田麗芳 ，閆永平，張 濤

（1.保定職業(yè)技術學院畜牧獸醫(yī)系 070051；2.北京農(nóng)學院獸醫(yī)學（中醫(yī)藥）北京市重點實驗室102206）

小腸是動物機體營養(yǎng)吸收的主要場所，生長發(fā)育良好的畜禽其腸道絨毛發(fā)育良好，隱窩深度淺，消化酶活性高，腸道有益菌數(shù)量多［1-2］。牛膝多糖經(jīng)硫酸、醋酸—吡啶酯化后的產(chǎn)物—牛膝多糖硫酸酯，不僅刺激免疫、抗氧化、抗腫瘤和改善消化道微生態(tài)平衡等活性大大增強，同時還具備了較強的抗病毒和抑菌殺蟲等藥理活性[3-4]。對于酯化牛膝多糖對產(chǎn)蛋雞腸道微生物及黏膜結(jié)構和生產(chǎn)性能是否有影響，未見研究報道。本試驗旨在探討牛膝多糖硫酸酯對產(chǎn)蛋雞腸道微生物和小腸黏膜形態(tài)結(jié)構的影響能力，為開發(fā)新型綠色的飼料添加劑的開發(fā)應用奠定理論基礎。

1 試驗材料及方法

1.1 試驗動物的飼養(yǎng)管理

采用單因子試驗設計，以38周齡的京粉1號商品代蛋雞、體重相近的蛋雞200只為試驗動物。隨機分為5組，每組設6個重復，每個重復8只雞。試驗CK組設為對照組，飼喂玉米-豆粕型基礎日糧，試驗I-IV組為酯化牛膝多糖處理組，分別在基礎日糧中添加 50mg/kg、100mg/kg、150mg/kg、200mg/kg 的酯化牛膝多糖，預試期7d，正試期60d。

1.2 腸道微生物數(shù)量測定

試驗期周期結(jié)束時隨機選擇各組試驗雞，每組12只，無菌操作集盲腸、結(jié)腸、直腸糞便內(nèi)容物約3g，用稀釋液逐級稀釋至l0-7接種培養(yǎng)，麥康凱瓊脂培養(yǎng)基培養(yǎng)大腸桿菌；改良番茄瓊脂培養(yǎng)基培養(yǎng)乳酸桿菌；雙歧桿菌采用雙歧桿菌選擇性培養(yǎng)基培養(yǎng)，測定3種細菌的數(shù)量；平板菌落計數(shù)法進行統(tǒng)計細菌數(shù)量，每克樣本所含細菌數(shù)=菌落數(shù)均值×稀釋倍數(shù)／樣品質(zhì)量。

1.3 小腸黏膜形態(tài)測定

將十二指腸、空腸及回腸各切取長約2cm的腸塊置于3.8%的福爾馬林液中固定，經(jīng)組織切片制作染色（HE），10倍光學顯微鏡下選擇選5個典型視野，在應用DT2000通用圖像分析軟件2.0測量小腸絨毛高度和隱窩深度，小腸絨毛高度指的是腸腺開口至絨毛頂端的垂直高度，隱窩深度為絨毛根部上皮凹陷到固有層的距離。

2 結(jié)果與分析

2.1 對腸道微生物數(shù)量的影響

試驗Ⅱ，Ⅲ，Ⅳ在抑制腸道中大腸桿菌和提高雙歧桿菌、乳酸桿菌的效果好于對照組(P<0.05或P<0.01)。酯化牛膝多糖試驗Ⅲ，Ⅳ組在抑制腸道大腸桿菌和促進腸道有益菌顯著好于對照組(P<0.05或P<0.01),試驗組之間隨著添加量的增加，其抑制腸道大腸桿菌和促進腸道有益菌的效果逐漸提高，Ⅱ和Ⅳ組之間差異顯著或極顯著(P<0.05或P<0.01),結(jié)果見表1。

表1 牛膝多糖對蛋雞腸道微生物的影響結(jié)果

2.2 牛膝多糖對小腸黏膜形態(tài)結(jié)構的影響

十二指腸段上皮細胞層厚度各組相比均無顯著性差異，空腸段和回腸段上皮細胞層厚度隨著試驗Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ組多糖添加量的增加而增加，顯著或極顯著大于對照組和試驗I組(P<0.01或P<0.05)；在十二指腸段，腸絨毛高度和降低隱窩深度試驗Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ組明顯好于對照組(P<0.01或P<0.05)，空腸和回腸的隱窩深度之間沒有顯著差異，試驗Ⅲ、Ⅳ組各測定指標之間差異不明顯，這說明酯化牛膝多糖添加量在150mg/kg和200mg/kg時對腸道的上皮細胞、絨毛高度和隱窩深度的影響沒有顯著差異。

十二指腸

空腸

回腸

表2 酯化牛膝多糖對肉雞不同腸段腸黏膜形態(tài)學指標的影響結(jié)果

3 討論

3.1 酯化牛膝多糖能夠抑制蛋雞腸道中大腸桿菌的生長，促進乳酸菌和雙歧桿菌的增殖

禽類的消化道菌群穩(wěn)定、維持機體微生態(tài)的平衡，這對禽類的消化吸收，免疫起著至關重要作用。李樹鵬等（2002）研究表明黃芪多糖能減少雛雞腸道大腸桿菌的數(shù)量，增加乳酸桿菌和雙歧桿菌的數(shù)量，回腸和盲腸的絨毛變長、變粗，排列緊密［5］。高楊等（2011）研究顯示適量黃芪多糖可降低產(chǎn)蛋雞盲腸中大腸桿菌數(shù)量，增加乳酸菌和雙歧桿菌的數(shù)量[1]。陳清華等（2007）研究顯示牛膝多糖能夠抑制仔豬腸道中大腸桿菌的生長，促進腸道中乳酸菌和雙歧桿菌的增殖［6］。本試驗結(jié)果表明酯化牛膝多糖能抑制生產(chǎn)蛋雞腸道大腸桿菌的生產(chǎn)，增殖雙歧桿菌和乳酸桿菌 ，且隨劑量的增加效果越明顯。這與前人的研究結(jié)果一致。

3.2 酯化牛膝多糖對產(chǎn)蛋雞小腸組織結(jié)構的影響

營養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收主要在肝臟和腸道進行，腸道菌群的穩(wěn)定和黏膜結(jié)構的健康與否將直接影響動物對飼料的利用程度。陳清華等（2007）研究表明牛膝多糖能顯著增加腸道上皮細胞層厚度，增加腸絨毛高度，顯著降低隱窩深度 (P<0.05或P<0.01)，增強機體消化吸收能力，從而提高仔豬的生產(chǎn)性能［6］。成年產(chǎn)蛋雞腸道菌群穩(wěn)定，腸黏膜結(jié)構形態(tài)趨于完善，研究結(jié)果表明酯化牛膝多糖的添加有改善腸道結(jié)構的趨勢，改善空腸、回腸上皮細胞層厚度的效果比十二指腸好；能顯著改善十二指腸腸絨毛高度和降低隱窩深度(P<0.05或P<0.01)，這與陳清華等人的研究結(jié)果相似。

酯化牛膝多糖能抑制產(chǎn)蛋雞腸道中大腸桿菌的生長，增殖乳酸菌和雙歧桿菌，顯著增加空腸和回腸上皮細胞層厚度、絨毛高度，降低十二指腸隱窩深度。結(jié)果表明酯化牛膝多糖可以有效增強產(chǎn)蛋雞的消化吸收能力，提高蛋雞的生產(chǎn)性能(結(jié)果另報)，推薦使用量150mg/kg·飼料。