片靜

【摘要】目的 單核苷酸多態(tài)性微陣列（Single nucleotide polymorphisms array，SNP array）技術(shù)和染色體核型分析的聯(lián)合應(yīng)用在超聲異常孕婦產(chǎn)前診斷過(guò)程中妊娠指導(dǎo)意義。方法 對(duì)在我院檢查超聲異常的8例孕婦知情同意后抽取羊水，對(duì)所有羊水樣本行染色體G帶核型分析和Affymetrix Cytoscan 750K 芯片分析檢測(cè)技術(shù)。結(jié)果 8例超聲異常孕婦中，1例核型分析正常，芯片異常，占：12.5%；1例核型異常，芯片正常，占12.5%；2例染色體核型分析和芯片均正常占25% ；4例染色體和核型分析均異常占50%。核型異常率為62.5%，芯片異常率為：37.5%.在醫(yī)生的建議和孕婦考慮下引產(chǎn)5例，選擇繼續(xù)妊娠3例。引產(chǎn)率為：62.5%。結(jié)論 兩種方法的聯(lián)合應(yīng)用能更有效地提高產(chǎn)前診斷的檢出率，有利于查明病因，結(jié)合環(huán)境因素，遺傳因素，為超聲異常孕婦妊娠決策提供較為有效的建議，并對(duì)二次生育父母提供更加有效的遺傳咨詢(xún)和指導(dǎo)作用。

【關(guān)鍵詞】超聲異常；染色體核型分析；SNP array

【中圖分類(lèi)號(hào)】R714 【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A 【文章編號(hào)】ISSN.2095-6681.2018.3..02

The effect of SNP-array chip technology and chromosome karyotype analysis on pregnancy guidance for abnormal ultrasound pregnant women

PIAN Jing

（Shandong Tai'an Maternal and Child Health-Care Hospital antenatal diagnosis center，

Shandong Taian，271000，China）

【Abstract】Objective Single nucleotide polymorphism micro array （Single nucleotide polymorphisms array， SNP array） technical and chromosome nuclear type analysis union application in supersonic unusual pregnant woman pre-natal diagnosis process pregnancy guiding sense.Methods To knows the circumstances of the matter the agreement after my courtyard inspection supersonic unusual 8 example pregnant woman to extract the amniotic fluid， to all amniotic fluid sample good chromosome G belt nuclear type analysis Conclusion Two method union applications can enhance the pre-natal diagnosis to pick out effectively rate， is advantageous in the fact-finding cause of disease， the union environmental factor， the heredity factor， provides a more effective suggestion for the supersonic unusual pregnant woman pregnancy decision-making， and to two times gives birth the parents to provide a more effective heredity to consult and to instruct the function.

【Key word】Supersonic exceptionally；Chromosome nuclear type analysis；SNP array

隨著醫(yī)學(xué)技術(shù)的發(fā)展，超聲異常孕婦經(jīng)多學(xué)科會(huì)診后，得知胎兒以后治療效果可能較好，部分孕婦經(jīng)歷多年不孕，習(xí)慣性流產(chǎn)，急切想保留胎兒，但由于染色體病及染色體的微小變異導(dǎo)致的疾病目前缺乏有效治療手段，危害巨大，因此我們可通過(guò)染色體核型分析與單核苷酸多態(tài)性（array-CGH）進(jìn)行聯(lián)合應(yīng)用，以排除染色體病和其他特定遺傳性疾病，對(duì)胎兒做進(jìn)一步臨床判斷，可以給孕婦提供最佳的生育咨詢(xún)指導(dǎo)。

1 資料和方法

1.1 一般資料

2017年3月份至今，超聲檢查發(fā)現(xiàn)胎兒發(fā)育異常，并且有保留胎兒的意向或者想查明超聲異常原因的孕婦8例，孕婦年齡24～37歲，平均年齡為33歲，孕周為18～26周，查體結(jié)果符合羊膜腔穿刺術(shù)要求。所有孕婦簽署知情同意書(shū)。

1.2 方法

1.2.1 染色體核型分析

超聲異常的孕婦在孕18～24周無(wú)菌條件下行羊膜腔穿刺，抽取三管羊水，每管10 ml。兩管離心棄上清，混勻分別接種于兩瓶分裝好的4.5 ml培養(yǎng)基250 ml的培養(yǎng)瓶中，分兩線于5%CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)7～8天，第二天取出觀察，視生長(zhǎng)情況換液，繼續(xù)培養(yǎng)24 h左右，當(dāng)有大量分裂期細(xì)胞時(shí)，加入秋水仙素繼續(xù)培養(yǎng)1 h后收獲-低滲-固定-制片-消化-G顯帶。鏡下20計(jì)數(shù)30個(gè)中期分裂相，兩線鏡下各分析5個(gè)核型，嵌合體加倍技術(shù)分析。染色體圖像分析系統(tǒng)兩線至少采3個(gè)圖。

1.2.2 SNP-array技術(shù)檢測(cè)

抽取的一管羊水，避免母血污染，用美國(guó)Affymetrix公司的750K SNP-array芯片，按試劑盒說(shuō)明書(shū)操作。提取基因組DNA，測(cè)定核酸濃度（DNA濃度≧50 ml），取5 ul進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)（核酸總量為250 ng）；進(jìn)行NspI酶切消化，獲得具有黏性末端的基因組DNA片段；在酶切產(chǎn)物兩端加上特異性識(shí)別該黏性末端的接頭；使用特異性識(shí)別該接頭的引物，進(jìn)行PCR擴(kuò)增，獲得高豐度的基因組DNA（片段大小為150～2000 bp）；磁珠純化，洗滌去除酶`dNPT`引物等，獲得純化的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物；對(duì)純化的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物，測(cè)定核酸濃度；使用片段化酶將基因組DNA進(jìn)一步切碎成更小的片段（片段大小為25～125 bp）；利用脫氧核苷酸末端轉(zhuǎn)移酶對(duì)小片段末端進(jìn)行標(biāo)記；標(biāo)記產(chǎn)物加入芯片中進(jìn)行雜交16～18 h，次日在洗滌工作站上進(jìn)行洗滌染色，去掉未雜交的DNA，放入芯片中進(jìn)行掃描，使用分析軟件計(jì)算并分析數(shù)據(jù)。

2 結(jié) 果

8例超聲異常孕婦中，4例核型異常，4例芯片異常。其中，1例核型分析正常，芯片異常12.5%，芯片結(jié)果顯示16，18號(hào)染色體微重復(fù)和微缺失，并且經(jīng)過(guò)數(shù)據(jù)庫(kù)查詢(xún)，該結(jié)果可導(dǎo)致胎兒智力低下，生長(zhǎng)發(fā)育遲緩，心臟畸形。1例核型異常，芯片正常12.5%，為染色體平衡易位，平衡易位由于是兩條染色體發(fā)生斷裂后相互交換，僅有位置的改變，沒(méi)有遺傳物質(zhì)的增減，所以，平衡易位攜帶者的臨床表型和智力均表現(xiàn)正常，孕婦選擇繼續(xù)妊娠。2例染色體核型分析和芯片均正常25%，在多學(xué)科會(huì)診和個(gè)人強(qiáng)烈意愿下，決定繼續(xù)妊娠，定期檢查。4例染色體和核型分析均異常50%，全部選擇引產(chǎn)。超聲指標(biāo)，核型和芯片結(jié)果及妊娠結(jié)局具體情況見(jiàn)表1和表2。

3 討 論

3.1 產(chǎn)前超聲結(jié)構(gòu)畸形的遺傳學(xué)分析

染色體異常包括數(shù)目和結(jié)構(gòu)異常，具有遺傳性和終身性。多數(shù)是由細(xì)胞有絲分裂或減數(shù)分裂過(guò)程中出錯(cuò)所致。產(chǎn)前超聲結(jié)構(gòu)畸形胎兒存在的染色體異常種類(lèi)大多數(shù)是微缺失、微重復(fù)、非整倍體等，一般是新發(fā)生的染色體異常。90%胎兒畸形是由染色體異?；蚺c環(huán)境因素共同作用而發(fā)生的[2]。

3.2 染色體核型分析

是目前的常規(guī)產(chǎn)前診斷技術(shù)，通常僅可檢測(cè)大于5 Mb的遺傳物質(zhì)改變[3]，給人直觀的大的圖像信息。而SNP array不僅能檢測(cè)出染色體的非整倍體，大片段的缺失和重復(fù)，而且可以發(fā)現(xiàn)核型分析常規(guī)技術(shù)手段難以檢出的染色體微缺失和重復(fù)，單親二倍體（UPD）[4]，檢測(cè)周期短，能提供客觀數(shù)據(jù)信息，尤其對(duì)新發(fā)突變，能確定片段來(lái)源。但由于SNP array技術(shù)對(duì)于異常細(xì)胞比例》30%的嵌合體結(jié)果比較可靠，對(duì)異常細(xì)胞比例<30%的結(jié)果不可靠【5】，另外，該技術(shù)并不適用染色體平衡易位、倒位和插入【5】。此時(shí)，染色體核型分析卻能彌補(bǔ)這一點(diǎn)。因此，兩者結(jié)合可大大增加產(chǎn)前診斷的檢出率。由于本實(shí)驗(yàn)室行羊膜腔穿刺，對(duì)于極低比例嵌合還應(yīng)結(jié)合臍帶血和其他手段驗(yàn)證真假嵌合。所以，對(duì)于產(chǎn)前超聲檢查發(fā)現(xiàn)胎兒異常時(shí)，建議在常規(guī)染色體核型分析基礎(chǔ)上行染色體微陣列分析技術(shù)的檢測(cè)[5]。

結(jié)合經(jīng)濟(jì)角度，對(duì)于產(chǎn)前超聲檢查發(fā)現(xiàn)有胎兒異常的孕婦，一般先建議行胎兒染色體核型分析，如結(jié)果異常，則可直接發(fā)放報(bào)告。如結(jié)果正常，可進(jìn)一步行SNP array技術(shù)檢測(cè)，對(duì)于異常結(jié)果，通過(guò)具有資質(zhì)的遺傳學(xué)醫(yī)生對(duì)結(jié)果的正確判讀，多種技術(shù)平臺(tái)和多學(xué)科聯(lián)合會(huì)診，可以明確超聲結(jié)構(gòu)畸形的遺傳學(xué)原因，再發(fā)，預(yù)防和治療，提出各種方案，避免盲目終止妊娠，為孕婦遺傳咨詢(xún)盡可能提供最大幫助。

參考文獻(xiàn)

[1] ChinJObstethostet Gynecol August[J].《中華婦產(chǎn)科雜志》2014，49（08）.

[2] 盧 丹，陳欣林，楊小紅，朱 霞，宋婕萍.超聲診斷胎兒畸形與染色體檢測(cè)結(jié)果的對(duì)比研究[J].《中華超聲影像學(xué)雜志》，2011， 3：272-273.

[3] 鄔玲仟.染色體微陣列分析在產(chǎn)前診斷中的應(yīng)用[J].中華醫(yī)學(xué)會(huì)雜志社指南與進(jìn)展巡講，2014.

[4] 孟金來(lái)，賈頤芳，王謝桐.《現(xiàn)代婦產(chǎn)科進(jìn)展》[J].2015，24（5）：390-393.

[5] 胡 婷，張 竹，王嘉敏，劉洪倩，劉之英，王 和，劉珊玲.染色體微陣列分析在染色體核型分析無(wú)法明確診斷病例中的應(yīng)用價(jià)值[M].四川大學(xué)學(xué)報(bào)2017，48（3）：460-463.

本文編輯：吳宏艷