白 曉 ，張 誠 ，崔 歡 ，王學(xué)靜 ，高 磊 ，陳立功 ?，董世山 ，劉聚祥 ?

（1河北農(nóng)業(yè)大學(xué)動物醫(yī)學(xué)院/農(nóng)業(yè)部動物疫病病原生物學(xué)華北科學(xué)觀測實(shí)驗(yàn)站，河北保定071001；2.遷安市農(nóng)業(yè)畜牧水產(chǎn)局，河北遷安064400；3.河北省畜牧獸醫(yī)研究所，河北保定071000）

禽流感(Avian influenza，AI)是由A型流感病毒所引起的各種家禽及野生禽類的感染和/或疾病綜合征[1]。禽流感病毒(Avian influenza virus，AIV)屬于正黏病毒科、A型流感病毒屬，是一種分節(jié)段的負(fù)鏈RNA病毒，由8個(gè)基因節(jié)段組成，根據(jù)AIV表面糖蛋白血凝素蛋白 (Hemagglutinin，HA)和神經(jīng)氨酸酶(Neuraminidase，NA)的抗原性分為不同的亞型，迄今為止，已經(jīng)出現(xiàn)了18種HA亞型和11種NA亞型[2、3]。根據(jù)AIV致病性不同可將AI分為高致病性、中致病性和非致病性三類。家禽感染AIV后，有的不表現(xiàn)明顯的癥狀，有的表現(xiàn)為呼吸道感染和產(chǎn)蛋嚴(yán)重下降，嚴(yán)重者甚至引起全身性感染，導(dǎo)致100%死亡[4]。2013年以前，H7N9亞型 AIV曾在國外禽類中偶有檢出[5]。2013年3月中國出現(xiàn)了可感染人并造成較為嚴(yán)重臨床后果的H7N9亞型AIV[6]，截止到2017年3月8日，人感染該病毒確診病例達(dá)1476例，其中1473例來自中國[7]。研究表明，該病毒的 HA基因來源于鴨群中流行的H7亞型流感病毒，NA基因來源于鴨群或者野鳥中的 N9亞型流感病毒，內(nèi)部基因來源于 H9N2病毒[6、8]。然而，我國早期發(fā)現(xiàn)的H7N9亞型AIV對家禽具有低致病性特點(diǎn)[9、10]，感染的禽類表現(xiàn)輕微的癥狀或不表現(xiàn)臨床癥狀，該病毒能在人類毫無察覺和防范的情況下進(jìn)行傳播，僅通過臨床癥狀觀察不能了解家禽的感染情況，因此對非免疫雞群進(jìn)行血清學(xué)調(diào)查至關(guān)重要。本研究對2013年～2016年間河北省部分地區(qū)蛋雞場進(jìn)行了H7N9亞型AI抗體監(jiān)測及分析，以為蛋雞H7N9亞型AI的防控提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 監(jiān)測樣品

于2013年～2016年，在河北省石家莊、保定、滄州3個(gè)地區(qū)71個(gè)蛋雞場隨機(jī)采集血清，共計(jì)1414份。采樣雞場均未免疫H7N9亞型AIV滅活疫苗。

1.2 試劑

禽流感病毒H7N9亞型HI試驗(yàn)用抗原及陽性血清來自哈爾濱維科生物技術(shù)開發(fā)公司。無菌采取健康公雞血并用肝素抗凝，按常規(guī)制備1%紅細(xì)胞懸液，4℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.3 監(jiān)測方法

1.3.1 血凝抑制(Hemagglutination-inhibition,HI)試驗(yàn)

所有血清經(jīng)56℃滅活30min，參照禽流感病毒H7N9亞型HI試驗(yàn)抗原與陰、陽性血清說明書規(guī)定的微量法，進(jìn)行血清中H7N9 AIV抗體檢測。

1.3.2 判定標(biāo)準(zhǔn)

以能完全抑制4個(gè)單位抗原的血清最高稀釋倍數(shù)作為HI滴度，即血清效價(jià)。當(dāng)陽性對照血清的HI效價(jià)與已知效價(jià)誤差不超過1個(gè)滴度，陰性對照血清效價(jià)不高于2 log2時(shí)，試驗(yàn)方可成立。被檢血清HI效價(jià)≤3 log2判為陰性；=4 log2判為可疑（可疑樣品應(yīng)重檢，重檢效價(jià)≥4 log2判為陽性，≤3 log2判為陰性）；≥5 log2判為陽性。

2 結(jié)果與分析

2013年～2016年共檢測71個(gè)蛋雞場，結(jié)果顯示H7N9抗體陽性雞群共23個(gè)，占總檢測雞群的32.39%。其中保定地區(qū)雞群H7N9抗體陽性率最高，為36.36%，滄州地區(qū)雞群H7N9抗體陽性率最低，為28.57%。3個(gè)地區(qū)不同年份，雞群H7N9抗體陽性率也不一致，2014年最高，為42.86%，2015年最低，為 18.75%，詳見表1。

表1 2013-2016年河北省3個(gè)地區(qū)雞群H7N9抗體檢測結(jié)果

2013年～2016年共檢測1414份樣品，H7N9抗體陽性血清共43份，占總檢測樣品的3.04%。監(jiān)測的4年中，保定地區(qū)血清H7N9抗體陽性率最高，為3.42%，石家莊地區(qū)血清H7N9抗體陽性率最低，為2.64%。3個(gè)地區(qū)不同年份，血清H7N9抗體陽性率也不一致，2014年最高，為4.75%，2015年最低為0.94%，詳見表2。

表2 2013-2016年河北省3個(gè)地區(qū)血清H7N9抗體檢測結(jié)果

3 討論

H7N9亞型禽流感1988年首先報(bào)道在美國流行，此后幾年內(nèi)被多次發(fā)現(xiàn)，但都是在部分地區(qū)禽類的小范圍流行。后來在歐洲的野鳥及鵝群中也發(fā)現(xiàn)了該病毒，但均為低致病性病毒[5]，禽類感染后無任何臨床癥狀，僅在血清檢測結(jié)果陽性時(shí)短期出現(xiàn)病毒排泄，也不會引起人的感染。本研究用HI方法從臨床健康非免疫蛋雞群采集的樣品中檢測到了H7N9亞型陽性血清，從血清學(xué)角度證實(shí)了調(diào)查期間河北省部分蛋雞群曾感染過H7N9亞型AIV。本次調(diào)查中曾采集雞群的咽喉拭子和泄殖腔拭子，用熒光定量RT-PCR檢測雙拭子中的H7N9亞型AIV，然而病原學(xué)檢測結(jié)果均為陰性。

病原學(xué)研究證實(shí)，2013年～2015年間我國少數(shù)養(yǎng)禽場存在著低致病性H7N9亞型流感病毒感染[10]。2017年1月以來，關(guān)于從我國家禽或環(huán)境采集樣本中檢測到H7N9亞型高致病性AIV的報(bào)道陸續(xù)增多[11、12、13]，這無疑對我國養(yǎng)禽業(yè)構(gòu)成了巨大的威脅。由于高致病性禽流感具有傳播速度快、波及范圍廣、防控難度大及對人類危害嚴(yán)重等特點(diǎn)，所以應(yīng)對本病采取嚴(yán)格的綜合性防控措施，尤其是指導(dǎo)養(yǎng)殖場戶及時(shí)提高其生物安全水平。鑒于AIV存在變異風(fēng)險(xiǎn)，相關(guān)部門應(yīng)對我國禽類間傳播的所有流感病毒亞型從血清學(xué)、病原學(xué)等方面進(jìn)行持續(xù)監(jiān)控，以保障動物和人類健康。