陳弘釗 趙聿文 吳道艷

（1成都市石室天府中學，四川 成都 610041；2成都市石室聯(lián)合中學，610041；3四川大學，610065）

參照民間用藥的常用手段，測定10種常見的具有清熱消炎等功效的民間野生草藥的抑菌活性，并比較2種民間常用的傳統(tǒng)用藥方法對草藥抑菌活性的影響，為民間草藥的合理利用提供參考。

民間草藥是一類流傳民間，以經(jīng)驗指導(dǎo)應(yīng)用的天然藥物，具有清熱潤肺、消腫止痛、祛風除濕、消炎解毒、止血、殺蟲等功效，多用于治療感冒、咽喉腫痛、肺炎、腸炎、皮炎、腫毒、跌打損傷、蛇蟲咬傷等疾病，有一定的治療和緩解癥狀的效果。民間草藥經(jīng)過長期的臨床實踐檢驗，療效較為確定，具有多種活性成分[1]，而且種類繁多數(shù)量巨大，但其中很多沒有被醫(yī)藥書籍收載，其療效、有效成分、藥用機理、使用方法、毒副作用等方面都缺乏有力的理論支撐，會大大影響其開發(fā)應(yīng)用。

1 材料與方法

1.1 材料、儀器與試劑

1.1.1 材料。野生草藥：黃姑娘（毛酸漿Physalis pubescens L.）、龍膽草（Gentiana scabra Bunge.）、車前草（Plantago asiatica L.）、蒲公英（Taraxacum mongolicum·Hand.-Mazz.）、魚腥草（Houttuynia cordata·Thunb.）、九節(jié)風（草珊瑚Sarcandra glabra（Thunb.）Nakai）、薄荷草（Mentha haplocalyx）、石菖蒲（Acorus tatarinowii）、夏枯草（Prunella vulgaris·L.）和肺經(jīng)草（Sanicula lamelligera·Hance），均采自于四川省成都市新都區(qū)斑竹園鎮(zhèn)檀木村田間地頭。

菌種：金黃色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）、大腸桿菌（Escherichia coli）、蠟狀芽孢桿菌（Bacillus cereus）由四川省資源微生物學及微生物生物技術(shù)試驗室提供。

1.1.2 儀器設(shè)備。LD2X-50KBS高壓蒸汽滅菌鍋（上海申安醫(yī)療器械廠）、DHP-9272電熱恒溫培養(yǎng)箱（上海精密儀器有限公司）、HB50-ⅡA2生物安全柜（青島海爾特種電器有限公司）、UV-2600紫外分光光度計（日本島津）、AFZ-1002-U純水儀（艾科浦）、DDHZ-300臺式回旋恒溫振蕩器（蘇州市培英試驗設(shè)備有限公司）、ESJ200-4電子天平（沈陽龍騰電子有限公司）、0.22m微孔濾膜、移液槍等。

1.1.3 試劑。牛肉膏3g、蛋白胨10g、氯化鈉5g、瓊脂20g、水1000mL，無菌水。

1.2 方法與步驟

1.2.1 草藥提取液的制備。選取新鮮草藥，洗凈、晾干、切碎，稱量。

由于民間草藥通常采用水煎煮法和白酒泡制法進行應(yīng)用，故本試驗相應(yīng)地采用下列2種方法制備草藥提取液。

水提液：按照樣品和水1∶20的比例加入純凈水，浸泡30min，再加熱煎煮30min，4層滅菌紗布過濾，濾液再用微孔濾膜過濾除菌，備用。

乙醇浸提液：按照樣品和50%乙醇1∶8的比例混合，30℃浸泡9d，4層滅菌紗布過濾，濾液再用微孔濾膜過濾除菌，備用。

1.2.2 培養(yǎng)基的制備[2]。配制牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基1000mL，滅菌備用。

1.2.3 菌懸液的制備。用接種環(huán)分別挑取活化好的金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、蠟狀芽孢桿菌3種細菌，并分別放入裝有10mL無菌水的試管中，充分振蕩，制備成均勻的菌懸液，備用。

1.2.4 濾紙片法測定。草藥水提液和乙醇浸提液的抑菌活性。將制備好的細菌培養(yǎng)基加熱融化倒平板，冷卻后在平板中分別加入稀釋好的金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、蠟樣芽孢桿菌菌懸液各100μL，用滅菌過的涂布棒涂抹均勻。

草藥水提液抑菌試驗：取準備好的直徑為6mm的無菌圓形濾紙片，用滅過菌的鑷子取濾紙片均勻地貼在含菌的平板上，用移液槍吸取每種草藥水提液各35L打在濾紙片上，無菌水作為對照，并在各濾紙片對應(yīng)的位置上做標記。將各平皿倒置于恒溫培養(yǎng)箱中，37℃培養(yǎng)16h后取出，測定各草藥水提液抑菌圈的直徑。每種草藥水提液設(shè)置3個重復(fù)，3個重復(fù)求其平均值即得各草藥水提液的抑菌圈的平均直徑。

草藥乙醇浸提液抑菌試驗：方法同上，由水提液改為各草藥的50%乙醇浸提液，并以50%的乙醇為對照。

2 結(jié)果與分析

試驗結(jié)果顯示，各草藥的水提液均無抑菌活性或抑菌活性很弱。中草藥的藥用成分較為復(fù)雜，僅以抗菌消炎中草藥來講，其活性成分大致有：有機酸、生物堿、黃酮、揮發(fā)油、醌類等[1，3]。這些物質(zhì)大都難溶于水。有研究顯示，石菖蒲、薄荷、魚腥草及夏枯草的水提液有一定的抑菌作用，但相較于乙醇、乙酸乙酯等有機溶劑提取物的抑菌活性還是較差[4-10]。再加上本試驗制備草藥樣品時粉碎程度不夠，煎煮過程中的高溫也對活性成分也有一定的影響，所以以煎煮方式提取抗菌成分的方法效果不顯著。

各草藥50%乙醇浸提液的抑菌效果見表1，各草藥抑菌活性的比較見圖1。

表110 種草藥50%乙醇浸提液抑菌效果

圖1 10種草藥50%乙醇浸提液抑菌效果的比較

從上述圖表中可以看出，這10種民間草藥的50%乙醇浸提液表現(xiàn)出了一定的抑菌作用，其中魚腥草、薄荷草和夏枯草的50%乙醇浸提液對3種供試菌都表現(xiàn)出了抑制效果；龍膽草、石菖蒲和肺經(jīng)草的50%乙醇浸提液對金黃色葡萄球菌和蠟狀芽孢桿菌有抑制作用；而黃姑娘、車前草、蒲公英和九節(jié)風的50%乙醇浸提液則只對蠟狀芽孢桿菌表現(xiàn)出了抑菌效果。就國內(nèi)目前的研究顯示，這10種草藥的醇提物都有不同程度的抑菌作用[4-23]，如石菖蒲的無水乙醇提取物對番茄灰霉病菌的抑制效果最佳，水提物的抑菌效果最弱[4]；薄荷的無水乙醇浸提物對金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、枯草芽孢桿菌、沙門氏菌等均有較明顯的抑制作用，且效果優(yōu)于乙酸乙酯和水的提取物[6]；車前草用無水乙醇提取的物質(zhì)對金黃色葡萄球菌和大腸桿菌均有抑制作用[13]；黃酮類成分是毛酸漿（黃姑娘）抑制病原微生物的主要活性成分[21]，毛酸漿果80%乙醇提取物具有較好的抗炎活性[22，23]；九節(jié)風（草珊瑚）75%乙醇提取物[12]、魚腥草70%乙醇提取物[18，19]、夏枯草和車前草的80%乙醇提取物[24]對金黃色葡萄球菌和大腸桿菌均有很好的抑制作用。由以上研究結(jié)果可知，這些草藥的乙醇提取物有較強的抑菌作用，而且高濃度的乙醇提取物的效果大都較好。本試驗中考慮到四川民間通常使用50%左右的白酒浸泡草藥，所以相應(yīng)地設(shè)置乙醇提取的濃度為50%，試驗結(jié)果也顯示出了乙醇浸提物的抑菌效果，但活性相對較低，同時也說明民間常用的使用方法并未有效利用這些草藥中的抑菌成分。

3 討論

從試驗結(jié)果可知，試驗用10種民間草藥都有一定的抑菌作用，但不同草藥提取液的抑菌譜是不同的，說明這些植物的抑菌活性成分存在差異。本研究中采用的金黃色葡萄球菌、大腸桿菌和蠟狀芽孢桿菌在自然界中無處不在，感染時癥狀主要表現(xiàn)為嘔吐、發(fā)熱、腹瀉。傳統(tǒng)中醫(yī)認為在一定程度歸屬于熱癥，依據(jù)“熱者寒之”之治病理念，應(yīng)選取清熱解毒藥對癥治療[24]。本試驗中的10種草藥都以清熱消炎、解毒祛濕等功效為主，因此，選取這3種細菌作為供試菌種，是具有一定的代表性的。本試驗中草藥的水提液沒有顯示出抑菌活性，而50%乙醇浸提液對供試菌顯示出的抑制作用也不顯著，提示這些草藥是具有一定的抗菌藥用價值的，但傳統(tǒng)的民間用藥方法沒能較好地發(fā)揮出草藥的抗菌效果。

草藥的化學成分相當復(fù)雜，不能簡單地給清熱解毒藥和抗菌藥劃等號，只有通過分析鑒定才能知道哪一種成分真正具有“殺菌消炎”的作用。但要得到有效成分，并了解其功效、使用方法及其安全性均需要更深入的科學試驗。因此，民間草藥的下一步發(fā)展應(yīng)該是利用現(xiàn)代科學的方法，來確定草藥的各種化學成分及其功效，因此對其進行發(fā)掘研究，是擴大新的中藥和天然產(chǎn)物資源的一條捷徑。并可以按其功能應(yīng)用于醫(yī)藥、食品、天然日化產(chǎn)品等生產(chǎn)領(lǐng)域，走出一條民間草藥研發(fā)和推廣使用的新路。

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