孫麗慧，王云曉，呂詩文，李 曼，賀雷雨，包永明

（1.大連理工大學(xué)食品與環(huán)境學(xué)院，遼寧 盤錦 124221；2.大連理工大學(xué)生命與醫(yī)藥學(xué)院，遼寧 盤錦 124221）

乳酸又名2-羥基丙酸，是一種重要的多用途有機(jī)酸，被廣泛應(yīng)用于食品、化妝品、醫(yī)藥及化工等行業(yè)[1-2]。乳酸按其構(gòu)型和旋光性可分為D-型、L-型和DL-型3 種類型，由于人體只具有L-乳酸脫氫酶，因此只能代謝L-型的乳酸，若過量攝入D-型或DL-型的乳酸則會(huì)引起人體代謝功能紊亂、造成酸中毒等不良反應(yīng)[3]。世界衛(wèi)生組織明確規(guī)定，D-型或DL-型的乳酸不得加入到嬰幼兒食品中，而成人每天攝入的D-型乳酸也不能超過100 mg/kg體質(zhì)量[4]。目前工業(yè)生產(chǎn)的乳酸約70%作為酸浸劑、調(diào)味劑、防腐劑等功能用于食品行業(yè)中，因而，高光學(xué)純L-乳酸的生產(chǎn)受到了越來越多的關(guān)注[5-6]。

微生物發(fā)酵法是L-乳酸的主要生產(chǎn)方法，所涉及的微生物主要包括一些絲狀真菌、乳酸細(xì)菌和部分芽孢桿菌等，該方法具有產(chǎn)物光學(xué)純度相對較高、生產(chǎn)工藝簡單、副產(chǎn)物少、能耗小等優(yōu)勢[7-11]。盡管國內(nèi)外眾多學(xué)者多年來已經(jīng)在發(fā)酵法生產(chǎn)L-乳酸取得了很多的研究成果，但目前研究中仍存在一些不足之處，或是乳酸的產(chǎn)酸量不高，糖酸轉(zhuǎn)化率低[12-15]；或是產(chǎn)物乳酸中含有較多的D-型乳酸，目標(biāo)產(chǎn)物L(fēng)-乳酸的光學(xué)純度較低，造成下游L-乳酸的分離提純較為困難[16]；或是產(chǎn)生菌對營養(yǎng)物質(zhì)要求較高，往往需要價(jià)格較貴的酵母粉或酵母膏作為氮源才能獲得較高的乳酸產(chǎn)量，增加了發(fā)酵的成本[17-20]，這些問題都不利于L-乳酸的工業(yè)化生產(chǎn)。因此，本研究旨在篩選獲得1 株高產(chǎn)乳酸且L-乳酸光學(xué)純度較高的菌株并對其進(jìn)行生理生化和分子生物學(xué)鑒定，進(jìn)而對培養(yǎng)基進(jìn)行初步優(yōu)化，尋求廉價(jià)氮源部分替代酵母粉或酵母膏，以期降低生產(chǎn)成本，并在5 L發(fā)酵罐中進(jìn)行批式流加發(fā)酵以驗(yàn)證其發(fā)酵產(chǎn)L-乳酸的潛能，為乳酸發(fā)酵的工業(yè)化生產(chǎn)提供1 株可供選擇的優(yōu)良菌株及其發(fā)酵培養(yǎng)基的配方組成。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

1.1.1 樣品

市售酸奶、辣白菜、榨菜、奶酪、泡菜汁、新鮮水果、海水及從遼寧不同地方采集的下層土壤等樣品共120余份。

1.1.2 試劑

L/D-乳酸檢測試劑盒 愛爾蘭Megazyme公司；CBC棒狀桿菌鑒定卡 法國梅里埃公司；革蘭氏染色液試劑盒 青島海博生物技術(shù)有限公司；TaKaRa 16S rDNA Gene Bacterial Identification PCR Kit、TaKaRa Lysis Buffer for Microorganism to Direct PCR 寶生物工程（大連）有限公司；牛肉膏、蛋白胨、酵母粉、瓊脂北京奧博星生物技術(shù)有限責(zé)任公司；其他試劑均為國產(chǎn)分析純。

1.1.3 培養(yǎng)基

分離液體培養(yǎng)基：采用MRS培養(yǎng)基并添加溴甲酚紫0.1 g/L作為指示劑[21]。

分離平板培養(yǎng)基：為改良的MRS培養(yǎng)基，即CaCO3-溴甲酚紫MRS平板培養(yǎng)基，在MRS培養(yǎng)基中加入CaCO320 g/L、溴甲酚紫0.1 g/L作為指示劑，瓊脂15 g/L[21]。

搖瓶種子培養(yǎng)基：葡萄糖20 g/L，其他同文獻(xiàn)[21]。

基礎(chǔ)發(fā)酵培養(yǎng)基：葡萄糖40 g、酵母粉10 g、CH3COONa 4 g、KH2PO41 g、MgSO40.1 g、MnSO40.4 g、吐溫80 1 mL、CaCO320 g，充分溶解后用蒸餾水定容至1 L。

1.2 儀器與設(shè)備

VITEK 2 COMPACT全自動(dòng)微生物鑒定儀、麥?zhǔn)媳葷醿x法國梅里埃公司；SW-CJ-2FD潔凈工作臺(tái) 蘇州安泰空氣技術(shù)有限公司；UV-5800紫外-可見分光光度計(jì)上海元析儀器有限公司；SBA-40C生物傳感分析儀山東省科學(xué)院生物研究所；HPX-9272MBE電熱恒溫培養(yǎng)箱、HPX-9272MBE電熱恒溫培養(yǎng)箱 上海博訊實(shí)業(yè)有限公司；ZWY-1102C恒溫培養(yǎng)振蕩器 上海智城分析儀器制造有限公司；N-300M熒光顯微鏡 寧波永新光學(xué)股份有限公司；BIOTECH-5BG發(fā)酵罐 上海保興生物設(shè)備工程有限公司。

1.3 方法

1.3.1 菌株的篩選

取適量樣品加入至30 mL無菌水中，充分振蕩后靜止片刻，取上層清液1 mL加放入到分離液體培養(yǎng)基中，37 ℃培養(yǎng)24 h。選取發(fā)酵液顏色變黃的樣品，經(jīng)稀釋后涂布于分離平板培養(yǎng)基，待長出菌落，挑取能夠水解CaCO3且變色圈較大的單菌落，接種到基礎(chǔ)發(fā)酵培養(yǎng)基中，37 ℃、180 r/min培養(yǎng)24 h，選取產(chǎn)物濃度高的菌落，進(jìn)一步劃線純化直至純種，將其編號(hào)并保藏。

1.3.2 菌株的鑒定

1.3.2.1 形態(tài)學(xué)觀察

肉眼直接觀察菌落的外部形態(tài)，革蘭氏染色后于顯微鏡下觀察菌體形態(tài)。

1.3.2.2 生理生化鑒定

挑取純化的菌株加至3 mL生理鹽水中，振蕩混勻后利用麥?zhǔn)媳葷醿x測定菌懸液濁度達(dá)到2.7～3.3麥?zhǔn)蠞舛?，按照CBC棒狀桿菌鑒定卡的操作說明書進(jìn)行VITEK 2 COMPACT全自動(dòng)微生物分析系統(tǒng)分析。

1.3.2.3 菌株16S rDNA序列擴(kuò)增與分析

挑取培養(yǎng)基上的菌體于50 μL TaKaRa Lysis Buあer for Microorganism to Direct PCR（Code No.9164）中變性后離心取上清液作為模板，反應(yīng)條件：80 ℃，15 min；然后使用TaKaRa 16S rDNA Bacterial Identification PCR Kit（Code No.RR176）進(jìn)行PCR擴(kuò)增目的片段；經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳后，切膠回收目的片段；由大連寶生物工程有限公司進(jìn)行測序，通過NCBI數(shù)據(jù)庫在線BLAST系統(tǒng)進(jìn)行序列比對，以確定種屬。

1.3.3 發(fā)酵培養(yǎng)基的初步優(yōu)化

1.3.3.1 培養(yǎng)基中初始碳源質(zhì)量濃度的優(yōu)化

在基礎(chǔ)培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上，分別以40～140 g/L的葡萄糖為碳源，按2%的接種量轉(zhuǎn)接到100 mL培養(yǎng)基中，于37 ℃、180 r/min恒溫振蕩培養(yǎng)，定期取樣監(jiān)測，考察初始糖質(zhì)量濃度對發(fā)酵產(chǎn)L-乳酸的影響。

1.3.3.2 培養(yǎng)基中氮源的優(yōu)化

在基礎(chǔ)培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上，以40 g/L的葡萄糖為碳源，分別以20 g/L的酵母粉、牛肉膏、蛋白胨、棉籽餅粉、黃豆餅粉、玉米漿、硝酸銨、硫酸銨作為氮源，考察不同種類的氮源對發(fā)酵的影響，發(fā)酵時(shí)間為24 h，其他培養(yǎng)條件同1.3.3.1節(jié)。在此基礎(chǔ)上，為進(jìn)一步降低氮源成本，利用發(fā)酵效果相對較好的廉價(jià)氮源按照一定配比進(jìn)行部分替代，考察不同配比的復(fù)合氮源對發(fā)酵產(chǎn)L-乳酸的影響。

1.3.3.3 培養(yǎng)基中無機(jī)鹽的優(yōu)化

在上述優(yōu)化的基礎(chǔ)上，以40 g/L的葡萄糖為碳源，10 g/L的酵母粉+15 g/L棉籽餅粉為氮源，分別考察不同質(zhì)量濃度的CH3COONa、KH2PO4、MgSO4及MnSO4對發(fā)酵的影響，發(fā)酵時(shí)間為24 h，其他培養(yǎng)條件同1.3.3.1節(jié)。

1.3.4 5 L發(fā)酵罐中的批式流加發(fā)酵實(shí)驗(yàn)

根據(jù)上述搖瓶中的優(yōu)化結(jié)果，進(jìn)而在5 L發(fā)酵罐中進(jìn)行了批式流加發(fā)酵，考察菌株的生長及L-乳酸的成情況。發(fā)酵條件如下：裝液量2 L，接種量10%，發(fā)酵溫度37℃，轉(zhuǎn)速180 r/min，4 mol/L NaOH溶液維持pH 6.0，發(fā)酵通氣量0.2 m3/min，發(fā)酵初始葡萄糖質(zhì)量濃度80 g/L，中間補(bǔ)加葡萄糖使其質(zhì)量濃度維持在30～80 g/L之間，發(fā)酵72 h。

1.3.5 分析方法

L-乳酸純度的測定：利用L-/D-乳酸檢測試劑盒測定乳酸的光學(xué)純度，光學(xué)純度的計(jì)算方法參照文獻(xiàn)[22]；L-乳酸質(zhì)量濃度的測定：用SBA-40C生物傳感分析儀測定[23]；還原糖含量的測定：采用3,5-二硝基水楊酸（3,5-dinitrosalicvlic acid，DNS）比色法[24]；菌體濃度的測定：利用分光光度計(jì)測定OD600nm表示菌體的濃度。

2 結(jié)果與分析

2.1 高產(chǎn)L-乳酸菌株的篩選

利用分離液體培養(yǎng)基培養(yǎng)來源不同的120余份樣品，其中16 份樣品的發(fā)酵液變成黃色，經(jīng)稀釋后涂布于CaCO3-溴甲酚紫MRS分離平板培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)，其中有5 株產(chǎn)酸圈較大，將其轉(zhuǎn)接到基礎(chǔ)發(fā)酵培養(yǎng)基中，37 ℃、180 r/min培養(yǎng)24 h，檢測發(fā)酵液中L-乳酸的產(chǎn)量，結(jié)果如表1所示。

從表1可知，從辣白菜樣品中篩選獲得的菌株LB-103在分離液體培養(yǎng)基中顯色速度最快，并且在分離平板培養(yǎng)基中的產(chǎn)酸圈直徑達(dá)10.5 mm，這些現(xiàn)象均說明該菌株具有較強(qiáng)的產(chǎn)酸能力，進(jìn)一步通過液體發(fā)酵培養(yǎng)基培養(yǎng)，經(jīng)檢測證實(shí)，菌株LB-103的L-乳酸產(chǎn)量最高，達(dá)到15.40 g/L。更重要的是，采用L/D-乳酸檢測試劑盒檢測乳酸的光學(xué)純度，結(jié)果表明，菌株LB-103只產(chǎn)生L-乳酸，無D-乳酸生成。因此，將該菌株進(jìn)行進(jìn)一步純化直至純種，保藏待用。

表1 不同菌株產(chǎn)L-乳酸的能力Table 1 L-Lactic acid produced by different strains isolated from different sources

2.2 菌株的鑒定

2.2.1 形態(tài)學(xué)觀察

將菌株LB-103在固體MRS培養(yǎng)基上培養(yǎng)48 h后，菌株在平板上的單菌落呈圓形，隆起，表面光滑，濕潤，不透明，邊緣整齊，顏色為乳白色（圖1a）。細(xì)菌革蘭氏染色呈陽性，短桿狀（圖1b）。

圖1 LB-103菌株菌落形態(tài)（a）和革蘭氏染色照片（b）Fig. 1 Colony morphology (a) and gram staining (b) of strain LB-103

2.2.2 菌株生理生化鑒定

表2 LB-03菌株的主要生理學(xué)特征Table 2 Physiological characteristics of strain LB-03

經(jīng)過純化的菌株LB-103利用VITEK 2 COMPACT全自動(dòng)微生物分析系統(tǒng)進(jìn)行生理生化鑒定，鑒定的結(jié)果為鼠李糖乳酸桿菌（Lactobacillus rhamnosus），可信度達(dá)95%，結(jié)果評價(jià)為Excellent identification（極好的鑒定）。具體生化反應(yīng)結(jié)果見表2。

2.2.3 菌株16S rDNA序列擴(kuò)增

以菌株LB-103基因組DNA為模板經(jīng)過PCR擴(kuò)增后進(jìn)行1%瓊脂糖凝膠電泳，目的片段大約為1 500 bp（圖2），將PCR產(chǎn)物回收純化后測序，確定該片段實(shí)際長度為1 337 bp。該序列已提交至GenBank，登記號(hào)為No.KY750318。將該序列在NCBI中BLAST比對發(fā)現(xiàn)，菌株LB-103與L. rhamnosus的同源性極高，序列相似性達(dá)到100%。結(jié)合上述生理生化鑒定結(jié)果，可確定該菌株為鼠李糖乳酸桿菌，并將其命名為鼠李糖乳酸桿菌DLF-15038（L. rhamnosus DLF-15038）。

圖2 菌株LB-103的16S rDNA凝膠電泳圖Fig. 2 Gel electrophoresis pattern of PCR amplified product of 16S rDNA from strain LB-103

2.3 發(fā)酵培養(yǎng)基的初步優(yōu)化

2.3.1 碳源質(zhì)量濃度對L. rhamnosus DLF-15038發(fā)酵產(chǎn)L-乳酸的影響

圖3 葡萄糖質(zhì)量濃度對發(fā)酵產(chǎn)L-乳酸影響Fig. 3 Effects of glucose concentration on the production of L-lactic acid

如圖3所示，隨著糖質(zhì)量濃度的增加，發(fā)酵液中L-乳酸產(chǎn)量逐漸增加。然而在初始糖質(zhì)量濃度為80 g/L時(shí)L-乳酸的生成速率最高，這可能是由于在高質(zhì)量濃度糖基質(zhì)中，發(fā)酵液滲透壓增加，從而對菌體生長及其代謝會(huì)造成一定的抑制作用。因此為獲得較高的L-乳酸產(chǎn)量，避免高糖質(zhì)量濃度對微生物造成的抑制作用，可以考慮選擇發(fā)酵初始糖質(zhì)量濃度為80 g/L，采用流加補(bǔ)料的方式進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)。

2.3.2 氮源對L. rhamnosus DLF-15038發(fā)酵產(chǎn)L-乳酸的影響

不同微生物對氮源的利用能力也不同，實(shí)驗(yàn)選擇了文獻(xiàn)中發(fā)酵L-乳酸產(chǎn)量較高的幾種有機(jī)氮源如酵母粉、牛肉膏、蛋白胨[4,21-22,25-26]，同時(shí)又選擇了幾種廉價(jià)的有機(jī)氮源如棉籽餅粉、黃豆餅粉、玉米漿和無機(jī)氮源硝酸銨、硫酸銨，考察氮源種類對發(fā)酵產(chǎn)L-乳酸的影響，結(jié)果如圖4所示。

圖4 不同氮源種類對L-乳酸產(chǎn)量的影響Fig. 4 Effects of different nitrogen sources on the production of L-lactic acid

由圖4可以看出，在相同發(fā)酵條件下，有機(jī)氮源的發(fā)酵效果明顯好于無機(jī)氮源，這可能是由于有機(jī)氮源中除了含有蛋白質(zhì)、肽及游離的氨基酸以外，往往還含有少量的維生素和生長因子，可以滿足微生物生長和代謝的需要[17-18,25]。本實(shí)驗(yàn)中以酵母粉作為氮源時(shí)L-乳酸產(chǎn)量最高，蛋白胨次之，該實(shí)驗(yàn)結(jié)果與Kwon[26]、Nancib[27]、于雷[17]等的報(bào)道一致，且目前文獻(xiàn)中報(bào)道的高產(chǎn)L-乳酸所用的氮源也多為酵母粉[25]。然而酵母粉和蛋白胨都是價(jià)格昂貴的氮源，對于生產(chǎn)用途廣且用量大的L-乳酸產(chǎn)品來說，在獲得高產(chǎn)量和高轉(zhuǎn)化率的同時(shí)，也必須使用相對廉價(jià)的培養(yǎng)基成分，產(chǎn)品才更具有市場競爭力。本實(shí)驗(yàn)中以廉價(jià)的棉籽餅粉作為氮源，L-乳酸產(chǎn)量雖然較酵母粉或蛋白胨低，但明顯好于黃豆餅粉和玉米漿，并且菌體生長情況與酵母粉作為氮源的發(fā)酵結(jié)果相當(dāng)。因此，為減少酵母粉用量，降低發(fā)酵培養(yǎng)基成本，進(jìn)一步考察利用棉籽餅粉部分替代酵母粉發(fā)酵產(chǎn)L-乳酸的情況，結(jié)果如表3所示。

表3 復(fù)合氮源對L-乳酸產(chǎn)量的影響Table 3 Effects of complex nitrogen sources on the production of L-lactic acid

從表3可以看出，10 g/L酵母粉分別添加15 g/L或20 g/L棉籽餅粉與15 g/L酵母粉分別添加15 g/L或20 g/L棉籽餅粉作為氮源，L-乳酸產(chǎn)量與單獨(dú)使用20 g/L酵母粉相當(dāng)。可見，利用棉籽餅粉部分替代酵母粉是可行的。當(dāng)以10 g/L酵母粉+15 g/L棉籽餅粉作為復(fù)合氮源時(shí)，在此基礎(chǔ)上無論是增加酵母粉或是棉籽餅粉的用量，L-乳酸產(chǎn)量均無明顯變化。因此，考慮培養(yǎng)基的成本，選擇以10 g/L酵母粉+15 g/L棉籽餅粉作為復(fù)合氮源最為合適。

2.3.3 無機(jī)鹽對L. rhamnosus DLF-15038發(fā)酵產(chǎn)L-乳酸的影響

微生物的生長及其代謝產(chǎn)物合成過程中需要無機(jī)鹽和一些微量元素，很多無機(jī)鹽中的金屬離子是作為某些酶的激活劑，這些物質(zhì)往往在低質(zhì)量濃度時(shí)會(huì)促進(jìn)微生物生長和代謝產(chǎn)物合成，但在高質(zhì)量濃度時(shí)卻會(huì)表現(xiàn)出明顯的抑制現(xiàn)象。本實(shí)驗(yàn)考察了不同質(zhì)量濃度的CH3COONa、KH2PO4、MgSO4及MnSO4對發(fā)酵的影響，結(jié)果如表4所示。最佳無機(jī)鹽質(zhì)量濃度分別為CH3COONa 3 g/L、KH2PO42 g/L、MnSO40.3 g/L和MgSO40.2 g/L。

表4 不同質(zhì)量濃度的無機(jī)鹽對L-乳酸產(chǎn)量的影響Table 4 Effects of different concentrations of inorganic salts on the production of L-lactic acid

2.4 5 L發(fā)酵罐中的批式流加發(fā)酵實(shí)驗(yàn)

通過上述培養(yǎng)基優(yōu)化，確定發(fā)酵培養(yǎng)基為初始葡萄糖質(zhì)量濃度80 g/L、棉籽餅粉15 g/L、酵母粉10 g/L、CH3COONa 3 g/L、KH2PO42 g/L、MnSO40.3 g/L、MgSO40.2 g/L、吐溫80 1 mL/L。在該條件下，在5 L發(fā)酵罐中進(jìn)行了批式流加發(fā)酵，考察菌株的生長及L-乳酸的成情況，結(jié)果如圖5所示。發(fā)酵72 h，L-乳酸產(chǎn)量可達(dá)165.15 g/L，生產(chǎn)強(qiáng)度為2.29 g/（L·h），葡萄糖總消耗量為176.94 g/L，糖酸轉(zhuǎn)化率為93.34%。

圖5 分批補(bǔ)料發(fā)酵過程曲線Fig. 5 Time course curve of fed-batch fermentation

3 討論與結(jié)論

本實(shí)驗(yàn)從辣白菜樣品中篩選出1 株高產(chǎn)乳酸的菌株LB-103，通過生理生化鑒定和16S rDNA序列分析，確定該菌株為鼠李糖乳酸桿菌（L. rhamnosus），將其命名為鼠李糖乳酸桿菌DLF-15038。經(jīng)L-/D-乳酸試劑盒檢測該菌株發(fā)酵產(chǎn)L-乳酸的光學(xué)純度為100%。純L-乳酸應(yīng)用于食品行業(yè)中可以保證食品安全性，此外純L-乳酸還可以生產(chǎn)高質(zhì)量的聚乳酸。但目前國內(nèi)外關(guān)于利用細(xì)菌發(fā)酵產(chǎn)乳酸的報(bào)道中，產(chǎn)物大多都混有D-型的乳酸[12,16]，產(chǎn)純L-乳酸的報(bào)道較少。周穎等[22]對Lactococcus lactis KLDS 4.0325發(fā)酵產(chǎn)光學(xué)純度為100% L-乳酸的培養(yǎng)基優(yōu)化；高江婧等[28]從土壤樣品中篩選到1 株凝結(jié)芽孢桿菌，發(fā)酵產(chǎn)L-乳酸的光學(xué)純度達(dá)99%以上；Laopaiboon等[29]利用L. lactis IO-1發(fā)酵甘蔗渣生產(chǎn)光學(xué)純度為100% L-乳酸；Ramchandran等[30]利用L. lactis ssp. cremoris ASCC 930119生產(chǎn)光學(xué)純度為100% L-乳酸。本實(shí)驗(yàn)篩選獲得的L. rhamnosus DLF-15038不僅發(fā)酵產(chǎn)L-乳酸的光學(xué)純高，而且還具有非常好的產(chǎn)乳酸能力，在5 L發(fā)酵罐中進(jìn)行批式流加發(fā)酵實(shí)驗(yàn)，發(fā)酵72 h，L-乳酸產(chǎn)量為165.15 g/L，生產(chǎn)強(qiáng)度為2.29 g/（L·h），糖酸轉(zhuǎn)化率為93.34%。

對L. rhamnosus DLF-15038發(fā)酵產(chǎn)L-乳酸的培養(yǎng)基進(jìn)行了優(yōu)化，結(jié)果表明，廉價(jià)的棉籽餅粉可以部分替代酵母粉，采用15 g/L棉籽餅粉和10 g/L的酵母粉為復(fù)合氮源，L-乳酸的產(chǎn)量得以維持并顯著降低成本。Kwon等[24]曾在L-乳酸發(fā)酵培養(yǎng)基中用19.3 g/L大豆粉替代15 g/L的酵母粉，同樣可以獲得理想的發(fā)酵結(jié)果，但是需要在培養(yǎng)基中額外添加7 種維生素，Nancib等[27]也發(fā)現(xiàn)采用廉價(jià)氮源部分替代酵母粉，并補(bǔ)充B族維生素，可以獲得較好的發(fā)酵水平，這些研究在獲得廉價(jià)原料部分替代酵母粉的同時(shí)，都需要額外補(bǔ)充維生素，因此對于降低成本的幅度有限。而本實(shí)驗(yàn)中使用廉價(jià)的棉籽餅粉部分替代酵母粉，無需維生素的額外添加，對于降低發(fā)酵培養(yǎng)基的成本效果更為顯著。此外，本研究對培養(yǎng)基中幾種無機(jī)鹽濃度進(jìn)行了考察，確定了最適無機(jī)鹽質(zhì)量濃度分別為CH3COONa 3 g/L、KH2PO42 g/L、MnSO40.3 g/L、MgSO40.2 g/L。本研究為L-乳酸發(fā)酵的工業(yè)化生產(chǎn)提供了1 株可供選擇的優(yōu)良菌株及其發(fā)酵培養(yǎng)基的配方組成，若對該菌株的發(fā)酵培養(yǎng)基的組成及發(fā)酵條件進(jìn)一步優(yōu)化，產(chǎn)物L(fēng)-乳酸的產(chǎn)量還會(huì)有提升的空間。

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