賀國麗，吳秀榮，鄭碧娟，王 雪，崔開穎

(海南省人民醫(yī)院，海南 海口 570311)

宮頸癌仍然是當(dāng)今嚴(yán)重威脅女性健康的婦科惡性腫瘤，我國每年新增宮頸癌患者13.5萬，占全球新發(fā)病數(shù)量的1/3，其中約8萬人死亡[1]。高危型人乳頭瘤病毒(human papillomavirus，HPV)持續(xù)感染是宮頸病變與宮頸癌的主要病因之一。本研究對5 959例女性人群進(jìn)行了HPV的分型檢測和基本信息的收集，現(xiàn)將結(jié)果分析報告如下。

1資料與方法

1.1研究對象

采集2015年1月至2016年5月海南省19個市縣普通人群5 959例宮頸脫落細(xì)胞標(biāo)本，同時收集個人的基本信息。納入研究的人群年齡在23～69歲之間；職業(yè)有干部、個體、工人、農(nóng)民、無業(yè)；民族有漢族、黎族、苗族、滿族、回族、瑤族、壯族。文化程度有大學(xué)、中學(xué)、小學(xué)、未接受系統(tǒng)教育；調(diào)查避孕方式、生育胎次、對宮頸癌可以早期篩查的知曉情況。所有研究對象均知情同意。

1.2試劑與儀器

凱普HPVDNA提取試劑盒、DNA擴(kuò)增試劑盒和HPV核酸分型檢測試劑盒(潮州凱普生物化學(xué)有限公司)、多聚酶鏈反應(yīng)(polymerase chain reaction,PCR)擴(kuò)增儀、Hybrmiax醫(yī)用核酸分子雜交儀。

1.3標(biāo)本采集

擴(kuò)陰器暴露宮頸后，用特制取樣刷順時針轉(zhuǎn)5圈以上，將刷頭折斷放入已加有專用細(xì)胞保存液的取樣管中，立即送檢或4℃保存?zhèn)錂z。

1.4分型檢測

1.4.1 DNA模板的制備

樣本制備過程按凱普公司HPVDNA提取試劑盒使用說明進(jìn)行。將樣品管渦旋振蕩混勻，取500μL細(xì)胞保存液，14 000r/min離心5min，沉淀加400μL溶液Ⅰ于100℃水浴15min，再加入400μL溶液Ⅱ，14 000r/min離心5min，棄上清，獲取核酸沉淀，用60μL溶液Ⅲ溶解核酸沉淀后備用。

1.4.2 PCR擴(kuò)增

使用凱普DNA擴(kuò)增試劑盒擴(kuò)增，反應(yīng)體系及反應(yīng)條件根據(jù)試劑盒說明書。每管23.25μLPCRmix和0.75μLTaq酶配制擴(kuò)增反應(yīng)液，各加已提取DNA樣本模板1μL進(jìn)行擴(kuò)增。PCR反應(yīng)條件為95℃預(yù)變性9min，95℃20s，55℃30s，72℃30s，共40個循環(huán)，72℃延伸5min。

1.4.3 雜交并顯色

按照Hybrmiax醫(yī)用核酸分子雜交儀操作步驟進(jìn)行雜交試驗并顯色。

1.4.4結(jié)果判讀

檢測結(jié)果陽性為肉眼清晰可見的紫藍(lán)色圓點，根據(jù)試劑盒提供的膜條HPV分型分布圖判讀結(jié)果。包括HPV6、11、16、18、31、33、35、39、42、43、44、45、51、52、53、56、58、59、66、68、73、82、cp8304亞型。

1.5統(tǒng)計學(xué)方法

所有數(shù)據(jù)采用SPSS 18.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行分析，計數(shù)資料組間比較采用卡方檢驗，以P<0.05為有統(tǒng)計學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1參檢人群的年齡與HPV感染

不同年齡段中HPV陽性率有顯著性差異(χ2=48.15，P=0.005)，>60歲年齡段的HPV陽性率最高(占22.73%)，其次為20～30歲年齡段(占17.84%)，見表1。

2.2參檢人群的職業(yè)與HPV感染

不同職業(yè)中HPV陽性率有顯著性差異(χ2=9.59，P=0.025)，以無業(yè)人員HPV陽性率最高(14.17%)，見表2。

表1 參檢人群年齡及HPV分布情況Table 1 Distribution of age and HPV infection among the enrolled women

表2 參檢人群職業(yè)及HPV感染分布情況Table 2 Distribution of occupation and HPV infection among the enrolled women

2.3參檢人群的民族與HPV感染

在參檢人群的民族中，除外HPV檢測陰性的少數(shù)民族，漢族人群的HPV感染率高于黎族人群(χ2=41.19，P=0.005)，見表3。

表3 參檢人群民族及HPV感染情況Table 3 Distribution of nationality and HPV infection among the enrolled women

2.4參檢人群的生育與HPV感染

不同生育胎次之間HPV陽性率有顯著性差異(χ2=85.29，P=0.005)，生育胎次多者HPV感染率較胎次少者為低，見表4。

表4 參檢人群生育及HPV感染情況Table 4 Distribution of number of birth and HPV infection among the enrolled women

2.5參檢人群的文化程度與HPV感染

參檢人群的中接受文化教育的程度與HPV感染率有一定關(guān)系，既文化程度較高者HPV感染率要小于文化程度低者(χ2= 97.81，P=0.005)，見表5。

表5 參檢人群的文化程度及HPV感染情況Table 5 Educational level and HPV infection among the enrolled women

2.6參檢人群的避孕方式與HPV感染

不同避孕方法中HPV陽性率有顯著性差異(χ2=92.81，P=0.005)，輸卵管結(jié)扎者的HPV感染率最低，見表6(口服避孕藥的人數(shù)過少，未納入差異分析)。

表6 參檢人群避孕情況及HPV感染情況Table 6 Distribution of contraception and HPV infection among the enrolled women

2.7參檢人群的宮頸外觀表現(xiàn)與HPV感染情況

在宮頸外觀上，宮頸柱狀上皮是否有異位及異位范圍的大小與HPV感染無明顯相關(guān)性(χ2=7.15，P=0.100)，見表7。

表7 參檢人群宮頸外觀及HPV感染情況Table 7 Cervix appearance and HPV infection among the enrolled women

2.8參檢人群對宮頸癌早期篩查知曉情況

參檢人群中，不知道宮頸癌是可以早期篩查的比例達(dá)41.94%。

2.9受檢者高危HPV分型情況

受檢人群的高危HPV型別有17種，分布廣泛，由高到低依次為HPV52(3.14%)、HPV16(1.65%)、HPV58(1.34%)、HPV39(0.99%)、HPV18(0.94%)、HPV66(0.74%)、HPV68(0.60%)、HPV51(0.49%)、HPV53/56(0.34%)、HPV59/33(0.27%)、HPV45(0.20%)、HPV31(0.17%)、HPV82(0.10%)、HPV35(0.07%)、HPV73(0.02%)。

3討論

宮頸癌在本省位居女性生殖系統(tǒng)惡性腫瘤之首，多年來一直居高不下，就診時期別偏晚者不在少數(shù)，對家庭和社會均造成極大的經(jīng)濟(jì)和精神負(fù)擔(dān)，情況令人堪憂。

3.1人群的HPV感染情況

本課題受到省社會發(fā)展專項資金的資助，對本省19個市縣普通人群5 959人進(jìn)行了23型別HPV的分型檢測，結(jié)果HPV陽性者758例，其中高危型HPV感染694例，高危型HPV感染率11.65%，較本地區(qū)門診就診者31.36%的感染率明顯低[2]，說明門診就診人群與普通人群的HPV感染情況是不同的，門診的陽性率是不能代表人群陽性率的。國內(nèi)還沒有公布全國性的宮頸HPV感染情況，本資料的結(jié)果較2007年喬友林等報告的我國平均水平14.2%稍低。本資料中的高危型別由高到低順序依次為HPV52(187例)、HPV16(98例)、HPV58(80例)、HPV39(59例)、HPV18(56例)、HPV66(44例)、HPV68(36例)、HPV51(29例)、HPV53和HPV56(20例)、HPV59和HPV33(16例)、HPV45(12例)、HPV31(10例)、HPV82(6例)、HPV35(4例)、HPV73(1例)，與國內(nèi)的大部分報道及本地區(qū)門診就診者的統(tǒng)計結(jié)果基本一致[2-3]。

3.2人群的臨床基本信息與HPV感染的關(guān)系

研究認(rèn)為HPV感染與年齡有關(guān)，感染率隨年齡的增加而升高[4-5]。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，不同年齡段中HPV陽性率有顯著性差異(P<0.05)，>60歲年齡段的HPV陽性率最高(22.73%)，其次為20～30歲年齡段(17.84%)，說明這二個年齡段是HPV的易感人群。在低年齡女性存在性活躍、衛(wèi)生保健知識和意識缺乏，流產(chǎn)分娩多等事件；而在老年女性雌激素水平下降、機(jī)體免疫力降低、身體基礎(chǔ)疾病較多[2,6]。提示60歲以后人群仍是篩查中不應(yīng)忽視的高危人群；年輕女性抵御HPV感染的能力差，預(yù)防性疫苗應(yīng)該在青春期和青春前期應(yīng)用。

生育胎次的分析中顯示，在3胎以下人群的HPV陽性率是隨胎次的增加呈現(xiàn)降低的表現(xiàn)，而3胎以上的HPV陽性率又有上升的表現(xiàn)。說明多次妊娠、生產(chǎn)對宮頸的反復(fù)損傷及修復(fù)過程是會增加HPV侵襲的。

隨著文化程度的降低，HPV陽性率呈現(xiàn)增加的趨勢，其中未受教育者最高，其次為小學(xué)程度者，差異有統(tǒng)計學(xué)意義。顯示HPV感染與受教育的情況有關(guān)，因為文化程度是會明顯影響到人群對保健知識的接受水平、健康意識的強(qiáng)弱、生活及衛(wèi)生習(xí)慣的好壞。

在避孕方式的分析中，輸卵管結(jié)扎者的HPV陽性率最低，而其它方式之間無差異。提示避孕套似乎并不能阻擋HPV的傳播，當(dāng)然這里還存在這部分受檢者可能是通過其它途徑而非性行為感染了HPV以及她們并沒有常規(guī)使用避孕套的原因。因口服避孕藥者人數(shù)太少，且均無HPV檢出，故未列入差異的統(tǒng)計分析。

本資料中受檢人宮頸是否有柱狀上皮異位(“糜爛”)以及異位的程度范圍與HPV感染率無統(tǒng)計學(xué)意義，說明雖然“糜爛”(異位)的上皮菲薄會導(dǎo)致抵抗病原體侵襲能力較差，但單純的宮頸“糜爛”可能還不是易患HPV感染的主要因素。

黎族是本省的最主要少數(shù)民族，本資料中黎族人群的HPV陽性率為7.13%，而漢族人群是14.26%陽性率，差異有統(tǒng)計學(xué)意義。一項本地區(qū)宮頸病變病例的分析結(jié)果顯示，在438例宮頸癌中，漢族402例，占91.78%；黎族30例，占6.85%；629例癌前病變中，漢族607例，占96.50%；黎族21例，占3.33%[7]。這二項結(jié)果顯示黎族的HPV感染率和宮頸病變發(fā)生率均較低，是否在不同民族間存在著HPV易感基因或易感因素的差異還有待于進(jìn)一步研究。

3.3人群對宮頸癌早期篩查的認(rèn)知

在發(fā)展中國家，宮頸癌占所有婦科腫瘤的20%～30%，而在發(fā)達(dá)國家僅為4%～6%，導(dǎo)致這種顯著差別的主要原因是早期篩查的重視和推廣，使多數(shù)高危者得到早發(fā)現(xiàn)早診斷早治療[3，8]。目前我國的人群篩查率屬低水平，城市為29.1%，經(jīng)濟(jì)發(fā)達(dá)地區(qū)為31.3%，農(nóng)村為16.9%。在本資料的人群中，對于是否知曉宮頸癌可以早期篩查的調(diào)查結(jié)果是，表示知道的占58.06%，而表示不知道的為41.94%，雖然前者的比例高于后者，但后者的占比仍屬相當(dāng)高，說明公眾對宮頸癌預(yù)防的認(rèn)知度和宮頸癌相關(guān)信息的了解程度還很不理想，我們所面臨的宮頸癌防治工作壓力巨大，任重道遠(yuǎn)。

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