陳峭，謝勝，周曉玲，稅典奎，覃婧，侯秋科，顏春艷，劉珊，劉禮劍，覃鳳傳，劉瑩，梁夢月

本文創(chuàng)新點：

（1）本研究初步闡明了“以俞調(diào)樞”法可能通過調(diào)節(jié)血液中腦腸肽來達(dá)到促進(jìn)胃動力的目的，為進(jìn)一步拓寬該技術(shù)的臨床應(yīng)用提供了科學(xué)理論依據(jù)。（2）“以俞調(diào)樞”法是通過何種途徑調(diào)節(jié)腦腸肽的變化，仍有待進(jìn)一步深入研究。

“以俞調(diào)樞”法是指以足太陽膀胱經(jīng)背俞指針療法調(diào)理臟腑氣機(jī)升降之樞紐的中醫(yī)外治療法［1］，該療法能夠明顯改善患者胃腸道動力，對胃食管反流?。?］、功能性消化不良［3］、腸易激綜合征［4］、慢傳輸型便秘［5］等胃腸動力障礙相關(guān)性疾病均具有良好的臨床療效。“以俞調(diào)樞”法是如何影響胃腸道動力學(xué)的改變呢。本研究擬通過觀察“以俞調(diào)樞”法干預(yù)Cajal間質(zhì)細(xì)胞（ICC）缺失模型大鼠后其胃腸動力學(xué)主要指標(biāo)的變化情況，探索該療法改善胃腸動力學(xué)可能的作用機(jī)制，現(xiàn)報道如下。

1 材料與方法

1.1 實驗動物 2016年1—12月，選取清潔級SD大鼠120只，體質(zhì)量（200±20）g，雌雄各半。SD大鼠由廣西醫(yī)科大學(xué)動物實驗中心提供（動物許可證號SCXK桂2014-0002），普通飼料適應(yīng)性喂養(yǎng)2周。

1.2 試劑儀器與主要試劑 抗干細(xì)胞因子受體單克隆抗體（Anti-Mouse CD117 Purified）、烏拉坦，胃動素、胃泌素、血管活性腸肽、生長抑素放射免疫藥盒、抑肽酶、乙二胺四乙酸二鈉等（由南京東極生物科技有限公司提供）。

1.3 營養(yǎng)性半固體糊的制備 取羧甲基纖維素鈉10 g溶于蒸餾水250 ml中，加入奶粉16 g、糖8 g、淀粉8 g和活性炭末2 g，攪拌均勻，配制成約300 g的黑色半固體糊狀物300 ml，冰箱4 ℃冷藏，用時恢復(fù)至室溫。

1.4 實驗方法

1.4.1 動物分組及干預(yù)方法 將SD大鼠隨機(jī)分為造模組60只和空白組60只。造模組再隨機(jī)分為模型對照亞組30只和模型治療亞組30只，空白組再隨機(jī)分為空白對照亞組30只和空白治療亞組30只。

空白對照亞組，每日固定22 min，不實施背俞指針治療，連續(xù)14 d；空白治療亞組，每日固定22 min，并實施背俞指針治療，連續(xù)14 d；模型對照亞組，每日固定22 min，不實施背俞指針治療，連續(xù)14 d；模型治療亞組，每日固定22 min，并實施背俞指針治療，連續(xù)14 d。

1.4.2 造模及給藥

1.4.2.1 ICC缺失模型大鼠的制備 造模組參照J(rèn)ANSSEN等［6］方法制備ICC缺失模型，經(jīng)腹腔隔天注射抗c-Kit單克隆抗體（ACK2）100 μg，共5次。期間觀察大鼠的精神活動、飲食情況、糞便性質(zhì)和體質(zhì)量改變等。同時，根據(jù)《實驗針灸學(xué)實驗指導(dǎo)》［7］的要求，采用8%硫化鈉溶液對大鼠背部督脈和腹部任脈循行路線進(jìn)行脫毛處理（寬度2.5～3.5 cm）。

1.4.2.2 取穴和指針方法 選取雙側(cè)足太陽膀胱經(jīng)肺俞、心俞、膈俞、肝俞、脾俞及腎俞（穴位的定位根據(jù)中國針灸學(xué)會實驗針灸研究會指定的動物針灸穴位圖譜［8］）進(jìn)行治療：以拇指指腹在每個穴位按照先點按1 min，后按揉2 min的手法操作，3 min/穴，共18 min，實際操作時間約22 min（包含操作過程中大鼠逃避而未能實施操作時間約4 min）。相同穴位按由左至右順序，不同穴位按由下而上順序。推拿手法參數(shù)測定儀進(jìn)行監(jiān)測，推拿手法參數(shù)：刺激量以大鼠無掙扎為度，根據(jù)以往經(jīng)驗，按揉垂直力度3.5～4.5 N，點壓垂直力度5～7 N。操作頻率為120～160次/min，1次/d，療程為2周。

1.5 觀察指標(biāo)及測定標(biāo)準(zhǔn)

1.5.1 胃內(nèi)殘留率及小腸推進(jìn)率的測定 取材前給予大鼠黑色半固體糊狀物10 ml/kg灌胃處理，30 min后用20%烏拉坦10 ml/kg腹腔麻醉。開腹，結(jié)扎胃賁門和幽門，取胃，用濾紙吸干后稱全重，然后沿胃大彎剪開胃體，洗去胃內(nèi)容物后擦干，稱凈重。胃全重與胃凈重之差即為胃內(nèi)殘留物質(zhì)量，以胃內(nèi)殘留物與所灌黑色半固體糊狀物質(zhì)量的百分比為胃內(nèi)殘留率。同時迅速取出小腸，輕輕剝離后直鋪于白紙上，測量幽門至回盲腸部全長及幽門至黑色半固體糊狀物前沿的距離。以幽門至黑色半固體糊狀物前沿的距離與幽門至回盲部全長的百分比為小腸推進(jìn)率。

1.5.2 胃動素、胃泌素、血管活性腸肽和生長抑素的測定將治療前后各組大鼠血漿、血清標(biāo)本在測定前混勻，4 ℃1 500 r/min離心15 min，離心半徑12 cm，取上清液采用放射免疫分析法按說明書在每個測定管中依次加入不同稀釋濃度的對照品、待測樣品及抗體，4 ℃溫育24～48 h，加入125I標(biāo)記的相應(yīng)抗原，繼續(xù)4 ℃溫育24～48 h后，每管加免疫沉淀劑0.5～0.6 ml，充分混勻，室溫放置20 min后，4 ℃ 3 500 r/min離心20 min，離心半徑12 cm，吸棄上清液，測定各沉淀管的放射性計數(shù)，并分別按胃動素、胃泌素、血管活性腸肽、生長抑素酶聯(lián)免疫試劑盒的計算方法求出相應(yīng)待測血漿、血清樣本的樣本值。

1.6 統(tǒng)計學(xué)方法 應(yīng)用SPSS 19.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。計量資料以（x ±s）表示，多組間比較采用單因素方差分析，組間兩兩比較采用SNK-q檢驗。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組大鼠胃內(nèi)殘留率和小腸推進(jìn)率比較 4組大鼠胃內(nèi)殘留率和小腸推進(jìn)率比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。模型對照亞組大鼠胃內(nèi)殘留率高于空白對照亞組，小腸推進(jìn)率低于空白對照亞組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；模型治療亞組大鼠胃內(nèi)殘留率、小腸推進(jìn)率與空白對照亞組、空白治療亞組比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）；模型治療亞組大鼠胃內(nèi)殘留率低于模型對照亞組，小腸推進(jìn)率高于模型對照亞組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05，見表1）。

2.2 各組大鼠胃動素、胃泌素比較 4組大鼠胃動素、胃泌素比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。模型對照亞組大鼠胃動素、胃泌素低于空白對照亞組、模型治療亞組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；空白對照亞組、空白治療亞組大鼠胃動素、胃泌素與模型治療亞組比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05，見表2）。

2.3 各組大鼠血管活性腸肽、生長抑素比較 4各組大鼠血管活性腸肽、生長抑素比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。模型對照亞組大鼠血管活性腸肽、生長抑素高于空白對照亞組、模型治療亞組大鼠，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；空白對照亞組、空白治療亞組大鼠血管活性腸肽、生長抑素與模型治療亞組比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05，見表3）。

3 討論

胃腸動力障礙主要是指各種病因引起胃腸道平滑肌細(xì)胞運(yùn)動功能發(fā)生障礙的病理過程，常見于胃食管反流病、功能性消化不良、腸易激綜合征、慢傳輸型便秘等胃腸動力性疾病，也可見于其他系統(tǒng)疾病如糖尿病胃輕癱、急性重癥胰腺炎及術(shù)后炎性腸麻痹等［6］。研究發(fā)現(xiàn)，隨著生活節(jié)奏的加快、人們精神壓力的加大，胃腸動力障礙相關(guān)性疾病的發(fā)病率劇增，且造成相當(dāng)高的醫(yī)療費(fèi)用，已成為現(xiàn)代社會中一個主要的醫(yī)療保健問題［9］。臨床中有60%～80%的消化道疾病患者最終被確診為胃腸動力障礙相關(guān)性疾?。?0］。而當(dāng)前在發(fā)達(dá)國家每年平均用于研發(fā)促胃腸動力藥物的耗資高達(dá)數(shù)十億美元，已有甲氧氯普胺、多潘立酮、西沙比利、莫沙比利、格拉司瓊、替加色羅及伊托必利等藥物相繼應(yīng)用于臨床［11-12］。但臨床使用表明，這些促胃腸動力西藥的療效尚欠理想，并且還存在中樞神經(jīng)系統(tǒng)、血液循環(huán)系統(tǒng)及其他不良反應(yīng)［12］。而我國目前還沒有開發(fā)出理想且具有自主知識產(chǎn)權(quán)的胃腸動力藥物。因此，探索一種行之有效的改善胃腸動力的治療方案具有重大的社會意義和經(jīng)濟(jì)學(xué)價值。

表1 各組大鼠胃內(nèi)殘留率和小腸推進(jìn)率比較（x±s，%）Table 1 Comparison of the incidence of gastric residue and small intestinal motility rate between the 4 subgroups of rats

表2 各組大鼠胃動素、胃泌素比較（x±s，pg/ml）Table 2 Comparison of the mean motilin level and gastrin between the 4 subgroups of rats

表3 各組大鼠血管活性腸肽、生長抑素比較（x±s，pg/ml）Table 3 Comparison of the mean plasma vasoactive peptide level and stmatostatin between the 4 subgroups of rats

“以俞調(diào)樞”法治療胃腸動力障礙有巨大的療效優(yōu)勢，目前該療法已在全國150余家醫(yī)療機(jī)構(gòu)推廣應(yīng)用，于2009年被推薦為國家級適宜技術(shù)推廣項目，先后獲得2009年度柳州市科技進(jìn)步獎一等獎，2010年度廣西醫(yī)藥衛(wèi)生適宜技術(shù)推廣獎二等獎，2010年度廣西科技進(jìn)步三等獎。

背俞穴為臟腑之氣轉(zhuǎn)輸于背腰部并流注于全身的樞紐區(qū)域［13］，與五臟六腑有著直接的聯(lián)系，故以指針刺激背俞穴能直接調(diào)整臟腑功能的盛衰［14］。而胃腸動力障礙相關(guān)性疾病多以胃脘痛、胃痞、反酸、便秘等為主要表現(xiàn)，氣機(jī)升降功能失調(diào)為其主要病機(jī)。肺為氣之主，腎為氣之根，脾胃為氣機(jī)升降的樞紐，肝主疏泄、條暢氣機(jī)，五臟六腑同氣機(jī)的正常運(yùn)行均密切相關(guān)。經(jīng)絡(luò)是氣機(jī)升降出入的通路，五臟六腑之氣通過十二經(jīng)脈相互溝通，共同維系人體氣機(jī)正常的運(yùn)行［15］。而督脈為陽脈之海，任脈為陰脈之海，唯有任督二脈在走行上與十二經(jīng)脈相互交通，共同參與了十二經(jīng)脈的全身氣血循行。督升任降，任督二脈的經(jīng)氣運(yùn)行調(diào)和，環(huán)周有序，升降有常，這正是脾胃等臟腑氣機(jī)正常運(yùn)行的基礎(chǔ)［15］。因此，任督二脈經(jīng)氣升降交通不利可能是導(dǎo)致臟腑氣機(jī)升降失衡的根本原因，并最終導(dǎo)致胃腸道平滑肌運(yùn)動功能的障礙，而“以俞調(diào)樞”法能夠通過改善任督二脈經(jīng)氣的運(yùn)行，進(jìn)而起到改善胃腸動力的作用。

現(xiàn)代神經(jīng)胃腸病學(xué)研究也表明，胃腸運(yùn)動受大腦支配和腸神經(jīng)系統(tǒng)共同支配調(diào)控［16］。在生理情況下，胃腸激素（主要是指腦腸肽）可通過中樞神經(jīng)系統(tǒng)及胃腸平滑肌細(xì)胞系統(tǒng)共同調(diào)節(jié)胃腸的運(yùn)動。根據(jù)不同腦腸肽成分對胃腸道平滑肌細(xì)胞的收縮或舒張效應(yīng)的不同，可將其分為興奮性腦腸肽和抑制性腦腸肽［17-19］。其中，起興奮作用的主要腦腸肽為胃動素、胃泌素，起抑制作用的主要腦腸肽為生長抑素、血管活性腸肽［20］。本研究表明，ICC缺失模型大鼠可以復(fù)制胃腸動力低下的大鼠模型，影響大鼠的胃腸動力，表現(xiàn)為胃內(nèi)殘留率增加和小腸推進(jìn)率下降，與相關(guān)研究結(jié)果一致［21-22］。而“以俞調(diào)樞”法能夠使ICC缺失模型大鼠胃內(nèi)殘留率顯著降低，小腸推進(jìn)率顯著升高，進(jìn)一步研究表明，ICC缺失模型大鼠胃動素、胃泌素顯著下降，血管活性腸肽和生長抑素顯著升高，而采用“以俞調(diào)樞”法干預(yù)后，其胃動素、胃泌素顯著升高，血管活性腸肽和生長抑素顯著降低。因此，可以推論：“以俞調(diào)樞”法能夠提供增加胃腸動力低下大鼠血液中的胃動素、胃泌素，同時又可以降低其血液中生長抑素、血管活性腸肽，從而達(dá)到改善胃腸動力的作用。

綜上所述，“以俞調(diào)樞”法具有顯著改善胃動力的作用，其機(jī)制可能是通過調(diào)節(jié)血液中腦腸肽來達(dá)到促胃腸動力的目的，為進(jìn)一步拓寬該技術(shù)的臨床應(yīng)用提供了科學(xué)的理論依據(jù)。至于“以俞調(diào)樞”法是通過何種途徑調(diào)節(jié)腦腸肽的變化，仍有待進(jìn)一步深入研究。

作者貢獻(xiàn)：陳峭進(jìn)行了文章的構(gòu)思與設(shè)計，撰寫論文；謝勝、稅典奎進(jìn)行科研技術(shù)指導(dǎo)和文章的可行性分析；覃婧、侯秋科、顏春艷、劉珊、劉禮劍進(jìn)行資料收集與數(shù)據(jù)整理及統(tǒng)計學(xué)分析；覃鳳傳、劉瑩、梁夢月進(jìn)行動物實驗操作與指標(biāo)的檢測；周曉玲進(jìn)行了論文的修訂與英文的修訂及文章的質(zhì)量控制及審校。

本文無利益沖突。

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