和Caspase-3等多條通路進行信號轉(zhuǎn)導(dǎo)，以此誘導(dǎo)這些因子的大量表達，進而導(dǎo)致炎細胞聚集和氣道高反應(yīng)。由此可見，IL-32可能被作為防治AR的一個新的靶點，可依此進行后續(xù)研究加以論證。

實驗結(jié)果還表明IL-32對CRS的發(fā)病也起到了促進作用，但AR組IL-32的平均濃度較兩個CRS組為低。對于無息肉的CRSsNP，考慮為IL-32易由Th1型細胞因子誘導(dǎo)，而AR的Ⅰ型變態(tài)反應(yīng)最終為Th2的優(yōu)勢分化，雖然Th1因子的表達量為平衡Th2也會有小幅增長，但終究不及Th1為主導(dǎo)的CRSsNP的直接誘導(dǎo)作用；對于CRSwNP而言，變應(yīng)性鼻炎多季節(jié)性發(fā)作，而鼻息肉作為一種長期慢性炎癥，炎細胞及炎性因子對鼻黏膜的浸潤較為久遠，所以促炎因子IL-32的數(shù)量多于AR。長期的炎癥浸潤和Th1因子的直接誘導(dǎo)，導(dǎo)致了AR患者鼻黏膜中IL-32水平低于CRS患者。

另一方面，CRSwNP組較CRSsNP組IL-32的濃度稍高，鑒于IL-32可明確引起Th1系列細胞因子升高，遂考慮為其參與CRSsNP的發(fā)生后并未消失，長期存在于鼻腔局部組織中，并通過招募作用聚集炎癥細胞，從而參與了Th2主導(dǎo)的CRSwNP的鼻黏膜息肉樣變過程，加重炎癥程度。除可能由于組織勻漿稀釋倍數(shù)不同導(dǎo)致的數(shù)值差異外，此結(jié)果與唐金勇等[17]研究結(jié)果一致，可見IL-32很可能伴隨了CRS發(fā)病與發(fā)展的全過程，并與其嚴(yán)重程度相關(guān)。不過CRSwNP組與CRSsNP組差異無統(tǒng)計學(xué)意義，不同于Keswani等[18]提出的CRSwNP中IL-32表達量明顯高于CRSsNP的觀點，這是否由東西方人種的差異所致尚有賴于進一步的驗證。

軍人群體有其特殊性，如集中度高，主體為青年男性，訓(xùn)練強度大，作業(yè)環(huán)境復(fù)雜。陌生的氣候環(huán)境和常于野外訓(xùn)練的需要為變應(yīng)性疾病及慢性持續(xù)性感染提供了可乘之機?？諝庵械幕ǚ邸m螨、飛絮和顆粒狀漂浮物易作為變應(yīng)原導(dǎo)致變應(yīng)性鼻炎，發(fā)作時鼻癢、連續(xù)性噴嚏、鼻塞、流清水樣涕等癥狀可較為明顯[19]。慢性鼻-鼻竇炎與細菌感染、變態(tài)反應(yīng)、真菌定植、代謝障礙及環(huán)境等多因素相關(guān)，可由長期鼻塞、流黃膿涕等引起慢性缺氧和咽部感染，進而造成頭痛、頭昏、咳嗽、嗅覺下降、記憶力減退等癥狀[20]。兩種鼻科慢性炎癥均對官兵們?nèi)粘Ｉ罴坝?xùn)練影響較為嚴(yán)重。IL-32作為一種早期即與變應(yīng)性鼻炎、慢性鼻-鼻竇炎密切相關(guān)的促炎性細胞因子，可能成為預(yù)后判斷新的指標(biāo)，對IL-32因子表達的調(diào)節(jié)亦可能成為兩種鼻科炎癥新的治療途徑。

[1] 燕志強，單 兵，許保健，等.駐徐部隊變應(yīng)性鼻炎流行病學(xué)調(diào)查及分析[J].解放軍醫(yī)學(xué)雜志，2012，37(3)：257-259.

[2] 王 東，謝元璐，沈子龍，等.耳鼻喉科住院軍隊病員疾病譜分析[J].東南國防醫(yī)藥，2016，18(6)：575-577，605.

[3] Khawar MB，Abbasi MH，Sheikh N，etal. IL-32: A Novel Pluripotent Inflammatory Interleukin, towards Gastric Inflammation, Gastric Cancer, and Chronic Rhino Sinusitis[J]. Mediators Inflamm，2016，2016：8413768. DOI: 10.1155/2016/8413768

[4] 中華耳鼻咽喉頭頸外科雜志編輯委員會鼻科組，中華醫(yī)學(xué)會耳鼻咽喉頭頸外科學(xué)分會鼻科學(xué)組.變應(yīng)性鼻炎診斷和治療指南(2015年，天津)[J].中華耳鼻咽喉頭頸外科雜志，2016，51(1)：6-24.

[5] 中華耳鼻咽喉頭頸外科雜志編輯委員會鼻科組，中華醫(yī)學(xué)會耳鼻咽喉頭頸外科學(xué)分會鼻科學(xué)組.慢性鼻-鼻竇炎診斷和治療指南(2012年，昆明)[J].中國醫(yī)刊，2013，48(11)：103-105.

[6] Zheng M，Wang X，Bo M，etal. Prevalence of allergic rhinitis among adults in urban and rural areas of china: a population-based cross-sectional survey[J]. Allergy Asthma Immunol Res，2015，7(2)：148-157.

[7] Lloyd CM，Saglani S. Development of allergic immunity in early life[J]. Immunol Rev，2017，278(1)：101-115.

[8] 程 雷，錢俊俊，田慧琴.變應(yīng)性鼻炎研究的若干進展[J].山東大學(xué)耳鼻喉眼學(xué)報，2017，31(3)：1-3.

[9] 胡 瑤，季紅健，嚴(yán)道南.Nods樣模式識別受體在變應(yīng)性鼻炎大鼠模型中的表達及意義[J].醫(yī)學(xué)研究生學(xué)報，2016，29(11)：1171-1176.

[10] 朱 瑾，韓德民，周錦川，等.嗜酸粒細胞親合素N端突變體重組腺病毒在小鼠變應(yīng)性鼻炎中的作用[J].中華耳鼻咽喉頭頸外科雜志，2006，41(3)：176-180.

[11] Bachert C，Zhang L，Gevaert P. Current and future treatment options for adult chronic rhinosinusitis: Focus on nasal polyposis[J]. J Allergy Clin Immunol，2015，136(6)：1431-1440.

[12] 蘭 寧，徐 紅.趨化因子eotaxin在慢性鼻竇炎鼻腔分泌物中的意義[J].醫(yī)學(xué)研究生學(xué)報，2014，27(5)：507-509.

[13] 陳福權(quán).變態(tài)反應(yīng)與慢性鼻-鼻竇炎[J].臨床耳鼻咽喉頭頸外科雜志，2017，31(1)：18-22.

[14] Dahl CA，Schall RP，He HL，etal. Identification of a novel gene expressed in activated natural killer cells and T cells[J]. J Immunol，1992，148(2)：597-603.

[15] Kim SH，Han SY，Azam TA，etal. Interleukin-32: a cytokine and inducer of TNFalpha[J]. Immunity，2005，22(1)：131-142.

[16] Nam SY，Kim HM，Jeong HJ. Attenuation of IL-32-induced caspase-1 and nuclear factor-κB activations by acteoside[J]. Int Immunopharmacol，2015，29(2)：574-582.

[17] 唐金勇，曹春華，文浩杰.IL-32在慢性鼻竇炎組織中的表達及機理研究[J].中國耳鼻咽喉顱底外科雜志，2014，20(3)：208-210.

[18] Keswani A，Chustz RT，Suh L，etal. Differential expression of interleukin-32 in chronic rhinosinusitis with and without nasal polyps[J]. Allergy，2012，67(1)：25-32.

[19] 李宗華，郝銀麗，鄔玉龍.某部軍人變應(yīng)性鼻炎的流行病學(xué)調(diào)查[J].西北國防醫(yī)學(xué)雜志，2016，37(3)：190-191.

[20] 姜宇英，諸葛盼，尤慧華，等.慢性鼻-鼻竇炎患者的主觀癥狀調(diào)查及護理對策[J].解放軍護理雜志，2011，28(7)：11-13.