余水生，劉菊蓮，王怡娟，李成惠，康華靖*

(1.浙江九龍山國(guó)家級(jí)自然保護(hù)區(qū)管理局, 浙江 遂昌 323300； 2.溫州科技職業(yè)學(xué)院, 浙江 溫州 325006)

石斛屬(Dendrobium)是蘭科的第2大屬。由于該屬植物具有重要的開發(fā)價(jià)值和經(jīng)濟(jì)價(jià)值(藥用、觀賞)，是重要的種質(zhì)資源。近些年，市場(chǎng)對(duì)石斛原料的需求逐年增加，常常供不應(yīng)求；再加上石斛野生資源本身稀缺，石斛已處于瀕危狀態(tài)。因此，石斛屬乃至蘭科近年來逐漸受到國(guó)家的重視和保護(hù)。1998年8月頒布的《中國(guó)植物紅皮書》將70種以上的石斛屬植物列入保護(hù)植物[1]。

梵凈山石斛(Dendrobiumfanjingshanense)為石斛屬附生植物，是2001年在貴州省梵凈山黑灣河海拔800—1 500 m處發(fā)現(xiàn)的新種[2]。自發(fā)現(xiàn)之時(shí)起，一直被認(rèn)為是貴州特有藥用植物之一[3]。2010年葉喜陽等[4]在浙江九龍山國(guó)家級(jí)自然保護(hù)區(qū)內(nèi)也發(fā)現(xiàn)了梵凈山石斛的分布。浙江九龍山國(guó)家級(jí)自然保護(hù)區(qū)是目前本省唯一一處記載梵凈山石斛分布的區(qū)域。由于種群數(shù)量稀少，目前尚未進(jìn)行大范圍的開發(fā)利用。梵凈山石斛性味甘淡微咸，主要用于治療口干、煩渴、熱病傷津、肺熱干咳、腰膝軟弱、陰傷目暗等病癥[5]。另外，其花黃褐色或橙黃色，也可作觀賞植物。為深入了解這一物種，本文通過測(cè)定野生梵凈山石斛和人工栽培的鐵皮石斛(Dendrobiumofficinale)的礦質(zhì)元素和有效成分，并進(jìn)行比較分析，得出結(jié)果，以期為開發(fā)和利用梵凈山石斛藥用資源提供理論依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 材料

分別在浙江九龍山國(guó)家級(jí)自然保護(hù)區(qū)泗州廟和金華磐安2地，采集梵凈山石斛、鐵皮石斛1號(hào)和鐵皮石斛2號(hào)3個(gè)不同品種的石斛藥材，每個(gè)品種采取3次重復(fù)隨機(jī)采樣，樣品列表見表1。將樣品去除葉片，留取莖段，置于85 ℃鼓風(fēng)干燥箱中烘20 min，然后降溫至60 ℃，烘至恒重，經(jīng)粉碎機(jī)碾成粗粉，過60目篩后備用。

表1 樣品列表

1.2 測(cè)定方法

1.2.1 礦質(zhì)元素含量測(cè)定 采用瓦里安AA-240型火焰原子吸收光譜儀測(cè)定各元素含量。首先分別精密量取銅、鐵、鋅、鎂、鉀、鈣、錳、硒標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液適量，用0.5%稀硝酸配制成相應(yīng)質(zhì)量濃度的工作溶液，以質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)(x)，吸收度為縱坐標(biāo)(y)，制作標(biāo)準(zhǔn)曲線方程(見表2)；然后稱取粗粉狀樣品0.5 g左右，處理和測(cè)量方法見文獻(xiàn)[6]，試驗(yàn)重復(fù)6次。

1.2.2 有效成分的含量測(cè)定 醇溶性浸出物測(cè)定參照馬小雙等[7]方法；用堿性氯仿超聲提取生物堿，比色法在波長(zhǎng)為620 nm測(cè)定其總生物堿含量[8]。粗多糖和石斛堿的含量測(cè)定參照葛穎華等[9]方法。每樣品平行處理6份，求平均值。使用的儀器分別為Cary 100紫外-可見分光光度計(jì)(Varian，美國(guó))；Waters Acqutity UPLC超高效液相色譜儀(美國(guó)Waters公司)等，石斛堿對(duì)照品(批號(hào)MUST-15060810)由成都曼斯特生物科技有限公司出品。

表2 各微量元素回歸方程和線性范圍

其中，生物堿標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備見表3。由表3可知，在1.12—5.60 μg/mL范圍內(nèi)，吸光度與生物堿質(zhì)量濃度呈良好的線性關(guān)系(R2=0.998 5)。粗多糖標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備見表4。結(jié)果表明，在22.6—113.0 μg/mL范圍內(nèi)，吸光度與質(zhì)量濃度之間呈良好的線性關(guān)系(R2=0.999 0)。

表3 生物堿標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備

表4 粗多糖標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備

1.3 數(shù)據(jù)分析

以上測(cè)試均在浙江中藥研究院實(shí)驗(yàn)室完成。梵凈山石斛、鐵皮石斛1號(hào)和鐵皮石斛2號(hào)均采集樣品3份，結(jié)果取其平均值。不同供試材料之間的比較采用SPSS 19.0進(jìn)行方差差異顯著性分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 部分礦質(zhì)元素含量測(cè)定結(jié)果

2.1.1 樣品含量測(cè)定結(jié)果 3種不同來源的石斛中，各礦質(zhì)元素含量的測(cè)定結(jié)果見表5，所測(cè)的8種礦質(zhì)元素在梵凈山石斛、鐵皮石斛1號(hào)和鐵皮石斛2號(hào)3種樣品中均有檢出，其中鉀元素含量最高，其次為鈣元素。不同來源的石斛中礦質(zhì)元素的含量存在一定差異，梵凈山石斛中銅、鈣、鎂、鉀和硒5種元素的含量均顯著高出對(duì)照2個(gè)石斛品種，僅鐵、錳2種元素含量略低于鐵皮石斛1號(hào)。在礦質(zhì)元素含量方面，梵凈山石斛優(yōu)于鐵皮石斛。由此可見，梵凈山石斛中含有更為豐富的礦質(zhì)元素。

表5 不同來源石斛中礦質(zhì)元素含量比較 mg/kg

表中數(shù)據(jù)為平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤；同列數(shù)據(jù)后不同小寫字母表示其間存在顯著性差異(P<0.05)

2.2 有效成分的含量

2.2.1 醇溶性浸出物含量 由表6可以看出，3種石斛的醇溶性浸出物含量差異明顯，其中以梵凈山石斛最高(P<0.05)，鐵皮石斛2號(hào)次之，鐵皮石斛1號(hào)最低。梵凈山石斛的醇溶性浸出物含量分別比鐵皮石斛1號(hào)和2號(hào)高出了101.60%和36.31%。醇溶性浸出物與石斛的藥理作用有著密切的關(guān)聯(lián)。2010年版《中國(guó)藥典》在“浸出物”項(xiàng)中規(guī)定干品鐵皮石斛醇溶性浸出物不得低于6.5%，梵凈山石斛的醇溶性浸出物含量為13.89%，遠(yuǎn)遠(yuǎn)超出了該規(guī)定含量，說明梵凈山石斛體內(nèi)醇溶性浸出物含量豐富。

表6 有效成分測(cè)定結(jié)果

表中數(shù)據(jù)為平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤；同列數(shù)據(jù)后不同小寫字母表示其間存在顯著性差異 (P<0.05)

2.2.2 生物堿的含量 生物堿是一類含氮有機(jī)化合物，也是最早從石斛屬植物中分離得到的化合物，含量較低，藥理作用較為廣泛[10]。對(duì)總生物堿含量的方差分析顯示，梵凈山石斛與鐵皮石斛1號(hào)之間無顯著差異(P>0.05)，而均顯著高于鐵皮石斛2號(hào)(P<0.05) (見表6)。

2.2.3 石斛堿的含量 石斛堿含量測(cè)定結(jié)果見表6。3種不同來源石斛的石斛堿含量以梵凈山石斛最高，其值為0.074 9 mg/g，鐵皮石斛1號(hào)次之，而在鐵皮石斛2號(hào)中未檢測(cè)到石斛堿。與鐵皮石斛1號(hào)相比，梵凈山石斛中的石斛堿含量則高出138.54%，其間差異達(dá)到顯著水平(P<0.05)。

2.2.4 粗多糖的含量 研究表明，石斛的水溶性多糖能夠有效地增強(qiáng)免疫反應(yīng)，有抗腫瘤、抗衰老、抗氧化、抗輻射、抗凝血的作用，且對(duì)機(jī)體毒副作用小[11-14]。粗多糖含量以鐵皮石斛1號(hào)和鐵皮石斛2號(hào)的粗多糖含量較高，分別為279.467 2，265.878 7 mg/g ，而梵凈山石斛中粗多糖的含量只有197.952 mg/g，顯著低于鐵皮石斛1號(hào)和鐵皮石斛2號(hào)(P<0.05) (見表6)。

3 討論

銅、鐵、鋅、鎂、鉀、鈣、錳等元素既是植物必需元素，也是人體必需元素[15]。研究結(jié)果表明，梵凈山石斛中銅、鈣、鎂、鉀和硒5種元素的含量均高出對(duì)照品種。這給梵凈山石斛的藥用提供了一定的試驗(yàn)依據(jù)。

醇溶性浸出物指用乙醇對(duì)藥材和飲片中可溶性物質(zhì)進(jìn)行測(cè)定。以藥材浸出物的含量作為其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的測(cè)定。一般用于該藥材的活性成分或指標(biāo)性成分不清或含量很低或尚無精確的定量方法時(shí)采用[16]。該方法在鐵皮石斛品質(zhì)的比較中較為常用。本試驗(yàn)結(jié)果表明，梵凈山石斛醇溶性浸出物的含量最高，為13.89%，顯著高于鐵皮石斛的含量(P<0.05)。董偉等[17]認(rèn)為，鐵皮石斛的藥用價(jià)值并非體現(xiàn)在醇溶性成分含量，而是多糖含量。多糖類成分是藥用石斛發(fā)揮免疫活性作用的重要物質(zhì)基礎(chǔ)，鐵皮石斛多糖能顯著提高外周白細(xì)胞數(shù)，促進(jìn)淋巴細(xì)胞產(chǎn)生移動(dòng)抑制因子，可有效提高機(jī)體免疫力[18]。然而，本試驗(yàn)結(jié)果表明，梵凈山石斛中粗多糖的含量顯著低于鐵皮石斛1號(hào)和鐵皮石斛2號(hào)(P<0.05)。

生物堿是石斛藥材中最重要的活性成分之一。葛穎華等[9]研究認(rèn)為，鐵皮石斛中生物堿類成分藥理活性強(qiáng)，含量穩(wěn)定，也應(yīng)作為評(píng)價(jià)鐵皮石斛質(zhì)量的重要指標(biāo)。諸燕等[19]研究了17個(gè)種質(zhì)41個(gè)樣品的鐵皮石斛總生物堿含量為0.019%—0.043%。本試驗(yàn)樣品的生物堿含量稍低，如鐵皮石斛1號(hào)為0.015%。而也有學(xué)者認(rèn)為，鐵皮石斛的總生物堿含量較低，一般在0.008 3%—0.024 1%之間[20]。分析認(rèn)為，這也許與試驗(yàn)條件設(shè)置有關(guān)。從本試驗(yàn)的樣品來看，梵凈山石斛的生物堿含量與鐵皮石斛1號(hào)相比，并無顯著差異。石斛堿為金釵石斛中首次分離獲得的一種生物堿，是石斛中重要的活性成分[21]。石斛堿的藥理作用主要表現(xiàn)在抗腫瘤，對(duì)心血管、胃腸道抑制作用及止痛退熱等方面[22-23]。本試驗(yàn)結(jié)果顯示，梵凈山石斛的石斛堿含量最高，且顯著高于鐵皮石斛的含量(P<0.05)。

總之，梵凈山石斛中銅、鈣、鎂、鉀和硒5種元素的含量均高出對(duì)照石斛品種。在有效成分方面，除了粗多糖含量較低(P<0.05)外，梵凈山石斛的醇溶性浸出物含量和石斛堿含量均最高(P<0.05)。綜合認(rèn)為梵凈山石斛同樣具有較高的開發(fā)利用價(jià)值。

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