劉琳 溫臻 張瑞 岳豐 劉靜 楊欽博 張學(xué)紅

1蘭州大學(xué)第一醫(yī)院生殖醫(yī)學(xué)?？漆t(yī)院（蘭州730000）；2甘肅省生殖醫(yī)學(xué)與胚胎重點實驗室（蘭州730000）；3蘭州大學(xué)（蘭州730000）

microRNAs（miRNAs）是一類長度大約為13～22個核苷酸的非編碼RNA（ncRNA），通過抑制靶mRNA翻譯或者與轉(zhuǎn)錄體3’?非翻譯區(qū)（UTRs）序列之間互補配對從而誘導(dǎo)其降解，使其達(dá)到抑制轉(zhuǎn)錄后表達(dá)的目的[1]。迄今為止[2?4]，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了超過 2 500 種人類 miRNAs，其中每種miRNAs都能影響數(shù)百個基因轉(zhuǎn)錄體并參與機(jī)體中極為重要的生物學(xué)過程，包括細(xì)胞的發(fā)育、分化、凋亡和增殖。近年來的研究結(jié)果證明，miRNA的異常表達(dá)與腫瘤、神經(jīng)疾病、心臟疾病、糖尿病等人類重大疾病都存在著密切的聯(lián)系。miRNA對基因表達(dá)的調(diào)控高效而經(jīng)濟(jì)，1個miRNA分子表達(dá)的改變就可能影響數(shù)百個靶蛋白的表達(dá)，甚至改變整個分子網(wǎng)絡(luò)的狀態(tài)[5]。因此，特異性針對miRNA設(shè)計合成的新一類基因治療藥物使得基于miRNA的疾病治療方案變得更加現(xiàn)實。近幾年，使用miR?122靶向的LNA治療HCV感染患者[6]、使用miR?200模擬物靶向治療糖尿病[5]等以miRNA設(shè)計合成的新一類基因治療藥物已進(jìn)入臨床試驗階段。其中，miR?342?3p被指出在乳腺癌、子癇前期、卵巢早衰等多種女性相關(guān)疾病中發(fā)揮著重要功能。本文將miR?342?3p在多種女性相關(guān)疾病中的研究進(jìn)展給予總結(jié)和綜述，進(jìn)而推測其作為靶點進(jìn)行小分子藥物設(shè)計的可行性。

1 miR?342?3p

miR?342?3p屬于miR?342家族中的一員，是定位于14號染色體14q32上的一段非編碼序列，位于宿主基因EVL的第3個內(nèi)含子中。為明確miR?342?3p的作用，近年來已經(jīng)在多種動物模型、人類癌癥和細(xì)胞培養(yǎng)系統(tǒng)中進(jìn)行過研究[7]。近年來研究表明，miR?342?3p的異常表達(dá)對肺癌[8]，前列腺癌[9]，骨肉瘤[10]等多種腫瘤細(xì)胞的增殖、凋亡、侵襲和轉(zhuǎn)移等生物學(xué)特征產(chǎn)生重大影響。此外，miR?342?3p已被證明是一個抑癌miRNA。例如ZHANG等[10]研究發(fā)現(xiàn)，若恢復(fù)miR?342?3p在骨肉瘤細(xì)胞中的表達(dá)對細(xì)胞增殖有明顯的抑制作用。

2 miR?342?3p對女性惡性腫瘤的影響

2.1 對乳腺癌的影響SAVAD等[11]收集了18例乳腺纖維腺瘤樣本和59例原發(fā)浸潤性導(dǎo)管癌樣本以及鄰近的解剖腫瘤（NNDT）樣本，經(jīng)免疫組化（IHC）將其分為3組（ER+，HER2+，ER?/PR?/HER2?），然后用RT?PCR檢測miR?21，miR?205和miR?342的表達(dá)水平。其中，在ER?/PR?/HER2?組（三陰性組）發(fā)現(xiàn)miR?342的表達(dá)顯著下調(diào)。此外，LOWERY等[12]收集了29個早期乳腺癌組織及鄰近正常組織，對453個miRNA進(jìn)行表達(dá)譜分析，然后進(jìn)行免疫組化分組，RT?PCR驗證。結(jié)果與SAVAD等[11]得出了相同的結(jié)論，即miR?342在三陰性組的表達(dá)顯著下調(diào)。因此，筆者推測miR?342的表達(dá)可能被用作預(yù)后較差的乳腺癌的標(biāo)志物，并且在未來很有可能為乳腺癌的治療和預(yù)后判斷提供依據(jù)。

HE等[13]收集浸潤性乳腺癌的女性患者48例及其鄰近正常組織24例，測定ERα濃度，將標(biāo)本分為ERα表達(dá)陽性與ERα表達(dá)陰性兩組，而后通過RT?PCR與細(xì)胞培養(yǎng)和轉(zhuǎn)染等多種實驗手段相結(jié)合，最終發(fā)現(xiàn)在人類乳腺癌組織中，miR?342?3p與ERα mRNA的表達(dá)水平呈正相關(guān)。此外，CRIPPA等[14]收集了52例乳腺癌患者的組織，其中無乳腺癌家族史患者12例，有乳腺癌家族史患者40例。通過免疫組化、qRT?PCR等實驗也證實了miR?342?3p在ER陽性細(xì)胞中的表達(dá)水平明顯高于ER陰性細(xì)胞，miR?342?3p的表達(dá)與ER狀態(tài)之間在一定范圍內(nèi)存在著很強的正相關(guān)關(guān)系，這一結(jié)果與HE等[13]的研究結(jié)果一致。ENDO等[15]在64個樣本的冷凍乳腺癌組織中用定量RT?PCR檢測鑒定了6個miR?NA（let?7a，miR?15a，miR?26a，miR?34a，miR?193b和miR?342?3p）。之后，ENDO等[15]挑選了在ERhighKi67low和ERlowKi67high乳腺癌組織中表達(dá)有差異的11個miRNAs。其中，miR?342?3p在ERhighKi67low腫瘤組織中表達(dá)水平較高。這一結(jié)果也提示miR?342?3p可能作為評價ER高表達(dá)乳腺癌患者預(yù)后的生物標(biāo)志物，但仍需實驗的進(jìn)一步證實。

約有70%～80%的乳腺癌為激素受體陽性乳腺癌，內(nèi)分泌療法是其最常用的治療手段之一。通過使用降低雌激素水平或拮抗雌激素受體的內(nèi)分泌治療手段可以達(dá)到抑制腫瘤細(xì)胞生長的目的。他莫昔芬是一種具有競爭性抑制雌激素作用的非甾體類雌激素受體拮抗劑，對于處于進(jìn)展期或無法手術(shù)治療患者，能有效阻止腫瘤細(xì)胞的過度增殖，從而達(dá)到治療腫瘤的目的[16]。此外，MILLER 等[17]選擇他莫昔芬敏感的MCF?7細(xì)胞系與他莫昔芬耐藥的MCF?7細(xì)胞系，通過qRT?PCR發(fā)現(xiàn)miR?342在他莫昔芬耐藥的細(xì)胞系中表達(dá)下調(diào)。這提示，miR?342可以作為預(yù)測對他莫昔芬敏感性的分子標(biāo)志。CITTELLY等[18]將人類乳腺癌細(xì)胞系分為他莫昔芬敏感的MCF?7細(xì)胞以及他莫昔芬耐藥MCF?7/HER2Δ16細(xì)胞，通過Northern blot、qRT?PCR等技術(shù)，發(fā)現(xiàn)miR?342?3p的表達(dá)水平在他莫昔芬耐藥MCF?7/HER2Δ16細(xì)胞較低。在 HE等[13]的實驗中發(fā)現(xiàn)，miR?342?3p異常表達(dá)可以使ERα mRNA的表達(dá)水平上調(diào)，并使MCF?7細(xì)胞對他莫昔芬的敏感性增高。這提示miR?342?3p有望成為參與乳腺癌內(nèi)分泌輔助治療的潛在靶點。然而，極低miR?342的表達(dá)水平可以使ERα mRNA的表達(dá)水平下調(diào)，并使MCF?7細(xì)胞對他莫昔芬的敏感性減弱，此為耐藥的乳腺癌的治療提供了新的方向。

由此可見，miR?342在未來很有可能作為生物標(biāo)志物，為乳腺癌的臨床診斷、預(yù)后等提供參考。

2.2 對卵巢癌的影響H?USLER等[19]采集了24例卵巢癌患者與15例年齡匹配的健康人的血液樣本，提取miR?NA后進(jìn)行miRNA表達(dá)譜分析。研究發(fā)現(xiàn)，miR?342?3p在卵巢癌患者中的表達(dá)水平呈顯著下調(diào)。

紫杉醇（Paclitaxel）是一種紫杉中提取出來的天然抗癌藥物。構(gòu)成細(xì)胞骨架的微管是其作用靶點，通過抑制G2期和M期紡錘體和紡錘體絲的形成，從而達(dá)到阻止腫瘤細(xì)胞的增殖和分裂的作用，臨床上主要用于卵巢癌、乳腺癌肺癌等，但耐藥的產(chǎn)生極大地制約了其臨床療效和應(yīng)用范圍[20]。SULTAN等[21]檢測了耐多西紫杉醇和紫杉醇卵巢癌細(xì)胞中miRNA的表達(dá)之后發(fā)現(xiàn)，miR?342?3p在耐多西紫杉醇細(xì)胞中的表達(dá)水平上調(diào)。這提示，在卵巢癌患者中，通過檢測miR?342?3p可能發(fā)現(xiàn)紫杉醇耐藥者，從而為制定化療藥物方案提供一定的指導(dǎo)。但是目前關(guān)于miR?342?3p對卵巢癌影響的報道較少，兩者之間的具體聯(lián)系仍需進(jìn)一步研究證明。

2.3 對宮頸癌的影響ZENG等[22]選取了正常組織標(biāo)本13例、宮頸癌組織標(biāo)本40例和CIN組織標(biāo)本50例，后者包括了高級別鱗狀上皮內(nèi)病變（HSIL）35例和低級別鱗狀上皮內(nèi)病變（LSIL）15例。使用real time RT?PCR實驗技術(shù)檢測miR?342?3p的表達(dá)水平。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，與正常組織相比，miR?342?3p在HSIL 組織中的表達(dá)有所下降。LI等[23]同樣選取了宮頸癌組織標(biāo)本及正常組織標(biāo)本各27例來檢測miR?342?3p及其家族基因（EVL）的表達(dá)水平。結(jié)果發(fā)現(xiàn)與正常組織標(biāo)本相比，miR?342?3p及其家族基因（EVL）的表達(dá)在宮頸癌組織標(biāo)本中顯著下調(diào)。LI等[23]通過qRT?PCR進(jìn)一步分析了27例宮頸癌組織標(biāo)本及115例宮頸上皮內(nèi)瘤變（CIN）組織標(biāo)本（包括CIN I：35例；CIN II：35例；CIN III：45例）。結(jié)果證實miR?342?3p及EVL在癌變組織和CIN組織中的表達(dá)水平均顯著下調(diào)。這與ZENG等[22]的研究結(jié)果基本一致。除此之外，實驗還發(fā)現(xiàn)miR?342?3p及EVL的表達(dá)與miR?342?3p靶基因FOXM1的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)，過度表達(dá)的FOXM1促進(jìn)了宮頸癌的增殖、遷移和侵襲。這一發(fā)現(xiàn)可能為CIN和宮頸癌的分級提供一定指導(dǎo)。為宮頸癌的臨床診斷與治療提供廣闊的思路。

3 miR?342?3p對婦科疾病的影響

3.1 miR?342?3p與子宮內(nèi)膜異位癥COSAR等[24]選擇有子宮內(nèi)膜異位癥和無子宮內(nèi)膜異位癥的婦女各24名，收集其血清樣本。通過miRNA微陣列分析、qRT?PCR等技術(shù)手段，發(fā)現(xiàn)miR?342?3p的表達(dá)在子宮內(nèi)膜異位癥患者的血清中呈上調(diào)趨勢。這種表達(dá)差異可能是介導(dǎo)這種疾病的系統(tǒng)效應(yīng)的機(jī)制之一，甚至有可能將miR?342?3p作為子宮內(nèi)膜異位癥的生物標(biāo)志物。而關(guān)于miR?342?3p與子宮內(nèi)膜異位癥的相關(guān)研究仍相對匱乏，具體的結(jié)論還有待進(jìn)一步實驗驗證。

3.2 miR?342?3p與卵巢功能早衰YANG等[25]選擇卵巢功能早衰（POF）的患者與具有正常生理周期的婦女作為研究對象，借助qRT?PCR等技術(shù)手段在其血漿中發(fā)現(xiàn)了具有差異表達(dá)的miRNA，其中，miR?342?3p的表達(dá)水平在POF的患者的血漿呈現(xiàn)上調(diào)趨勢。YANG等[25]還提出POF患者血漿中差異表達(dá)的miRNA可能通過影響不同的信號傳導(dǎo)途徑而對顆粒細(xì)胞的增殖和凋亡產(chǎn)生調(diào)節(jié)效應(yīng)。ZHOU等[26]應(yīng)用基因芯片技術(shù)檢測正常人血漿和POF患者中的miRNA表達(dá)差異之后，從芯片中篩選出來的明顯差異表達(dá)的miRNA使用qRT?PCR技術(shù)驗證。結(jié)果顯示miR?342?3p在POF患者的血漿中的表達(dá)顯著上升，這與YANG等[25]的結(jié)果一致。這提示，miR?342?3p在POF患者的血漿中的表達(dá)顯著性，但仍需在組織、細(xì)胞中進(jìn)行大量的實驗驗證。

4 miR?342?3p與子癇

僅有部分研究報道了子癇前期孕婦與正常孕婦外周血中miRNA水平的數(shù)據(jù)。CHOI等[27]將20例正常妊娠婦女的胎盤組織作為對照組，重度子癇前期患者的胎盤組織作為實驗組。通過臨床病理分析，miRNA微陣列，qRT?PCR等實驗技術(shù)，發(fā)現(xiàn)miR?342?3p的表達(dá)水平在重度子癇前期患者的胎盤組織上調(diào)。WU等[28]采集重度子癇前期孕婦與正常妊娠孕婦的血漿，通過miRNA微陣列分析，其中，miR?342?3p的表達(dá)水平在重度子癇前期（sPE）孕婦血漿中顯著增高。這與CHOI等[27]的研究結(jié)果一致。這提示，循環(huán)血液中的miR?342?3p可能在先兆子癇的發(fā)病過程中起著重要作用。除此之外，WU等[28]還提出，miRNA有望成為診斷重癥子癇前期的生物學(xué)標(biāo)志，但仍需要進(jìn)一步的研究和探索。

總的來說，miR?342?3p在多種疾病的發(fā)生發(fā)展中具有重要作用，在癌癥中起著重要的抑癌基因的作用。根據(jù)前期研究成果，miR?342?3p已經(jīng)成為諸多疾病的生物標(biāo)志物，使這些疾病的早期診斷成為可能，有效的降低了漏診率和誤診率。同時，miR?342?3p成為治療特定疾病的潛在靶點對治療方案的制定、治療效果評估和后續(xù)治療方案的修正提供了新的思路。然而對miR?342?3p的研究還有局限，如miR?342?3p在疾病中異常表達(dá)的分子機(jī)制尚不十分明確等問題。對miR?342?3p的研究還有多種疾病尚未涉足，隨著序列分析技術(shù)的不斷進(jìn)步，miR?342?3p的研究領(lǐng)域?qū)⑸婕案嗉膊　?/p>

綜上所述，miR?342?3p在多種女性相關(guān)疾病中表達(dá)，并調(diào)控細(xì)胞增殖、侵襲轉(zhuǎn)移，說明其在多種女性相關(guān)疾病的發(fā)生與發(fā)展過程中起重要作用。雖然miR?342?3p的功能及作用機(jī)制尚未完全明確，但其可作為腫瘤靶向治療新的靶點，其潛在利用價值毋庸質(zhì)疑。目前仍有許多問題尚待闡明，如miR?342?3p表達(dá)在子宮內(nèi)膜癌、宮頸癌、卵巢癌中發(fā)生何種改變，通過何種途徑影響子宮內(nèi)膜癌、宮頸癌、卵巢癌的發(fā)生發(fā)展等均需進(jìn)一步的研究來解決。隨著miR?342?3p的各種分子生物學(xué)作用機(jī)制被逐步了解，miR?342?3p將會有更加廣闊的應(yīng)用前景。