袁　毅，張一平，董曼佳，熊曉輝，嚴(yán)藝琳，張東升

(1.貴州省糧油產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)站，貴州 貴陽 550001；2.江蘇省蘇微微生物研究有限公司， 江蘇 無錫 214063；3.南京工業(yè)大學(xué) 食品與輕工學(xué)院，江蘇 南京 211800)

黃曲霉毒素(aflatoxin，AFT)是由黃曲霉和寄生曲霉等真菌產(chǎn)生的一類有毒次生代謝物[1]，基本結(jié)構(gòu)為二呋喃環(huán)和香豆素 (氧雜萘鄰?fù)?[2]。依據(jù)其化學(xué)結(jié)構(gòu)不同，主要有20余種衍生物[3]，其中，黃曲霉毒素B1的毒性和致癌性最強(qiáng)[4]，1993年被世界衛(wèi)生組織(WHO)的癌癥研究機(jī)構(gòu)列為 Ⅰ 類致癌物[5]。歐盟在1999年頒布的《EC No.1525/98號(hào)法令》規(guī)定，直接提供人類食用的食物及組成食品的組分中，黃曲霉毒素 B1含量不得大于2 μg/kg[6]。我國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB 2761—2017中規(guī)定，黃曲霉毒素B1允許量標(biāo)準(zhǔn)為玉米、花生仁、花生油不得超過20 μg/kg，大米及其他食用油不得超過10 μg/kg，其他糧食、豆類、發(fā)酵食品不得超過5 μg/kg，嬰幼兒食品不得超過0.5 μg/kg[7]。

時(shí)間分辨熒光免疫層析法(TRFIA法)是利用抗原與抗體免疫反應(yīng)的高度特異性以及納米稀土元素作為熒光標(biāo)記示蹤物的高度靈敏性而建立起來的一種微量物質(zhì)檢測(cè)技術(shù)，具有簡(jiǎn)便、快速、高靈敏的特點(diǎn)[8-10]。目前國(guó)內(nèi)已研發(fā)出專門針對(duì)真菌毒素的TRFIA技術(shù)及其檢測(cè)卡(或試紙條)，用于毒素含量的現(xiàn)場(chǎng)實(shí)時(shí)檢測(cè)[11-13]，并已將TRFIA法測(cè)定飼料中黃曲霉毒素B1列為農(nóng)業(yè)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)[14]。

目前，關(guān)于真菌毒素檢測(cè)不確定度的評(píng)定主要集中于酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)[15-16]和高效液相色譜(HPLC)法[17-18]，未見關(guān)于TRFIA法的文章。為了推動(dòng)TRFIA技術(shù)在食品、飼料檢測(cè)中的應(yīng)用，對(duì)其測(cè)量不確定度進(jìn)行評(píng)定是非常必需的。本文中，筆者采用TRFIA法測(cè)定大米中黃曲霉毒素 B1含量，根據(jù)CNAS-GL06：2006《化學(xué)分析中不確定度的評(píng)估指南》中提供的方法[19]，對(duì)結(jié)果進(jìn)行包括不確定度來源及其量化和評(píng)定在內(nèi)的分析，旨在指導(dǎo)檢測(cè)人員關(guān)注TRFIA法檢測(cè)的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，提高檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性。

1　材料與方法

1.1　材料和試劑

樣品隨機(jī)抽樣自市售大米。

黃曲霉毒素B1時(shí)間分辨熒光免疫層析卡(簡(jiǎn)稱檢測(cè)卡)，江蘇省蘇微微生物研究有限公司。

甲醇、蔗糖、吐溫-20、Na2HPO4·12H2O、NaH2PO4·2H2O，國(guó)藥集團(tuán)上海生化試劑公司(均為分析純)。黃曲霉毒素B1標(biāo)準(zhǔn)溶液、牛血清白蛋白(BSA)，美國(guó)Sigma公司(純度均大于98%)。0.2 mol/L Na2HPO4緩沖液(71.63 g的Na2HPO4·12H2O，用水溶解并定容到1 L)。0.2 mol/L NaH2PO4緩沖液(31.20 g的NaH2PO4·2H2O，用水溶解并定容到1 L)。pH7.2、0.1 mol/L的磷酸緩沖液PB(取0.2 mol/L Na2HPO4緩沖液360 mL， 0.2 mol/L NaH2PO4緩沖液140 mL，用水定容至1 L)。1.5 g蔗糖、0.2 g牛血清白蛋白、2.5 g吐溫-20，溶解于100 mL PB中，制成樣品稀釋液。

以上實(shí)驗(yàn)用水均符合GB/T 6682—2008中一級(jí)水的要求[20]。

1.2　儀器設(shè)備和計(jì)量器具

PL203型電子分析天平(分度值0.01 g、最大量程210 g)，梅特勒-托利多(上海)；DFY-500型搖擺式高速中藥粉碎機(jī),溫嶺市林大機(jī)械有限公司；GKC214型恒溫水浴鍋(溫控范圍為室溫～100 ℃，水溫波動(dòng)≤0.5 ℃，溫差≤1 ℃)，上海蘇達(dá)實(shí)驗(yàn)儀器有限公司；MX-F型振蕩器，北京大龍實(shí)驗(yàn)室；SW-2型時(shí)間分辨熒光分析儀(激發(fā)波長(zhǎng)(365±5) nm、檢測(cè)波長(zhǎng)(615±5) nm)，在0.00～1.00比值(T/C除以T0/C0)范圍內(nèi)的熒光強(qiáng)度重復(fù)性為0.5%，江蘇省蘇微微生物研究有限公司。

50 mL玻璃量筒(最大容量允差±0.5 mL)、100 mL玻璃量筒(最大容量允差±1.0 mL)，BOMEX公司；200 μL微量移液器(最大容量允差±1.2 μL)、1 000 μL微量移液器(最大容量允差±5.0 μL)，Thermo公司。

1.3　提取方法

將樣品粉碎至全部通過0.9 mm分樣篩，充分混合均勻。

準(zhǔn)確稱取粉碎后的樣品5.00 g于250 mL三角瓶中，加入50 mL 70%(體積分?jǐn)?shù))甲醇溶液，搖床振蕩提取20 min，經(jīng)定性濾紙和布氏漏斗過濾，收集濾液。取100 μL的該濾液與600 μL室溫下的樣品稀釋液，經(jīng)振蕩器混合，即得待測(cè)試樣。

1.4　測(cè)定步驟

平衡：將檢測(cè)卡從冷藏狀態(tài)(2～8 ℃)取出，放置室溫平衡15 min。

測(cè)定：準(zhǔn)確移取100 μL待測(cè)試樣，加到檢測(cè)卡的試樣孔中；室溫下反應(yīng)10 min后，將其放入時(shí)間分辨熒光分析儀中；選擇激發(fā)波長(zhǎng)365 nm、檢測(cè)波長(zhǎng)615 nm，點(diǎn)擊儀器主界面“測(cè)量”菜單中“樣品及時(shí)測(cè)量”按鈕，檢測(cè)T線熒光強(qiáng)度與C線熒光強(qiáng)度，由儀器讀出T/C值(T線與C線熒光強(qiáng)度比值)。

1.5　數(shù)據(jù)計(jì)算

1.5.1標(biāo)準(zhǔn)曲線制備

1)準(zhǔn)確吸取黃曲霉毒素B1標(biāo)準(zhǔn)溶液于10 mL容量瓶中，甲醇定容，配制成5 ng/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液,準(zhǔn)確移取標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液,用10%甲醇+90%樣品稀釋液定容，配制成質(zhì)量濃度為0、0.01、0.02、0.05、0.1、0.2和0.5 ng/mL的黃曲霉毒素B1標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。

2)由低濃度到高濃度，分別取標(biāo)準(zhǔn)工作溶液100 μL加至檢測(cè)卡的試樣孔中，于25 ℃恒溫水浴鍋中反應(yīng)10 min后，將其放入時(shí)間分辨熒光分析儀中，在激發(fā)波長(zhǎng)365 nm、檢測(cè)波長(zhǎng)615 nm條件下，檢測(cè)T線熒光強(qiáng)度與C線熒光強(qiáng)度，由儀器讀出T/C值。

3)以標(biāo)準(zhǔn)工作溶液的濃度對(duì)數(shù)值(lgXi)為橫坐標(biāo)，以各濃度標(biāo)準(zhǔn)工作溶液的T/C值與0 ng/mL標(biāo)準(zhǔn)液的T0/C0值的比值(Yi)為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1.5.2試樣中毒素濃度的計(jì)算

按照“1.4測(cè)定步驟”測(cè)得試樣的T/C值，再除以0 ng/mL標(biāo)準(zhǔn)液的T0/C0值；根據(jù)所得比值，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出試樣中黃曲霉毒素B1的濃度對(duì)數(shù)值lgX樣，求反對(duì)數(shù)計(jì)算出試樣中黃曲霉毒素B1的濃度值X樣(ng/mL)。

1.6　數(shù)學(xué)模型

樣品中黃曲霉毒素B1含量(C)的計(jì)算公式為

(1)

式中：C—樣品中黃曲霉毒素B1含量，μg/kg；X樣—試樣中黃曲霉毒素B1的質(zhì)量濃度，ng/mL；V—提取液的體積，50 mL；n—稀釋倍數(shù)，n=7；m—樣品取樣的質(zhì)量，5 g；f—回收率校正因子， 1.005 9。

1.7　不確定度分量的來源

測(cè)定步驟主要包括樣品稱量、毒素萃取、濾液稀釋、檢測(cè)卡平衡、免疫層析反應(yīng)、熒光強(qiáng)度讀數(shù)、標(biāo)準(zhǔn)曲線制備和數(shù)據(jù)處理等過程，這一系列過程都會(huì)引入誤差。

但在實(shí)際測(cè)定中，如標(biāo)準(zhǔn)曲線制備、萃取、平衡、反應(yīng)等操作引入的不確定度是難以量化的。因此，結(jié)合實(shí)際工作可以采用標(biāo)準(zhǔn)曲線擬合、回收率校正因子、重復(fù)性等方法來對(duì)這些步驟的不確定度進(jìn)行評(píng)定，即指A類評(píng)定，主要有①標(biāo)準(zhǔn)曲線擬合引入的不確定度Ux；②回收率校正因子的不確定度Ur；③重復(fù)性檢測(cè)引入的不確定度Uc。

對(duì)于稱量、量取、稀釋、加樣、反應(yīng)時(shí)間、讀數(shù)和數(shù)據(jù)處理等引入的不確定度，可以通過天平、量筒、微量移液器和時(shí)間分辨熒光分析儀等的誤差以及線性相關(guān)系數(shù)來評(píng)定，屬B類評(píng)定，主要有①樣品稱量引入的不確定度Um；②樣品提取引入的不確定度Us；③TRFIA實(shí)驗(yàn)操作過程引入的不確定度Up；④時(shí)間分辨熒光分析儀讀數(shù)引入的不確定度Ui；⑤數(shù)據(jù)處理引入的不確定度Ud。

2　結(jié)果與討論

2.1　不確定度分量的量化和評(píng)定

2.1.1標(biāo)準(zhǔn)曲線擬合引入的不確定度

按照“1.5.1標(biāo)準(zhǔn)曲線制備”的描述，對(duì)質(zhì)量濃度分別為0、0.01、0.02、0.05、0.1、0.2和0.5 ng/mL共7個(gè)黃曲霉毒素B1標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，各做2次平行測(cè)定，測(cè)定結(jié)果見表1。

以標(biāo)準(zhǔn)工作溶液各濃度對(duì)數(shù)值(lgXi)為橫坐標(biāo)，以標(biāo)準(zhǔn)工作溶液各濃度(T/C)/(T0/C0)平均值(Yi)為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(限于篇幅，文中未列出)。根據(jù)表1，擬合得標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程為：Yi=-0.525lgXi-0.111 4，r=0.993 6。

標(biāo)準(zhǔn)曲線的標(biāo)準(zhǔn)偏差SR和計(jì)算見式(2)。

(2)

式中：lgXi、Yi分別為表1中第3列和第7列的各項(xiàng)數(shù)據(jù)；n為標(biāo)準(zhǔn)工作溶液的測(cè)定總次數(shù)，n=7×2(7個(gè)標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)量濃度，每個(gè)濃度測(cè)2次)。

表1　系列標(biāo)準(zhǔn)工作溶液的T/C值和Yi值(n=14)

標(biāo)準(zhǔn)曲線擬合引入的關(guān)于濃度對(duì)數(shù)值(lgX樣)的標(biāo)準(zhǔn)不確定度U(lgX)的計(jì)算方法：稱取同一粉碎后的樣品10份，然后按照“1.3 提取方法”制備成10份待測(cè)試樣液，采用“1.4測(cè)定步驟”進(jìn)行測(cè)定，每份樣平行測(cè)定2次，測(cè)定結(jié)果見表2。

表2　試樣液測(cè)定結(jié)果(p=20)

標(biāo)準(zhǔn)曲線擬合引入的關(guān)于濃度值的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度Ux相對(duì)的計(jì)算方法如下。

(3)

式中：p為試樣液的測(cè)定總次數(shù)，p=10×2(10份待測(cè)試樣液，每份樣測(cè)2次)；n為標(biāo)準(zhǔn)工作溶液的測(cè)定總次數(shù)，n=7×2(7個(gè)標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)量濃度，每個(gè)濃度測(cè)2次)。

鑒于這兩點(diǎn)原因，本文中，筆者參照微生物計(jì)數(shù)測(cè)量的不確定度評(píng)估文獻(xiàn)[21-22]，通過計(jì)算真實(shí)濃度值(X真)的取值區(qū)間而求出關(guān)于濃度值的標(biāo)準(zhǔn)不確定度Ux，再計(jì)算出相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度。

試樣的真實(shí)濃度對(duì)數(shù)值范圍lgX真=lgX樣±0.008 110=lg0.075 23±0.008 110=-1.123 61±0.008 110

求反對(duì)數(shù)計(jì)算出試樣的真實(shí)濃度值區(qū)間X真=10(-1.123 61±0.008 110)=0.073 838～0.076 648 (ng/mL)

Ux=±(0.076 648-0.073 838)/2=±0.001 405 (ng/mL)

則標(biāo)準(zhǔn)曲線擬合引入的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度Ux相對(duì)的計(jì)算公式為

(4)

2.1.2回收率校正因子的不確定度

稱取同一粉碎后的樣品3份，按5、10和20 μg/kg 3個(gè)不同濃度水平加入黃曲霉毒素B1標(biāo)準(zhǔn)品，然后立即按照“1.3 提取方法”制備成3份待測(cè)試樣液，采用“1.4測(cè)定步驟”進(jìn)行測(cè)定，每份樣平行測(cè)定3次，根據(jù)測(cè)定結(jié)果計(jì)算回收率，見表3。

根據(jù)表3的結(jié)果，按照貝塞爾公式計(jì)算樣本回收率的標(biāo)準(zhǔn)偏差,見式(5)。

%

(5)

式中：Xi為表3中第2列的各項(xiàng)數(shù)據(jù)；n為試樣液的測(cè)定總次數(shù)，n=3×3(3份試樣液，每份測(cè)3次)。

回收率校正因子的標(biāo)準(zhǔn)不確定度Ur的計(jì)算公式為

%

(6)

則回收率校正因子的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度Ur相對(duì)的計(jì)算公式為

(7)

2.1.3重復(fù)性檢測(cè)引入的不確定度

稱取同一粉碎后的樣品10份，然后按照“1.3 提取方法”制備成10份待測(cè)試樣液，采用“1.4測(cè)定步驟”進(jìn)行測(cè)定，每份樣平行測(cè)定2次，測(cè)定結(jié)果見表4。

根據(jù)表4的結(jié)果，按照貝塞爾公式計(jì)算樣本重復(fù)性檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)偏差，見式(8)。

(8)

重復(fù)性檢測(cè)引入的標(biāo)準(zhǔn)不確定度Uc，計(jì)算見式(9)。

(9)

則重復(fù)性檢測(cè)引入的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度Uc相對(duì)，計(jì)算見式(10)。

(10)

表4　樣品重復(fù)測(cè)定結(jié)果(n=20)

2.1.4樣品稱量引入的不確定度

為了計(jì)算方便，設(shè)樣品實(shí)際稱質(zhì)量為5.00 g，則樣品稱量引入的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度

Um相對(duì)=Um/5.00=0.004 082/5.00=0.000 816 4

2.1.5樣品提取引入的不確定度

1)甲醇純度的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度計(jì)算

配制70%甲醇溶液引入的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度計(jì)算方法如下。

2)量取70%甲醇溶液引入的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度計(jì)算

量取70%甲醇溶液引入的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度為

3)濾液稀釋引入的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度計(jì)算

則樣品稀釋引入的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度為

將以上四項(xiàng)合成，則樣品提取引入的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度為

2.1.6TRFIA實(shí)驗(yàn)操作過程引入的不確定度

1)微量移液器加樣引入的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度計(jì)算

Up1相對(duì)=0.692 8/100=0.006 928

2)反應(yīng)時(shí)間的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度計(jì)算

Up2相對(duì)=2.886 8/(10×60)=0.004 811

將以上兩項(xiàng)合成，則TRFIA實(shí)驗(yàn)操作過程引入的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度為

2.1.7時(shí)間分辨熒光分析儀讀數(shù)引入的不確定度

根據(jù)儀器檢定證書提供，SW-2型時(shí)間分辨熒光分析儀在0.00～1.00比值(T/C除以T0/C0)范圍內(nèi)的熒光強(qiáng)度重復(fù)性為0.5%，則儀器讀數(shù)引入的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度為

Ui相對(duì)=0.005

2.1.8數(shù)據(jù)處理引入的不確定度

本文中，筆者通過制備標(biāo)準(zhǔn)曲線圖形來讀取和計(jì)算大米樣品中的黃曲霉毒素B1含量，在這個(gè)過程中必然帶來數(shù)據(jù)處理上的不確定度，該不確定度可以通過線性相關(guān)系數(shù)來反映。

鑒于所測(cè)定的大米樣品中黃曲霉毒素B1含量總是在一段標(biāo)準(zhǔn)曲線內(nèi)(0～0.5 ng/mL)呈線性關(guān)系，則該段區(qū)間內(nèi)曲線的線性相關(guān)系數(shù)就表征了該含量值的不確定度。根據(jù)實(shí)驗(yàn)過程中經(jīng)驗(yàn)數(shù)據(jù)，r=0.993 6，則數(shù)據(jù)處理引入的近似相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度為

Ud相對(duì)=0.006 4

2.2　合成不確定度

將從2.1.1～2.1.8各個(gè)不確定度分量及其評(píng)定結(jié)果，匯總列于表5中。

表5　不確定度分量及其評(píng)定結(jié)果匯總

由表5可知，本文采用TRFIA法測(cè)定大米中黃曲霉毒素B1含量，其中標(biāo)準(zhǔn)曲線擬合與重復(fù)性檢測(cè)帶來的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度分別為20.82%和23.27%，總占比為44.09%。吳彬等[23]采用ELISA法測(cè)定月餅中黃曲霉毒素B1含量，而張施敬等[24]采用ELISA法測(cè)定花生油中黃曲霉毒素B1含量，標(biāo)準(zhǔn)曲線擬合與重復(fù)性檢測(cè)帶來的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度總占比分別達(dá)到了56.09%和80.35%。不確定度均主要來源于標(biāo)準(zhǔn)曲線擬合與重復(fù)性檢測(cè)，原因可能是TRFIA法與ELISA法都基于抗原與抗體的特異性免疫反應(yīng)，對(duì)于免疫檢測(cè)不可能100%完全重復(fù)，在不確定度分量的影響力方面表現(xiàn)出共同的特征。

因各不確定度分量相互獨(dú)立，故將表5中的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度進(jìn)行合成，則得到TRFIA法測(cè)定大米中黃曲霉毒素B1含量的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)合成不確定度為

2.3　總不確定度(擴(kuò)展不確定度)

按國(guó)際慣例，取置信概率為95%，包含因子k=2，則TRFIA法測(cè)定大米中黃曲霉毒素B1含量的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)總不確定度為

張施敬等[24]采用ELISA法測(cè)定花生油中黃曲霉毒素B1含量以及吳彬等[23]采用ELISA法測(cè)定月餅中黃曲霉毒素B1含量，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)總不確定度分別為5.33%和3.62%。本文采用TRFIA法測(cè)定大米中黃曲霉毒素B1含量，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)總不確定度略高于前兩篇文獻(xiàn)。分析原因，除了與測(cè)定樣品、測(cè)定條件、測(cè)定步驟和儀器讀數(shù)不同有關(guān)外，TRFIA法與ELISA最大的區(qū)別在于，前者為樣本在層析膜上流動(dòng)的免疫檢測(cè)，因此流速對(duì)測(cè)試的結(jié)果影響很大，有可能通過A類不確定度和B類不確定度的分量表現(xiàn)出來。

2.4　測(cè)量不確定度報(bào)告

TRFIA法測(cè)定大米中黃曲霉毒素B1含量的結(jié)果表示為

C=5.235 2(1±0.074 06)μg/kg，或C=(5.235 2±0.387 7)μg/kg，置信概率p=95%。

3　結(jié)論

本文中，筆者通過各種不確定度分量的分析，采用TRFIA法測(cè)定大米中的黃曲霉毒素B1含量，其不確定度主要來源于標(biāo)準(zhǔn)曲線擬合、重復(fù)性檢測(cè)與樣品提取，分別占比20.82%、23.27%和19.35%；次要來源是回收率校正因子、TRFIA實(shí)驗(yàn)操作、時(shí)間分辨熒光分析儀讀數(shù)和數(shù)據(jù)處理，分別占比13.53%、9.40%、5.57%和7.13%；而樣品稱量導(dǎo)致的不確定度可以忽略不計(jì)。因此，在實(shí)際檢測(cè)工作中，應(yīng)首先制備一條準(zhǔn)確且穩(wěn)定的標(biāo)準(zhǔn)曲線，并適當(dāng)增加平行樣的測(cè)定次數(shù)；此外，提取過程中還需注意溶液配制、量取和稀釋等操作的準(zhǔn)確度，這些關(guān)鍵環(huán)節(jié)對(duì)提高TRFIA法的準(zhǔn)確性和可靠性都具有非常重要的指導(dǎo)作用。

本文采用TRFIA法測(cè)定大米中黃曲霉毒素B1的結(jié)果為(5.235 2±0.387 7)μg/kg，即有95%的可能性在4.847 5～5.622 9 μg/kg范圍內(nèi)。根據(jù)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB 2761—2017中規(guī)定[7]，稻谷、糙米、大米中黃曲霉毒素B1含量標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)小于10 μg/kg，被測(cè)大米可判斷為合格樣品。對(duì)測(cè)定結(jié)果給出了一個(gè)較準(zhǔn)確的波動(dòng)范圍，尤其在檢測(cè)結(jié)果接近標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定臨界值時(shí)，可以降低誤判風(fēng)險(xiǎn)。

總之，TRFIA法適用于現(xiàn)場(chǎng)實(shí)時(shí)監(jiān)控和大批量樣品的分級(jí)篩選，在大米質(zhì)量檢驗(yàn)中具有良好的應(yīng)用前景。本文所建立的不確定度評(píng)定方法可用于TRFIA法測(cè)定大米中黃曲霉毒素B1含量結(jié)果的評(píng)定。

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