左盛奇 劉呈雄 鄧張雙 程 凡 郭志勇 鄒 坤

(三峽大學 生物與制藥學院 天然產物研究與利用湖北省重點實驗室， 湖北 宜昌 443002)

蜘蛛抱蛋(AspidistraLuridaKer-Gawl)是百合科(Liliaceae)鈴蘭族(Convallariaceae)蜘蛛抱蛋屬(Aspidistra)多年生宿根草本植物，目前已知的有50余種[1]，曾以“蜘蛛抱蛋”之名收載于《中華本草》、《中國植物志》，別名蛇退、萬年青、一帆青、一葉蘭、粽粑葉、飛天蜈蚣、哈薩喇、竹葉伸筋、大九龍盤、竹葉盤、九龍盤、趕山鞭、蓼葉伸筋、大伸筋、搖邊竹、甘心蜈蚣、地蜈蚣、九節(jié)龍、一寸十八節(jié)、竹根七、土里蜈蚣、地雷公、入地蜈蚣、石上劍、山蜈蚣等，分布于越南北部，日本和我國云貴高原等地，且多數為我國主產，廣泛分布于長江以南地區(qū)．其根莖是一種傳統(tǒng)民間草藥，味苦，辛，性微溫，具有活血散瘀，消腫止痛，補虛止咳，滋陽補腎等功效，主治跌打損傷，風濕筋骨痛，非虛咳嗽，咳血和毒蛇咬傷等癥[2]．目前，國內云南、四川、廣西等產地的蜘蛛抱蛋均有其化學成分的研究報道，但產自湖北省的蜘蛛抱蛋藥材尚未有其化學成分和質量標準的研究的報道，基于2015年《湖北省中藥材及中藥飲片質量標準研究》項目，本課題組首次對湖北產蜘蛛抱蛋質量標準行了研究．

1 儀器與材料

低溫冷凍干燥機，美國Labconco公司；正相色譜硅膠，煙臺化學工業(yè)研究所；反相色譜硅膠，日本YMC公司；DYS-207顯微鏡，上海點應光學儀器有限公司；展開缸10 cm×20 cm；高效液相用甲醇、乙腈均為色譜純，水為怡寶純凈水，其它試劑均為分析純．

蜘蛛抱蛋植株于2016年7～10月份采自湖北省各地(湖南吉首批次為采集對照批次)，經三峽大學生物技術中心王玉兵副教授鑒定為(AspidistraluridaKer-Gawl)．植物標本現(xiàn)保存于三峽大學天然產物研究與利用湖北省重點實驗室．

表1 蜘蛛抱蛋藥材產地和采摘日期

2 植物形態(tài)

蜘蛛抱蛋，多年生常綠草本，高達90 cm．地下根莖橫生，粗硬，肉質，易折斷，外表棕色，有明顯節(jié)和鱗片，直徑5～10 mm，生有多數須根．葉單生；葉片革質，從地下根莖上長出，直立；橢圓狀披針形或寬披針形，寬7.5～11 cm，先端急尖，基部狹窄，形成溝狀綠色的窄長葉柄；葉片綠色有光澤，常有少數大小不等的淡黃色斑跡，有多條明顯的平行脈．

圖1 蜘蛛抱蛋植株形態(tài)

3 生境與分布

生長于海拔600～1 700 m的地區(qū)，土壤基質以疏松、潮濕的石灰?guī)r黃砂壤土為主,常生于蔭閉、濕度大、土壤肥沃的天然林邊緣、山坡林下以及溝旁．分布在亞洲東部的熱帶和亞熱帶地區(qū)，主要集中在中國和越南北部；在中國，主要分布在臺灣、湖北、四川、廣東、福建等地[3]．

4 性 狀

本品根莖橫切面：外皮層由1～2列多角細胞組成，棕黃色．皮層寬廣，靠近外皮層的皮層細胞中有淀粉粒和草酸鈣針晶束，長度約30～50 μm．并可見少量葉跡、根跡維管束；內皮層細胞一層，細胞扁平．維管束散生，靠近內皮層的維管束排成一圓環(huán)狀，為外韌維管束；內方維管束散生，為周木維管束(如圖2所示)．

本品粉末呈淺黃棕色．表皮細胞呈黃棕色或紅棕色，類多角形，直徑40～70 μm，排列緊密，細胞壁稍厚，內含黃棕色物質．薄壁細胞黃色或近無色，類方形，長方形或不規(guī)則形，直徑20～240 μm，內含淀粉粒；鱗片薄壁細胞黃棕色或紅棕色，不規(guī)則形，細胞壁極薄；管胞黃色、黃棕色或無色，多為梯紋，直徑8～56 μm；淀粉粒較多，常為單粒，多呈圓形、橢圓形，直徑2～11 μm，臍點不明顯．根狀莖粗硬，肉質，易折斷．直徑5～0 mm，外表棕色，有明顯節(jié)和鱗片(如圖3和圖4所示)．

1.木栓化細胞;2.表皮;3.木栓化細胞;4．外皮層;5．中皮層;6.周木維管束;7.內皮層;8.韌皮部;9.木質部;10.針晶;11.淀粉粒圖2 蜘蛛抱蛋根莖橫切面

圖3 蜘蛛抱蛋藥材和粉末

1.薄壁細胞；2.分泌細胞；3.淀粉粒；4.針晶；5.導管圖4 蜘蛛抱蛋根莖粉末

5 藥用情況

藥材性狀：根狀莖粗硬，肉質，易折斷．直徑5～10 mm，外表棕色，有明顯節(jié)和鱗片；藥用經驗：內服：煎湯，9～15 g，鮮品30～60 g．或作酒劑；外用：適量，搗敷[2]．

6 方法與結果

6.1 檢查

①水分：照2010年版《中華人民共和國藥典》(一部)ⅨH水分測定法中的烘干法測定，10批蜘蛛抱蛋藥材(陰干根莖)的測定結果均在12.12%～12.86%范圍內，平均為12.75%，以平均值的120%為上限，故暫定本品水分不得超過15%(見表1)．

②總灰分、酸不溶性灰分：照2010年版《中華人民共和國藥典》(一部)附錄ⅨK灰分測定法測定，10批藥材的測定結果均在5.98%～6.67%范圍內，平均結果為6.43%，以平均值的120%為上限，暫定本品的總灰分不得超過8%(結果見表1)．酸不溶性灰分測定結果均在0.49%～0.92%范圍內，平均為0.73%，以平均值的120%為上限，故暫定本品的酸不溶性灰分不得超過0.9%(結果見表1)．

表2 蜘蛛抱蛋藥材水分、總灰分、酸不溶性灰分、浸出物(%)

6.2 浸出物

照2010年版《中華人民共和國藥典》(一部)附錄ⅩA浸出物測定法，蜘蛛抱蛋陰干根莖粉末以95%乙醇為溶劑，熱回流提?。?0批藥材浸出物的測定結果均在4.48%～5.44%范圍內，平均結果為4.86%，以平均值的80%為下限，暫定本品浸出物不得少于4%(結果見表1)．

6.3 薄層色譜鑒別

照2010年版《中華人民共和國藥典》(一部)附錄ⅥB薄層色譜法測定(測定結果如圖5所示)．

1：蜘蛛抱蛋(20160701宜昌長陽)；2：蜘蛛抱蛋(20160702宜昌五峰)；3：蜘蛛抱蛋(20160703湖南吉首)；4：蜘蛛抱蛋(20160704宜昌長陽)；5：蜘蛛抱蛋(20160705宜昌五峰)；6：蜘蛛抱蛋(20160706恩施利川)；7：蜘蛛抱蛋(20160707湖北神農架)；8：蜘蛛抱蛋(20160708恩施利川)；9：蜘蛛抱蛋(20160709恩施利川)；10：蜘蛛抱蛋(20160710恩施巴東)圖5 薄層圖譜：試驗環(huán)境20℃(5%硫酸乙醇顯色

供試品溶液：取蜘蛛抱蛋陰干根莖粉末1.0 g，精密稱取，加20 mL甲醇，置25℃超聲(40 kHz)提取60 min，過濾，溶劑揮干，將浸膏溶于水中用水飽和正丁醇進行萃取，溶劑揮干，溶于甲醇，作為供試品．方法：照薄層色譜法(附錄ⅥB)試驗，吸取樣品溶液10 μL,分別點于同一GF254薄層板上，展開，晾干，噴以5%硫酸乙醇溶液，加熱顯色至斑點清晰．點樣：供試品點量樣10 μL；帶狀點樣，條帶間距為5 mm，原點距底邊10 mm．展開劑：水飽和正丁醇(新配)(試驗溫度為約20℃)．展開：展開缸預平衡15 min，上行展開，展距為8 cm．顯色：5%硫酸乙醇溶液．

6.4 化學成分研究

對于蜘蛛抱蛋藥材的研究國內外均有報道，如日本的JUNZO SHOJ[4]和國內的黎霜、王恒山、楊慶雄、彭杰、陳昌祥、陳夢菁等人[4-12]研究表明，其主要的化學成分為甾體皂苷．本課題蜘蛛抱蛋陰干根莖提取浸膏，分別用石油醚、乙酸乙酯、水飽和正丁醇萃取，其重量比為9:6:37，說明正丁醇部位為本品主要化學成分；且正丁醇部位水溶液濃縮發(fā)泡嚴重，這也是甾體皂苷的一個重要的特征．目前，本課題已從湖北產蜘蛛抱蛋根莖的正丁醇部位中分離得到單體化合物14個，全部為甾體皂苷，所以甾體皂苷為本品主要的化學成分．

薄層色譜分析：供試品溶液：取蜘蛛抱蛋陰干根莖粉末1.0 g，精密稱取，加20 mL甲醇，置25℃超聲(40 kHz)提取60 min，過濾，溶劑揮干，將浸膏溶于水中用水飽和正丁醇進行萃取，溶劑揮干，溶于甲醇，作為供試品．方法：照薄層色譜法(附錄ⅥB)試驗．如圖6所示，1為噴以5%硫酸乙醇顯色、2為A試劑顯色、3為E試劑，樣品對A試劑顯黃色或黃綠色，對E試劑顯紅色，表明本品主要化學成分為甾體皂苷類化合物,且多為呋甾烷醇類化合物[1，13]．

圖6 甾體皂苷波層色譜鑒別

7 結 論

本文首次對湖北產蜘蛛抱蛋藥材的水分、總灰分，酸不溶性灰分、浸出物、薄層色譜、植株的生境、植物形態(tài)、藥材性狀、化學成分等方面進行了初步研究，并對其藥材的水分、總灰分、酸不溶性灰分、浸出物四個方面的檢測限度給出了建議；通過文獻調研和實地考察對植株的生境、植物形態(tài)、藥用情況等進行了歸納總結；并通過薄層色譜對比分析、化學研究和文獻調研確定其主要化學成分為甾體皂苷．為湖北產蜘蛛抱蛋質量標準的制定提供了一定的依據．

[1] 崔江銘．卵葉蜘蛛抱蛋中甾體皂苷的研究[D]．長沙：中南大學，2013．

[2] 國家中醫(yī)藥管理局《中華本草》編委會．中華本草[M]．上海：上海科學技術出版社，1999，第二十二卷：7150-7151．

[3] 中國科學院中國植物志編輯委員會．中國植物志[M]．北京：科學出版社，1978:19．

[4] Hirai Y， Konishi T, Sanada S, et al．Studies on the Constituents of Aspidistra elatior BLUME. I. On the Steroids of the Underground Part[J]．Chem & PharmBull, 1982, 30(10):3476-3484．

[5] 黎 霜，王恒山，李光照，等．5種廣西產蜘蛛抱蛋中偏諾甾體四糖皂甙含量的比較[J]．華夏醫(yī)學，2003，16(2):166-168．

[6] 王恒山，譚明雄，龔崇松，等．廣西蜘蛛抱蛋中一種甾體皂甙定性定量研究[J]．廣西植物，2003，23(5):450-452．

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[12] 陳夢菁，向桂瓊，張國文．棕粑葉中甾體皂甙和皂甙元的分離鑒定[J]．J Integr Plant Biol， 1990， 4:297-301．

[13] 吳立軍，婁紅祥，周 晶．天然藥物化學[M]．6版．北京：人民衛(wèi)生出版社，2011：351．