陳靜 白小英 張偉（通訊作者）

（青島海慈醫(yī)療集團 山東 青島 266000）

珍珠降壓膠囊為具有良好降壓效果的傳統(tǒng)醫(yī)院制劑品種（醫(yī)院制劑注冊編號：魯藥制ZBZ1399），臨床已使用30余年，由珍珠母、鉤藤、槐米、天麻、女貞子、牛膝、夏枯草、黃芩、生地、菊花、桑寄生等十一味中藥組成，具有滋養(yǎng)肝腎，清肝降壓的功效[1]。為提高藥物質(zhì)量，確保臨床用藥療效,增加天麻、槐米的薄層鑒別，并對組方中黃芩苷進行含量測定，以控制藥品內(nèi)在質(zhì)量,成為完善珍珠降壓膠囊的新質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)的依據(jù)。

1.儀器與試藥

1.1 實驗儀器

LC－20AT型高效液相色譜儀、SPD-20A檢測器、SIL-20A自動進樣器，均為日本島津公司產(chǎn)品；Empower600色譜工作站(美國沃特斯公司)；mettlertoledo XS205 Dual R ange型分析天平(瑞士梅特勒公司)；KS－300E超聲波清洗器(寧波科生儀器廠)；ABY-0502-U型超濾除熱型超純水機(重慶艾科浦公司)。紫外光燈，高效液相色譜儀：安捷倫-1100。

1.2 藥品與試劑

對照品和對照藥材均購自中國食品藥品檢定研究院，天麻素對照品，天麻對照藥材，蘆丁對照品，黃芩苷對照品（由中國藥品生物制品檢定所提供，批號為110715-200212）

試劑：水為超純水，其他試劑為色譜純；

硅膠G薄層板，10cm*10cm（青島海洋化工廠生產(chǎn)），乙酸乙酯-甲醇-水（9∶1∶0.2），10%磷鉬酸乙醇溶液，正丁醇，甲醇，

三氯甲烷，乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水（5∶3∶1∶1），5%三氯化鋁乙醇，1供試品（150306），2供試品（150528），3供試品（150714）

2.方法與結(jié)果

2.1 天麻的薄層鑒別

2.1.1供試品溶液制備 取本品內(nèi)容物6g，加水飽和的正丁醇75ml，超聲處理30分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇1ml使溶解，作為供試品溶液。

2.1.2對照品溶液制備 取天麻素對照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對照品溶液。

2.1.3對照藥材溶液制備 取天麻對照藥材0.5g，加水飽和正丁醇30ml，超聲處理30分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇1ml使溶解，作為對照藥材溶液。

2.1.4陰性對照品溶液制備 珍珠降壓膠囊處方中去掉天麻藥材，按工藝制得無天麻藥材的珍珠降壓膠囊，參照供試品制備方法制得天麻陰性對照供試品。

2.1.5檢測條件

溫度：20℃；相對濕度：62%；展距：8cm

硅膠板：硅膠G薄層板，10cm*10cm（青島海洋化工廠生產(chǎn)）

點樣量：對照藥材溶液、對照品溶液、供試品溶液、陰性對照品溶液均點樣5μl

展開劑：乙酸乙酯-甲醇-水（9∶1∶0.2）

顯色：噴10%磷鉬酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點顯色清晰

2.1.6結(jié)果 供試品色譜中，在與對照品、對照藥材色譜相應(yīng)位置上，顯相同顏色的斑點，陰性對照無干擾，說明該方法專屬性符合要求。（圖1）

圖1 天麻的薄層色譜圖

2.2 槐米的薄層鑒別

2.2.1供試品溶液制備 取本品內(nèi)容物2g，加三氯甲烷15ml，超聲處理15分鐘，濾過，濾渣加甲醇15ml，超聲處理20分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇2ml使溶解，作為供試品溶液。

2.2.2對照品溶液制備 取蘆丁對照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對照品溶液。

2.2.3陰性對照品溶液制備 珍珠降壓膠囊處方中去掉槐米藥材，按工藝制得無槐米藥材的珍珠降壓膠囊，參照供試品制備方法制得槐米陰性對照供試品。

2.2.4檢測條件：

溫度：20℃；相對濕度：62%；展距：8cm

硅膠板：硅膠G薄層板，10cm *10cm（青島海洋化工廠生產(chǎn)）

點樣量：供試品溶液、對照品溶液、陰性對照品溶液均點樣 5μl

展開劑：乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水（5∶3∶1∶1）

顯色：噴5%三氯化鋁乙醇溶液，在105℃加熱3分鐘，置紫外光燈（365nm）下檢視。

2.2.5結(jié)果 供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)位置上，顯相同顏色的斑點，陰性對照無干擾，說明該方法專屬性符合要求。（圖2）

圖2 槐米的薄層色譜圖

2.3 黃芩苷的含量測定

2.3.1色譜條件 以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-水-磷酸（47∶53∶0.2）為流動相；檢驗波長為280nm。理論板數(shù)按黃芩苷峰計算應(yīng)不低于3000。（13∶87）為流動相；檢測波長為327nm。理論板數(shù)按綠原酸峰計算應(yīng)不低于1000。

2.3.2供試品溶液的制備 取本品適量，研細(xì)，取約0.5g，精密稱定，精密加入甲醇50ml，稱定重量，超聲處理30分鐘，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.3.3對照品溶液的制備 取黃芩苷對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1ml含60μg的溶液，即得。

2.3.4陰性供試品溶液 按珍珠降壓膠囊的處方和制法，制備不含黃芩的珍珠降壓膠囊，作為黃芩陰性樣品，取陰性樣品0.5g，精密稱定，按供試品溶液制備項下方法制備操作，即得。

2.3.5加樣回收試驗 精密稱取已測知含量的樣品6份,每份約0.5g,分別精密加入濃度為0.05mg/ml的對照品溶液，按供試品溶液制備項下方法處理，按上述色譜條件分析測定含量，計算回收率，平均值為99.02%，RSD=1.40%（n=6）。(表1)

表1 珍珠降壓膠囊加樣回收試驗

2.3.6線性關(guān)系考察 配制濃度為1.0 mg/ml的對照品溶液，取適量，加50%甲醇依次稀釋制成濃度為0.05、0.25、0.50、0.75、1.0 mg/ml的系列標(biāo)準(zhǔn)溶液，分別精密吸取10μl注入液相色譜儀，進樣測定，以對照品濃度（mg/ml）為橫坐標(biāo)，以對應(yīng)的峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程為：Y=20.164X+20.333，R2=0.9997。結(jié)果表明，黃芩苷在0.05～1.0mg/ml范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。見圖3。

圖3

3.討論

3.1 薄層鑒別采用對照藥材及對照品進行鑒別,專屬性強,斑點分離效果好,操作簡便[2]。本實驗按照中國藥典2015年版一部及其他有關(guān)文獻，增加珍珠降壓膠囊中天麻及槐米的薄層鑒別，在與對照品、對照藥材色譜相應(yīng)位置上，顯相同顏色的斑點，陰性對照無干擾，說明該方法具有專屬性。因此，珍珠降壓膠囊在原來以黃芩苷為組方質(zhì)量鑒定的基礎(chǔ)上，增加組方中天麻素、蘆丁的成分鑒定，提高了對該制劑的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。

3.2 采用高效液相對組方中的黃芩苷進行含量測定。以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-水-磷酸（47∶53∶0.2）為流動相；檢驗波長280nm，結(jié)果黃芩苷在0.05～1.0mg/ml范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。

[1]王鸝,鞠文翰.珍珠降壓膠囊治療高血壓病臨床研究[J].山東中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報,1999(4):189-191.

[2]王漢章,吳達成.腫節(jié)風(fēng)顯微及薄層鑒別[J].中藥材,1999(12):619-621.

[3]張妍,董琳,雍婧姣,等.黃芪藥材主要成分的含量測定方法及高效液相指紋圖譜研究[J].時珍國醫(yī)國藥,2016(11):2610-2613.