張 翼，張 碩，譚永紅，袁呂江，于波濤

蒼術(shù)為菊科植物茅蒼術(shù)或北蒼術(shù)的干燥根莖，有燥濕健脾、祛風散寒、明目之功[1]，其揮發(fā)油具有解痙、鎮(zhèn)痛、鎮(zhèn)靜、抗炎、抗病毒、抗缺氧等作用[2]。蒼術(shù)揮發(fā)油多采用水蒸氣蒸餾法提取，存在提取時間長、提取率低、得到的成分較少等缺點[3]。由于離子液體具有不易揮發(fā)、無色無嗅、不可燃等優(yōu)點[4]；水在亞臨界條件下具有與有機溶劑相似的性質(zhì)[5]，故本研究采用水蒸氣蒸餾法、直接蒸餾法、超聲輔助離子液體提取法和亞臨界水提取法提取蒼術(shù)中揮發(fā)油，并對其成分進行氣相-質(zhì)譜法（GC-MS）分析，為選擇蒼術(shù)揮發(fā)油的最佳提取方法提供有利依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑 KQ-300DE超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)；SS-325全自動高溫滅菌鍋（日本Tomy公司）；SF-TDL-5A臺式低速離心機（上海菲恰爾分析儀器有限公司）；QY-YJ-20A前沿超低有機型超純水機（重慶前沿水處理設(shè)備有限公司）；GCMS-QP2010 Ultra氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀（日本島津公司）等。

蒼術(shù)[安徽省毫州市貢藥飲品廠（生產(chǎn)許可證號：皖20100128），袁呂江教授鑒別，根狀莖入藥]；離子液體1-丁基-3-甲基咪唑六氟磷酸鹽[BMIM]PF6(天津希恩思生化科技有限公司)；蒼術(shù)成品揮發(fā)油(吉安市青原區(qū)東方天然香料油提煉廠)；石油醚為色譜純；其余試劑均為分析純。

1.2 實驗方法

1.2.1 材料制備 取蒼術(shù)500 g，經(jīng)蒸餾水清洗后常溫下晾干，粉碎過200目篩得蒼術(shù)粉末，備用。

1.2.2 水蒸氣蒸餾法[2]取蒼術(shù)粉末約50 g，精密稱定，置于500ml圓底燒瓶中，加入適量溫水浸濕，水蒸氣蒸餾4 h，餾出液置于500ml容量瓶中靜置，發(fā)現(xiàn)有固態(tài)油狀物沉于底層；加入氯化鈉粉末2 g助溶，水浴鍋調(diào)溫至50℃進行升溫，使其揮發(fā)油浮于液面之上，吸出上層揮發(fā)油，稱重并計算揮發(fā)油得率及外觀評價。

1.2.3 直接蒸餾法 取蒼術(shù)粉末約50 g，精密稱定，置于250 ml三口圓底燒瓶中（中間口用于揮發(fā)性物質(zhì)的收集，一口用磨口塞塞住，另一口配置普通滴液漏斗用于補充蒸餾水），加入適量溫水潤濕，蒸餾提取2 h，在三口燒瓶水面較低時補加蒸餾水。將餾出液置于250 ml容量瓶中靜置，有油狀物貼附于壁上，震蕩仍未漂浮，則用水浴鍋調(diào)溫至50℃進行升溫，使其浮于液面之上，吸出上層揮發(fā)油，稱重并計算揮發(fā)油得率及外觀評價。

1.2.4 超聲輔助離子液體提取法[6]取蒼術(shù)粉末約5 g，精密稱定，置于100 ml具塞錐形瓶中，加入25 g離子液體[BMIM]PF6，超聲（功率160W，頻率50 kHz）2 次，每次提取 10min。合并提取液，3000 r/min離心5 min。取上清液倒于100 ml容量瓶中，加入適量蒸餾水并震蕩，使得揮發(fā)油漂于水面之上，離子液體沉于水面之下。吸出上層揮發(fā)油，稱重并計算揮發(fā)油得率及外觀評價。

1.2.5 亞臨界水提取法[7]取蒼術(shù)粉末約50 g，精密稱定，置于500ml錐形瓶中，加入200ml蒸餾水，震蕩使所有蒼術(shù)粉末均被水濕潤，用四層紗布蓋在瓶口，細繩扎緊，置于全自動高壓滅菌鍋中，溫度為120℃，時間為15min，壓強為120 kPa，提取2次。提取后向所得樣品中加蒸餾水至近瓶口處，靜置，封口保存。將亞臨界水提取法所得的非固體部分吸出，3000 r/min離心5min，再將上清液轉(zhuǎn)移至50 ml容量瓶中，靜置，觀察結(jié)果，稱重并計算揮發(fā)油得率及外觀評價。

1.2.6 GC-MS測定[1]將上述除亞臨界水提取法之外所得的揮發(fā)油與蒼術(shù)對照成品揮發(fā)油用0.22μm濾頭過濾后，分別取100μl，各自加入100μl石油醚溶解，分別作為供試品溶液和對照品溶液進樣。

氣相色譜條件：Rtx-5牌毛細管色譜柱；載氣：高純度氮氣，流速：1ml/min；進樣口溫度250℃；自動分流進樣；色譜柱初始柱溫為50℃，以4℃/min升溫至200℃，維持15min，再以5℃/min升至250℃，維持5min。

質(zhì)譜條件：EI離子源，電離能量70 eV，離子源溫度230℃，接口溫度：280℃，掃描質(zhì)量范圍35～350 M/Z6。

其他條件：溶劑切除時間2 min，開始時間2.5 min，結(jié)束時間67.5min。

2 結(jié)果

2.1 蒼術(shù)揮發(fā)油提取率及外觀 水蒸氣蒸餾法提取的揮發(fā)油呈深棕黃色，粘稠不透明且具有一定香味，提取率為1.19%；直接蒸餾法提取的揮發(fā)油呈棕黃色，氣味芳香，浮于水相表面，提取率為1.05%；超聲輔助離子液體提取法提取的揮發(fā)油呈淺黃色，透明、流動性好且浮于液相表面，提取率為1.90%；亞臨界水提取法提取的揮發(fā)油含量極少，提取率幾乎為零。

2.2 GC-MS分析結(jié)果 按上述GC-MS分析條件，依據(jù)計算機質(zhì)譜數(shù)據(jù)庫檢索和查閱有關(guān)質(zhì)譜文獻，對4種揮發(fā)油成分進行了鑒定，應(yīng)用峰面積歸一化法確定其相對含量，結(jié)果見表1。

從4種揮發(fā)油中共分離出46個峰，均在16～42 min內(nèi)出峰，經(jīng)檢索鑒定確認了其中30種成分，所鑒定成分的峰面積占4種揮發(fā)油總流出峰面積的81%以上。其中從對照品揮發(fā)油中分離出18種化合物，鑒定出的峰的總面積占其全部峰面積的87.78%；從水蒸氣蒸餾法所得揮發(fā)油中分離出19種化合物，鑒定出的峰的總面積占其全部峰面積的82.00%；從直接蒸餾法所得揮發(fā)油中分離出18種化合物，鑒定出的峰的總面積占其全部峰面積的83.50%；由超聲輔助離子液體提取法所得揮發(fā)油中分離出18種化合物，鑒定出的峰的總面積占其全部峰面積的81.57%。

將4種揮發(fā)油出峰情況做對比（圖1），對照品揮發(fā)油在30min前出峰較少，且已出各峰相對含量較低；而各提取揮發(fā)油在30 min前出峰較多，且含量均高于對照品揮發(fā)油；對照品揮發(fā)油分離出各成分的相對含量較為平均，而各提取揮發(fā)油各成分含量差異較大。

3 討論

從本研究結(jié)果可知，超聲輔助離子液體提取法提取率最高，水蒸氣蒸餾法和直接蒸餾法次之，亞臨界水提取法不適于蒼術(shù)揮發(fā)油的提取。本研究鑒定出的30種化合物，多為萜烯類、酯類以及醇類，與文獻報道的采用水蒸氣蒸餾法提取的結(jié)果有明顯的差異[8-11]，同時未見蒼術(shù)酮及蒼術(shù)素等常見成分，可能與蒼術(shù)的產(chǎn)地、采收時間及提取方法不同等有著密切的關(guān)系。

表1 4種蒼術(shù)揮發(fā)油的化學(xué)成分及相對含量

圖1 4種蒼術(shù)揮發(fā)油質(zhì)譜圖對比

綜上所述，超聲輔助離子液體法比水蒸氣蒸餾法和直接蒸餾法更適于提取蒼術(shù)揮發(fā)油，亞臨界水提取法不適于提取蒼術(shù)揮發(fā)油。本研究提取的蒼術(shù)揮發(fā)油的主要化學(xué)成分與文獻相比有顯著差異，原因有待進一步探討。

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