史小四，高 強(qiáng)，騫秀芳

（武警北京總隊(duì)第二醫(yī)院藥劑科/醫(yī)務(wù)處，北京 100027）

白藜蘆醇（resveratrol）是一種提取自植物的多酚化合物，具有抗炎、抗氧化、抗血小板聚集、抗腫瘤和免疫調(diào)節(jié)等多種生物活性［1-2］。馬麗等［3］報(bào)道白藜蘆醇抗小鼠胰島樣細(xì)胞團(tuán)移植排斥作用，是一種潛在的免疫抑制藥物。本研究探討白藜蘆醇對(duì)小鼠異體皮膚移植排斥反應(yīng)的影響，以期為白藜蘆醇的深入開(kāi)發(fā)及其在器官移植免疫抑制治療的應(yīng)用提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。12周齡BALB/c小鼠40只及C57BL/6小鼠50只，雄性，體質(zhì)量18～23g，由河北醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。

藥品與試劑。白藜蘆醇（純度大于等于98%）、二甲基亞砜（DMSO）均購(gòu)自美國(guó)Sigma-Aldrich公司；白藜蘆醇以DMSO溶解，用生理鹽水稀釋成所需濃度，現(xiàn)用現(xiàn)配。環(huán)孢素A（ciclosporin A），由瑞士諾華制藥有限公司提供，使用前以生理鹽水配成所需濃度。

建立異體皮膚移植模型。采用背-背皮膚移植法［4］。供體為BALB/c小鼠，受體為C57BL/6小鼠。取C57BL/6小鼠，1%戊巴比妥鈉按50mg/kg腹腔注射麻醉后，于背部移植區(qū)脫毛、消毒，剪去移植區(qū)皮膚，形成植皮創(chuàng)基備用。將BALB/c小鼠同樣條件麻醉、脫毛、消毒后，于其背部切取全層皮膚1塊，刮除其皮下脂肪和肉膜層，修剪成與C57BL/6小鼠創(chuàng)面大小相等的皮片，移植于C57BL/6小鼠植皮創(chuàng)基上，四周間斷縫合固定，輕壓皮片，使其與創(chuàng)面貼緊，用創(chuàng)可貼包扎，分籠飼養(yǎng)。

分組與給藥。術(shù)后受體小鼠隨機(jī)分為5組各10只，模型組用等體積生理鹽水，白藜蘆醇組用50mg/kg［5］，環(huán)孢素A組10mg/kg［6］，白藜蘆醇加亞劑量環(huán)孢素A組用白藜蘆醇50mg/kg加環(huán)孢素A5mg/kg［7］。另10只C57BL/6小鼠，移去移植區(qū)皮膚后再植入原位，作為假手術(shù)組，用等體積生理鹽水。各組均為手術(shù)當(dāng)天開(kāi)始腹腔注射給藥，每天1次，連續(xù)10天。

移植皮片存活觀察。術(shù)后每日定時(shí)觀察小鼠一般狀況和移植皮片的存活情況。若移植皮片質(zhì)地柔軟、顏色紅潤(rùn)、邊緣融合，有部分毛發(fā)生長(zhǎng)則判為存活或耐受。若移植皮片毛發(fā)脫落和表皮壞死為排斥開(kāi)始。若皮片發(fā)黑變硬，形成干痂脫落或潰爛大于1/2，則認(rèn)為完全被排斥。記錄各只小鼠移植皮片出現(xiàn)完全排斥反應(yīng)的天數(shù)。

2 結(jié) 果

白藜蘆醇對(duì)移植皮片存活時(shí)間的影響。試驗(yàn)期間各組小鼠均未出現(xiàn)感染死亡。假手術(shù)組移植皮片未出現(xiàn)排斥反應(yīng)，不參與統(tǒng)計(jì)分析。白藜蘆醇組、環(huán)孢素A組、白藜蘆醇加環(huán)孢素A聯(lián)合組小鼠移植皮片存活時(shí)間分別延長(zhǎng)為（12.87±3.63）、（14.59±2.30）、（16.94±2.16）天，與模型組（9.75±1.28）天比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。白藜蘆醇加環(huán)孢素A聯(lián)合組小鼠移植皮片存活時(shí)間比白藜蘆醇組長(zhǎng)（P＜0.01），且比環(huán)孢素A組長(zhǎng)（P＜0.05）。

3 討 論

異體移植的皮膚因其所涉及抗原的典型性，為移植組織器官中最難以存活。采用動(dòng)物皮膚移植模型來(lái)研究免疫排斥反應(yīng)是一種簡(jiǎn)單而準(zhǔn)確的免疫學(xué)方法［8］。環(huán)孢素A作為臨床器官移植常用的免疫抑制劑，抗排斥反應(yīng)作用強(qiáng)大，但有嚴(yán)重的毒副作用如肝腎毒性、高血壓、骨質(zhì)疏松、代謝紊亂等。

白藜蘆醇是天然的抗氧化劑和自由基清除劑，其安全性已得到臨床研究證實(shí)。白藜蘆醇具有多種對(duì)機(jī)體有益的生物學(xué)作用，其中最引人注目的是抗炎、抗腫瘤和免疫調(diào)節(jié)活性，白藜蘆醇對(duì)動(dòng)物胰島或肝臟的移植排斥反應(yīng)具有抑制作用［3-9］，可能是一種潛在的免疫抑制藥物。白藜蘆醇可使移植皮片的存活率明顯提高，平均存活時(shí)間延長(zhǎng)，急性排斥反應(yīng)顯著減輕。白藜蘆醇可增強(qiáng)環(huán)孢素A的抗排斥反應(yīng)效果，減少免疫抑制劑的劑量以提高用藥安全性。Chander等［10］研究發(fā)現(xiàn)，白藜蘆醇對(duì)長(zhǎng)期口服環(huán)孢素A造成的腎臟毒性有防治作用，提示白藜蘆醇與環(huán)孢素A聯(lián)合應(yīng)用可能有減毒效果。Wu等［9］研究表明白藜蘆醇和環(huán)孢素A聯(lián)用比環(huán)孢素A單用免疫抑制效果要強(qiáng)，聯(lián)用可以下調(diào)外周血T淋巴細(xì)胞的NF-κB活性和血清中的IL-2和INF-水平。

［1］SVAJGER U，JERAS M． Anti-inflammatory effects of resveratrol and its potential use in therapy of immune-mediated diseases［J］．Int Rev Immunol，2012，31（3）：202-222．

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［3］馬麗，張薇華，周光紀(jì)，等．白藜蘆醇對(duì)小鼠胰島樣細(xì)胞團(tuán)的抗移植排斥作用及其IL-2、IL-10表達(dá)的影響［J］．解放軍醫(yī)學(xué)雜志，2012，37（6）：606-609．［4］成功，陳明，孫則禹，等．建立小鼠皮膚移植排斥模型穩(wěn)定獲得記憶T細(xì)胞［J］．中國(guó)比較醫(yī)學(xué)雜志，2008，18（4）：32-35．

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［6］于艷秋，田偉，張海鵬，等．高壓氧與環(huán)孢素A對(duì)皮膚移植小鼠脾活性氧及一氧化氮含量的影響［J］．中國(guó)病理生理雜志，2000，16（12）：1286-1288．

［7］蔡振剛，于志軍，溫爽，等．青藤堿對(duì)大鼠肝移植急性排斥反應(yīng)的影響［J］．遼寧中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2010，12（4）：112-114．

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［9］WU SL，PAN CE，YU L， et al．Immunosuppression by combined use of cyclosporine and resveratrol in a rat liver transplantation model［J］．Transplant Proc，2005，37（5）：2354-2359．

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