成偉華，王文倩，尚 海，張宏武，郭 強，陳 虹，鄒忠梅*

(1中國醫(yī)學科學院北京協(xié)和醫(yī)學院藥用植物研究所，北京 100193；2原子高科股份有限公司，北京 102413；3天津藥物研究院，天津 300193；4北京市計量檢測科學研究院，北京 100029；5武警后勤學院生藥學教研室，天津 300309)

西松烷型二萜為十四元大環(huán)二萜，結(jié)構(gòu)中大都有氧取代，結(jié)構(gòu)變化多樣，多存在于低等海洋生物中，如腔腸動物柳珊瑚科和軟珊瑚科，在陸生植物中比較少見，是一類結(jié)構(gòu)新穎、特殊且具有重要生物活性的天然產(chǎn)物，具有顯著的抗炎[1]、抗菌[2-3]、抗HIV[4-6]等活性。近年來隨著加大對海洋生物的開發(fā)和利用，很多新結(jié)構(gòu)的西松烷型二萜化合物被發(fā)現(xiàn)，這些化合物具有良好抗腫瘤活性[7-8]，受到廣泛關(guān)注。例如：Wen等[9]發(fā)現(xiàn)中國南海軟珊瑚乙醇提取物中的乙酸乙酯部分對腫瘤細胞HL-60、HeLa、BGC-823、Bel-7402、PC-3MIE8和Hep-2的抑制率均超過50%(100 μg/mL)，并從中分離得到兩個新的西松烷二萜Sinulaflexiolides D和Sinulaflexiolide E，其對人胃癌細胞BGC-823的IC50分別為8.5和0.12 μmol/L。

本課題組前期從光葉巴豆中首次分離得到了一系列的西松烷型二萜型化合物。其中CL-8(圖1)在光葉巴豆中含量很高，在生藥中質(zhì)量分數(shù)達到0.70%，且具有一定的抗腫瘤活性(對HeLa 細胞IC50=45.4 μmol/L)。

三氮唑類化合物具有多種生物活性，包括抗真菌、抗病毒、抗過敏和抗腫瘤活性。其中含三氮唑片段結(jié)構(gòu)的化合物作為新型的抗腫瘤藥物，已經(jīng)廣泛應用于臨床。目前用于臨床的含三氮唑抗腫瘤藥物有來曲唑、阿那曲唑、氟氯唑和二溴苯基三唑[10-11](圖2)，此外一些新的三氮唑類抗腫瘤化合物(如血管生成抑制劑E4896，圖2)目前正開展臨床Ⅲ期試驗[12]。

Figure1 Structure of cembrane CL-8

Figure2 Structures of antitumor drugs conjugated with 1,2,3-triazole

基于三氮唑在抗腫瘤藥物中所起到的作用，運用藥物設計的拼合原理，在西松烷型二萜CL-8中引入三氮唑基團，通過改變?nèi)蛏喜煌娜〈铣扇蛳盗形魉赏樾投蒲苌?，其結(jié)構(gòu)經(jīng)1H NMR，13C NMR和HRMS的確證，并經(jīng)MTT法篩選了該類衍生物的細胞毒性和抗耐藥活性。

1 合成路線

目標化合物8a～8l的合成過程見路線1～2。首先以取代的溴芐、肉桂基溴以及烷基溴代物2為原料，通過與疊氮化鈉反應得到疊氮中間體3a～3k(路線1)。接著，以西松烷二萜(1)為起始原料，用LiAlH4對其C-20位羧基進行還原得到羥基化合物4，接著經(jīng)Dess-Martin氧化得到醛基中間體5，再運用Corey-Fuchs反應，得到末端炔烴化合物7。最后將末端炔烴化合物7與疊氮中間體3a～3k經(jīng)點擊化學合成得到1,2,3三氮唑取代的西松烷二萜衍生物8a～8k。衍生物8l的合成則是化合物7直接與可市售的對甲基苯磺?；B氮反應得到(路線2)。

2 實驗部分

2.1 材 料

Bruker AM600型核磁共振光譜儀，采用CDCl3為溶劑，四甲基硅烷(TMS)為內(nèi)標，偶合常數(shù)(J)以赫茲(Hz)為記錄單位。高分辨質(zhì)譜(ESI-HRMS)在Quattro MicroTMAPI(Waters,Milford,MA)質(zhì)譜儀。薄層色譜硅膠：GF254(青島海洋化工廠)。MQX-200酶標儀(美國Bio-Tek儀器公司)。無水乙醚為用無水Na2SO4預干燥后加入鈉絲回流后重蒸得到，無水甲苯用無水Na2SO4預干燥后加入氫化鈣回流后重蒸得到，無水THF用無水Na2SO4預干燥后加入鈉絲回流后重蒸得到。西松烷型二萜(CL-8)原料來自實驗室前期分離得到。其余試劑均為市售分析純試劑。活性測試所用細胞為天津武警后勤學院生藥學系提供。

Scheme1Synthetic route of azides intermediates3a-3k

Scheme2Synthetic route of the target compounds8a-8l

Reagents and condition:(a) LiAlH4,Dry Et2O;(b) Dess-Martin,CH2Cl2;(c) PPh3,CBr4,CH2Cl2;(d) LDA,THF;(e) CuTc,toluene

2.2 化學合成

2.2.1 疊氮中間體的合成 將取代的芐基溴(2a～2i，1 mmol)加入丙酮-水(4∶1)混合溶劑5 mL中，加入疊氮鈉(96 mg,1.5 mmol)，室溫反應24 h，TLC檢測反應完全，CH2Cl2萃取，無水Na2SO4干燥，減壓蒸干，得到取代的芐基疊氮(3a～3i)，產(chǎn)率75%～85%。

將肉桂基溴(2j，195 mg,1 mmol)加入丙酮-水(4∶1)混合溶劑5 mL中，加入疊氮鈉(96 mg,1.5 mmol)，室溫反應24 h，TLC檢測反應完全，CH2Cl2萃取，無水Na2SO4干燥，減壓蒸干，得到肉桂基疊氮(3j)130 mg，產(chǎn)率82%。

將3-溴-1-丙醇(2k，137 mg,1 mmol)加入丙酮-水(4∶1)混合溶劑5 mL中，加入疊氮鈉(96 mg,1.5 mmol)，室溫反應24 h，TLC檢測反應完全，CH2Cl2進行萃取，無水Na2SO4干燥，減壓蒸干，得到3-疊氮-1-丙醇(3k)81 mg，產(chǎn)率80%。

2.2.2 西松烷二萜中間體的合成

新巴豆瑞士松醇(4) 將LiAlH4(760 mg,20 mmol)攪拌使其溶解于干燥乙醚15 mL中，然后加入恒壓滴液漏斗中，將西松烷型二萜(1，3.02 g,10 mmol)溶于干燥乙醚150 mL中，0 ℃下將溶解于干燥乙醚的LiAlH4緩慢滴加到西松烷型二萜反應液中，滴加完畢后，室溫反應4 h。TLC檢測反應完成，0 ℃下，加入少量水淬滅反應，而后加入2 mol/L H2SO4溶液直至白色沉淀完全溶解，再加入等體積的CH2Cl2，分出有機層，無水Na2SO4干燥，減壓蒸干，柱色譜分離得到白色固體新巴豆瑞士松醇(4)，2.16 g，產(chǎn)率75%。

新巴豆瑞士松醛(5) 將新巴豆瑞士松醇(4，1.44 g,5 mmol)溶解于無水CH2Cl2100 mL中，緩慢加入Dess-Martin氧化劑(4.24 g,10 mmol)，室溫反應2 h，TLC檢測反應完成，加入飽和Na2S2O3溶液，攪拌10 min，再加入飽和NaHCO3溶液攪拌直至溶液澄清，分出有機層，無水Na2SO4干燥，減壓蒸干，柱色譜分離得到無色油狀物新巴豆瑞士松醛(5)858 mg，產(chǎn)率60%。

新巴豆瑞士松炔(7) 將CBr4(1.08 g,3.3 mmol)溶解于10 mL無水CH2Cl2中，將PPh3(1.57 g,6 mmol)溶解于25 mL無水CH2Cl2中，0 ℃加入CBr4的 CH2Cl2溶液，室溫反應30 min后，0 ℃加入新巴豆瑞士松醛(5,852 mg,3 mmol)，室溫反應3 h，TLC檢測反應完成，加入30 mL水淬滅反應，分出有機層，無水Na2SO4干燥，減壓蒸干，柱色譜的得無色油狀物二溴新巴豆瑞士松烯(6)792 mg，產(chǎn)率60%。

將二異丙胺(420 μL,3 mmol)溶解于無水THF10 mL中，0 ℃加入n-BuLi(1.25 mL,3 mmol)，反應20 min，制備得到LDA試劑。在-78 ℃下，將二溴新巴豆瑞士松烯6(440 mg,1 mmol)溶解于無水THF 20 mL中，緩慢加入LDA試劑，反應1 h后加入飽和NH4Cl溶液淬滅反應，石油醚萃取，有機相用無水Na2SO4干燥，減壓蒸干，柱色譜分離得到無色油狀物新巴豆瑞士松炔(7)140 mg，產(chǎn)率50%。

2.2.3 目標化合物8a～8l的合成 新巴豆瑞士松炔(7,70 mg,0.25 mmol)溶解于無水甲苯5 mL中，加入取代的疊氮化合物3a～3i(0.3 mmol)，噻吩-2-甲酸亞銅(2 mg,0.01 mmol)，室溫攪拌反應2～4 h，TLC檢測反應完全，飽和NH4Cl淬滅反應，乙酸乙酯萃取，分出有機層，無水Na2SO4干燥，減壓蒸干，柱色譜分離得到目標產(chǎn)物8a～8i，產(chǎn)率60%～70%。

1-芐基-1,2,3-三氮唑-1-H-4-新巴豆瑞士松烷(8a) 無色油狀物，產(chǎn)率：62%;1H NMR(600 MHz,CDCl3)δ：7.43～7.36(3H,m,3,4,5-ArH),7.32～7.30(2H,m,2,6-ArH),7.28(1H,s,5-triazole-H),6.08(1H,t,J=7.9 Hz,11-H),6.06～6.00(1H,m,2-H),5.94(1H,d,J=11.1 Hz,3-H),5.53(2H,s,-CH2-Ar),5.22～5.15(1H,m,7-H),2.62～2.57(2H,m,10-H),2.43～2.39(2H,m,13-H),2.38～2.34(1H,m,15-H),2.31～2.27(2H,m,14-H),2.27～2.24(2H,m,6-H),2.19～2.18(2H,m,9-H),2.18～2.16(2H,m,5-H),1.75(3H,s,18-H),1.68(3H,s,19-H),1.02(3H,s,16-H),1.01(3H,s,17-H)。13C NMR(150 MHz,CDCl3)δ：150.4,146.6,135.6,135.3,134.9,130.2,129.8,129.0,128.5,127.9,127.0,120.2,118.6,118.5,53.9,39.3,37.9,34.6,29.8,29.2,29.1,24.7,22.1,17.8,17.5。ESI-HRMSm/z:Calcd.for C28H38N3[M+H]+,416.306 6；Found 416.3264[M+H]+。

1-對氯芐基-1,2,3-三氮唑-1-H-4-新巴豆瑞士松烷(8b) 無色油狀物，產(chǎn)率：66%;1H NMR(600 MHz,CDCl3)δ:7.33(2H,d,J=8.5 Hz,3,5-ArH),7.23(1H,s,5-triazole-H),7.20(2H,d,J=8.5 Hz,2,6-ArH),6.03(1H,t,J=7.9 Hz,11-H),5.98(1H,d,J=11.0 Hz,2-H),5.89(1H,d,J=11.0 Hz,3-H),5.45(2H,s,-CH2-Ar),5.17～5.11(1H,m,7-H),2.59～2.51(2H,m,10-H),2.38～2.34(2H,m,13-H),2.34～2.31(1H,m,15-H),2.26～2.23(2H,m,14-H),2.23～2.20(2H,m,6-H),2.16～2.14(2H,m,9-H),2.14～2.12(2H,m,5-H),1.70(3H,s,18-H),1.64(3H,s,19-H),0.98(3H,s,16-H),0.97(3H,s,17-H)。13C NMR(150 MHz,CDCl3)δ：150.6,146.5,135.5,135.3,134.6,133.4,130.1,130.1,129.2,129.2,127.1,120.2,118.6,118.6,53.2,39.3,37.8,34.5,29.7,29.2,29.1,24.7,22.1,17.8,17.5。ESI-HRMSm/z:Calcd.for C28H37ClN3[M+H]+,450.267 6；Found 450.287 6[M+H]+。

1-鄰氟芐基-1,2,3-三氮唑-1-H-4-新巴豆瑞士松烷(8c) 無色油狀物，產(chǎn)率：63%;1H NMR(600 MHz,CDCl3)δ:7.39～7.31(1H,m,4-ArH),7.34(1H,s,5-triazole-H),7.28～7.23(1H,m,3-ArH),7.16～7.08(2H,m,5,6-ArH),6.06(1H,t,J=7.9 Hz,11-H),5.99(1H,d,J=11.1 Hz,2-H),5.90(1H,d,J=11.1 Hz,3-H),5.55(2H,s,-CH2-Ar),5.15(1H,t,J=6.9 Hz,7-H),2.58～2.53(2H,m,10-H),2.38～2.35(2H,m,13-H),2.35～2.32 1H,(m,15-H),2.27～2.24(2H,m,14-H),2.23～2.20(2H,m,6-H),2.17～2.14(2H,m,9-H),2.14～2.12(2H,m,5-H),1.71(3H,s,18-H),1.65(3H,s,19-H),0.99(3H,s,16-H),0.98(3H,s,17-H)。13C NMR(150 MHz,CDCl3)δ：161.2,150.4,146.6,135.6,135.3,130.7,130.5,130.1,129.9,127.0,124.7,120.2,118.8,118.5,115.,115.6,47.4,47.3,39.3,37.9,34.6,29.8,29.2,29.1,24.7,22.0,17.8,17.5。ESI-HRMSm/z:Calcd.for C28H37FN3[M+H]+,434.297 2；Found 434.318 0[M+H]+。

1-對甲基芐基-1,2,3-三氮唑-1-H-4-新巴豆瑞士松烷(8d) 無色油狀物，產(chǎn)率：63%;1H NMR(600 MHz,CDCl3)δ:7.21(1H,s,5-triazole-H),7.17(2H,s,2,6-ArH),7.17(2H,s,3,5-ArH),6.04(1H,t,J=7.9 Hz,11-H),5.99(1H,d,J=11.0 Hz,2-H),5.90(1H,d,J=11.0 Hz,3-H),5.44(2H,s,-CH2-Ar),5.15(1H,t,J=6.9 Hz,7-H),2.58～2.51(2H,m,10-H),2.38～2.35(2H,m,13-H),2.34(3H,s,Ar-CH3),2.34～2.31(1H,m,15-H),2.26～2.23(2H,m,14-H),2.23～2.20(2H,m,6-H),2.16 ～2.14(2H,m,9-H),2.14～2.12(2H,m,5-H),1.70(3H,s,18-H),1.65(3H,s,19-H),0.98(3H,s,16-H),0.97(3H,s,17-H)。13C NMR(150 MHz,CDCl3)δ：150.3,146.7,138.5,135.7,135.3,131.9,130.2,129.7,129.6,128.0,127.0,120.3,118.5,118.5,53.7,39.3,37.9,34.6,29.8,29.3,29.1,24.7,22.1,21.1,17.8,17.5。ESI-HRMSm/z:Calcd.for C29H40N3[M+H]+,430.322 2；Found 430.342 7[M+H]+。

1-對溴芐基-1,2,3-三氮唑-1-H-4-新巴豆瑞士松烷(8e) 無色油狀物，產(chǎn)率：68%;1H NMR(600 MHz,CDCl3)δ:7.49(2H,d,J=8.0 Hz,3,5-ArH),7.23(1H,s,5-triazole-H),7.14(2H,d,J=8.0 Hz,2,6-ArH),6.03(1H,t,J=7.9 Hz,11-H),5.99(1H,d,J=11.0 Hz,2-H),5.89(1H,d,J=11.0 Hz,3-H),5.44(2H,s,-CH2-Ar),5.15(1H,t,J=7.0 Hz,7-H),2.60～2.52(2H,m,10-H),2.39～2.35(2H,m,13-H),2.34～ 2.31(1H,m,15-H),2.27～2.24(2H,m,14-H),2.24～2.20(2H,m,6-H),2.16～2.14(2H,m,9-H),2.14～2.12(2H,m,5-H),1.71(3H,s,18-H),1.64(3H,s,19-H),0.99(3H,s,16-H),0.98(2H,s,17-H)。13C NMR(150 MHz,CDCl3)δ：150.6,146.5,135.5,135.3,133.9,132.2,130.1,130.1,129.5,127.1,122.7,120.2,118.5,53.2,39.3,37.8,34.5,29.7,29.2,29.1,24.7,22.1,17.8,17.5。ESI-HRMSm/z:Calcd.for C28H37BrN3[M+H]+,494.217 1；Found 494.215 4[M+H]+。

1-對叔丁基芐基-1,2,3-三氮唑-1-H-4-新巴豆瑞士松烷(8f) 無色油狀物，產(chǎn)率：61%;1H NMR(600 MHz,CDCl3)δ:7.38(2H,d,J=8.2 Hz,3,5-ArH),7.23(1H,s,5-triazole-H),7.21(2H,d,J=8.2 Hz,2,6-ArH),6.05(1H,t,J=7.9 Hz,11-H),6.01～5.96(1H,m,2-H),5.89(1H,d,J=11.1 Hz,3-H),5.45(2H,s,-CH2-Ar),5.17 ～5.13(1H,m,7-H),2.59～2.51(2H,m,10-H),2.39～2.34(2H,m,13-H),2.34～2.31(1H,m,15-H),2.27～2.24(2H,m,14-H),2.24～2.20(2H,m,6-H),2.16～2.14(2H,m,9-H),2.14～2.12(2H,m,5-H),1.71(3H,s,18-H),1.64(3H,s,19-H),1.30(9H,s,-C(CH3)3),0.98(3H,s,16-H),0.97(3H,s,17-H)。13C NMR(150 MHz,CDCl3)δ：151.7,150.3,146.6,135.6,135.3,131.9,130.2,129.7,127.7,127.0,125.9,120.3,118.6,118.5,53.6,39.3,37.9,34.6,31.2,29.8,29.3,29.1,24.7,22.1,17.8,17.5。ESI-HRMSm/z:Calcd.for C32H46N3[M+H]+,472.369 2；Found 472.392 8[M+H]+。

1-對氰基芐基-1,2,3-三氮唑-1-H-4-新巴豆瑞士松烷(8g) 無色油狀物，產(chǎn)率：60%;1H NMR(600 MHz,CDCl3)δ:7.66(2H,d,J=8.1 Hz,3,5-ArH),7.34(2H,d,J=8.1 Hz,2,6-ArH),7.29(1H,s,5-triazole-H),6.04(1H,t,J=7.9 Hz,11-H),5.99(1H,d,J=11.0 Hz,2-H),5.89(1H,d,J=11.0 Hz,3-H),5.55(2H,s,-CH2-Ar),5.15(1H,t,J=6.9 Hz,7-H),2.58(2H,t,J=7.9 Hz,10-H),2.40～2.35(2H,m,13-H),2.35～2.31(1H,m,15-H),2.28～2.25(2H,m,14-H),2.24～2.21(2H,m,6-H),2.17～ 2.15(2H,m,9-H),2.14～2.12(2H,m,5-H),1.71(3H,s,18-H),1.64(3H,s,19-H),0.99(3H,s,16-H),0.98(3H,s,17-H)。13C NMR(150 MHz,CDCl3)δ：150.9,146.4,140.1,135.4,135.3,132.7,130.5,130.0,128.3,128.2,127.2,120.2,118.8,118.6,118.1,112.6,53.2,39.3,37.8,34.5,29.7,29.2,29.1,24.7,22.1,17.8,17.5。ESI-HRMSm/z:Calcd.for C29H37N4[M+H]+,441.301 8；Found 441.321 0[M+H]+。

1-對甲氧基芐基-1,2,3-三氮唑-1-H-4-新巴豆瑞士松烷(8h) 無色油狀物，產(chǎn)率：70%;1H NMR(600 MHz,CDCl3)δ:7.23(2H,d,J=8.6 Hz,3,5-ArH),7.20(1H,s,5-triazole-H),6.89(2H,d,J=8.6 Hz,2,6-ArH),6.03(1H,t,J=7.9 Hz,11-H),5.99(1H,d,J=11.0 Hz,2-H),5.90(1H,d,J=11.0 Hz,3-H),5.42(2H,s,-CH2-Ar),5.19～5.11(1H,m,7-H),3.80(3H,s,-OCH3),2.60～2.49(2H,m,10-H),2.38～2.35(2H,m,13-H),2.34～2.31(1H,m,15-H),2.26～2.24(2H,m,14-H),2.23～2.20(2H,m,6-H),2.15～2.14(2H,m,9-H),2.14～2.12(2H,m,5-H),1.70(3H,s,18-H),1.66(3H,s,19-H),0.99(3H,s,16-H),0.97(3H,s,17-H)。13C NMR(150 MHz,CDCl3)δ：159.8,150.3,146.7,135.7,135.3,130.2,129.7,129.5,127.0,126.9,120.3,118.5,118.4,114.3,55.3,53.5,39.3,37.9,34.6,29.8,29.3,29.1,24.7,22.1,17.8,17.5。ESI-HRMSm/z:Calcd.for C29H40N3O[M+H]+,446.317 1；Found 446.328 5[M+H]+。

1-(4-三氟甲基芐基)-1,2,3-三氮唑-1-H-4-新巴豆瑞士松烷(8i) 無色油狀物，產(chǎn)率：66%;1H NMR(600 MHz,CDCl3)δ:7.63(2H,d,J=8.1 Hz,3,5-ArH),7.37(2H,d,J=8.1 Hz,2,6-ArH),7.26(1H,s,5-triazole-H),6.05(1H,t,J=7.9 Hz,11-H),5.99(1H,d,J=11.0 Hz,2-H),5.89(1H,d,J=11.0 Hz,3-H),5.56(2H,s,-CH2-Ar),5.15(1H,dt,J=6.9,4.1 Hz,7-H),2.62～2.51(2H,m,10-H),2.40～2.35(2H,m,13-H),2.35～2.31(1H,m,15-H),2.28～2.24(2H,m,14-H),2.24～2.20(2H,m,6-H),2.17～2.15(2H,m,9-H),2.15～2.12(2H,m,5-H),1.71(3H,s,18-H),1.63(3H,s,19-H),0.98(3H,s,16-H),0.97(3H,s,17-H)。13C NMR(150 MHz,CDCl3)δ：150.8,146.4,138.9,135.5,135.3,130.3,130.0,128.0,127.1,126.0,126.0,120.2,118.7,118.6,53.3,39.3,37.8,34.5,29.7,29.2,29.1,24.7,22.1,17.8,17.5。ESI-HRMSm/z:Calcd.for C29H37F3N3[M+H]+,484.294 0；Found 484.317 9[M+H]+。

新巴豆瑞士松炔(7,70 mg，0.25 mmol)溶解于無水甲苯5 mL中，加入肉桂基疊氮(3j,48 mg,0.3 mmol)，噻吩-2-甲酸亞銅(2 mg,0.01 mmol)，室溫攪拌反應3 h，TLC檢測反應完全，飽和NH4Cl淬滅反應，乙酸乙酯進萃取，分出有機層，無水Na2SO4干燥，減壓蒸干，柱色譜分離得到目標產(chǎn)物8j，產(chǎn)率58%。

1-肉桂基-1,2,3-三氮唑-1-H-4-新巴豆瑞士松烷(8j) 無色油狀物，產(chǎn)率：58%;1H NMR(600 MHz,CDCl3)δ:7.39(1H,s,5-triazole-H),7.40～7.37(2H,m,2,6-ArH),7.34(2H,t,J=7.5 Hz,3,5-ArH),7.29(1H,t,J=7.5 Hz,4-ArH),6.67(1H,d,J=15.8 Hz,-CH=CH-Ar),6.35(1H,dt,J=15.8,6.6 Hz,-CH=CH- Ar),6.06(1H,t,J=7.9 Hz,11-H),6.01(1H,d,J=11.1 Hz,2-H),5.93(1H,d,J=11.1 Hz,3-H),5.16(1H,t,J=7.9 Hz,7-H),5.10(2H,d,J=6.6 Hz,-CH2-CH=CH-),2.63～2.56(2H,m,10-H),2.41～2.37(2H,m,13-H),2.37～2.33(1H,m,15-H),2.31～2.26(2H,m,14-H),2.26～2.21(2H,m,6-H),2.18～2.16(2H,m,9-H),2.15～2.13(2H,m,5-H),1.72(3H,s,18-H),1.69(3H,s,19-H),1.01(3H,s,16-H),1.00(3H,s,17-H)。13C NMR(150 MHz,CDCl3)δ：150.3,146.8,135.7,135.5,135.2,135.0,130.3,129.9,128.7,128.4,127.1,126.6,122.2,120.3,118.5,118.5,52.2,39.3,37.9,34.6,29.9,29.6,29.3,29.2,24.7,22.1,17.9,17.6。ESI-HRMSm/z:Calcd.for C30H40N3[M+H]+,442.322 2；Found 442.341 1[M+H]+。

新巴豆瑞士松炔(7,70 mg，0.25 mmol)溶解于無水甲苯5 mL中，加入3-疊氮-1-丙醇(3k,30 mg,0.3 mmol)，噻吩-2-甲酸亞銅(2 mg,0.01 mmol)，室溫攪拌反應4 h后，TLC檢測反應完全，飽和NH4Cl淬滅反應，乙酸乙酯進行萃取，分出有機層，無水Na2SO4干燥，減壓蒸干，柱色譜得到目標產(chǎn)物8k，產(chǎn)率52%。

1-丙醇基-1,2,3-三氮唑-1-H-4-新巴豆瑞士松烷(8k) 無色油狀物，產(chǎn)率：52%;1H NMR(600 MHz,CDCl3)δ:7.38(1H,s,5-triazole-H),6.06(1H,t,J=7.9 Hz,11-H),6.02(1H,d,J=11.0 Hz,2-H),5.94(1H,d,J=11.0 Hz,3-H),5.16(1H,t,J=6.9 Hz,7-H),4.48(2H,t,J=6.7 Hz,Triazole-CH2-),3.66(2H,t,J=5.8 Hz,-CH2-OH),2.58(2H,t,J=7.9 Hz,10-H),2.41～2.37(2H,m,13-H),2.37～2.34(1H,m,15-H),2.30～2.26(2H,m,14-H),2.26～2.22(2H m,,6-H),2.18～2.16(2H,m,9-H),2.16～2.14(2H,m,5-H),2.14～2.10(2H,m,-CH2-CH2-CH2-OH),1.72(3H,s,18-H),1.70(3H,s,19-H),1.03(3H,s,16-H),1.02(3H,s,17-H)。13C NMR(150 MHz,CDCl3)δ：150.0,146.7,135.7,135.3,130.2,129.9,127.1,120.3,119.2,118.5,58.8,46.7,39.3,37.9,34.6,32.6,29.9,29.3,29.2,24.7,22.1,22.1,17.8,17.5。ESI-HRMSm/z:Calcd.for C24H38N3O[M+H]+,384.301 5；Found 384.320 1[M+H]+。

將新巴豆瑞士松炔(7,70 mg，0.25 mmol)溶解于無水甲苯5 mL中，室溫加入對甲苯磺酰疊氮(3l,59 mg,0.3 mmol)，噻吩-2-甲酸亞銅(2 mg,0.01 mmol)，室溫攪拌反應2 h，TLC檢測反應完全，飽和NH4Cl淬滅反應，乙酸乙酯萃取，分出有機層，無水Na2SO4干燥，減壓蒸干，柱色譜分離得到目標產(chǎn)物8l，產(chǎn)率65%。

1-對甲基磺酰基-1,2,3-三氮唑-1-H-4-新巴豆瑞士松烷(8l) 無色油狀物，產(chǎn)率：65%;1H NMR(600 MHz,CDCl3)δ:7.99(2H,d,J=8.1 Hz,2,6-ArH),7.79(1H,s,5-triazole-H),7.37(2H,d,J=8.1 Hz,3,5-ArH),6.06(1H,t,J=7.7 Hz,11-H),5.94(1H,d,J=11.0 Hz,2-H),5.79(1H,d,J=11.0 Hz,11-H,3-H),5.18～5.10(1H,m,7-H),2.57(2H,t,J=7.7 Hz,10-H),2.44(3H,s,Ar-CH3),2.40～2.34(2H,m,13-H),2.32～2.28(1H,m,15-H),2.26～2.24(2H,m,14-H),2.24～2.22(2H,m,6-H),2.19～2.16(2H,m,9-H),2.16～2.13(2H,m,5-H),1.72(3H,s,18-H),1.63(3H,s,19-H),0.93(3H,s,16-H),0.92(3H,s,17-H)。13C NMR(150 MHz,CDCl3)δ：149.8,147.0,145.8,135.7,134.7,133.3,132.7,130.2,128.9,128.6,127.5,119.8,118.9,117.7,39.2,37.5,34.0,29.2,29.0,28.5,24.7,21.9,21.7,17.9,17.3。ESI-HRMSm/z:Calcd.for C28H38N3O2S[M+H]+,480.268 5；Found 480.287 4[M+H]+。

2.3 MTT法檢測體外抗腫瘤活性

對數(shù)生長期細胞培養(yǎng)于96孔培養(yǎng)板內(nèi)，每孔100 μL(含5 000～6 000個腫瘤細胞)，置37 ℃，5% CO2溫箱中培養(yǎng)。次日，給藥組加入含有不同濃度的化合物，每種細胞設4～5個劑量組，每組至少設3個平行孔。對照組加入與給藥組等體積的溶劑。置37 ℃，5% CO2溫箱中培養(yǎng)。48 h后棄培養(yǎng)液，每孔加5 mg/mL MTT溶液(培養(yǎng)基配制)20 μL。37 ℃孵育4 h，棄上清液，每孔加入DMSO 150 μL溶解甲臜顆粒，輕度振蕩溶解。用酶標儀在參考波長450 nm、檢測波長570 nm條件下測定吸收度(A)，以溶劑對照處理的細胞為對照組，用對照組平均A減去給藥組平均A除以對照組平均A，計算藥物對細胞的抑制率，根據(jù)計算得到的各濃度的抑制率通過Logit方法計算得到半數(shù)抑制濃度(IC50)，重復測試3次，取平均值為最終結(jié)果[13]。

測試12個新的西松烷二萜衍生物的細胞毒活性(表1)。結(jié)果顯示所合成的新化合物中8b,8c,8e,8f,8h和8i具有細胞毒活性，對HeLa和K562細胞的細胞毒活性與陽性對照藥依托泊苷(VP-16)相當，對耐藥的K562/A02細胞的細胞毒活性與VP-16相比提高很多。初步構(gòu)效關(guān)系顯示，當所合成西松烷型二萜衍生物的取代基三氮唑上連接苯環(huán)上時，化合物活性較好，而連接脂肪鏈時無活性。苯環(huán)上連有甲基、叔丁基等給電子基團的化合物，和連有氰基、鹵素等吸電子基團的化合物相比活性差異不大。

人類多藥耐藥基因1(MDR-1)[14]編碼一種鑲嵌于細胞膜上的泵蛋白P-gp，它在腫瘤多藥耐藥過程中起到重要的作用。該蛋白表達的增多可以導致藥物從腫瘤細胞中外排增強，從而使細胞對于化療藥物表現(xiàn)出相當?shù)目剐?，K562/A02細胞株也正是通過上述機制從而產(chǎn)生耐藥性。部分衍生物對K562/A02細胞株表現(xiàn)出良好的抗多藥耐藥作用，說明其很可能通過抑制MDR-1的表達從而提高抗耐藥活性，目前，進一步的作用機制研究正在進行中。

CompdIC50/(×10-5mol/L)HeLaK562K562/A02CompdIC50/(×10-5mol/L)HeLaK562K562/A028a>100>100>1008h426±036165±021182±0228b526±042130±024143±0328i365±024183±015323±0208c854±087274±033326±0358j>100>100>1008d>100>100>1008k>100>100>1008e609±038119±022190±0158l>100>100>1008f454±031120±008129±0111454±321>100>1008g>100>100>100VP?16211±025082±006191±124

VP-16：etoposide

3 結(jié)果與討論

在許多抗腫瘤藥物中都存在三氮唑片段，說明三氮唑基團可能為發(fā)揮抗腫瘤作用的重要基團。本研究在西松烷型二萜(CL-8)中引入不同的取代基的三氮唑基團，合成一系列三氮唑系列西松烷型二萜衍生物，其結(jié)構(gòu)經(jīng)1H NMR，13C NMR和HRMS的確證。以依托泊苷為陽性對照，MTT法測試了所合成的12個不同取代基的三氮唑西松烷型二萜衍生物對HeLa,K562和K562/A02腫瘤細胞的細胞毒活性，結(jié)果表明西松烷型二萜引入三氮唑后，對HeLa和K562細胞有細胞毒性，對耐藥的K562/A02細胞具有較強的活性，說明此類三氮唑西松烷型二萜衍生物值得進一步研究。

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