陳萬清,時云朵,權可艷,胡 波，梁先進,葉小斌(.四川省水產(chǎn)學校，成都 郫都 670；.四川省綿竹市水精靈漁業(yè)服務中心，四川 綿竹 6800；.四川省自貢市大安區(qū)農(nóng)業(yè)局，四川 自貢 6400)

1 草魚出血病的癥狀

草魚出血病癥狀復雜，可在體內(nèi)外出現(xiàn)一系列癥狀群，但最基本的癥狀為有關器官或組織的充血和出血。實際上，上述癥狀群大多不同時出現(xiàn)，按其癥狀和病理變化的差異，可分為3個類型，可同時或交替出現(xiàn)。

1.1 紅肌肉型

主要表現(xiàn)為肌肉明顯出血，呈鮮紅色，鰓因失血而蒼白。多見于5～10cm的小草魚種。

1.2 紅鰭紅鰓蓋型

主要表現(xiàn)為鰭基、鰓蓋嚴重充血，頭頂、眼眶、口腔等處有明顯出血點，多見于10cm以上的大草魚種。

1.3 腸炎型

主要表現(xiàn)為腸道嚴重充血，全部或局部呈鮮紅色，有別于細菌性腸炎的紫紅色，內(nèi)臟點狀出血，體表亦可見出血點。各種規(guī)格的草魚種均可見到。

2 流行情況

草魚出血病流行于每年6～9月，水溫升高至25℃以上即開始流行。主要為害當年5～20cm的草魚種，死亡率一般為30%～50%，高的可達60%～80%，危害極為嚴重，青魚種與麥穗魚亦可感染。

3 草魚出血病的診斷

草魚出血病的診斷可以采取為常規(guī)診斷和實驗室診斷2種方法。

3.1 常規(guī)診斷

常規(guī)診斷一是對發(fā)病魚塘進行現(xiàn)場調(diào)查(包括調(diào)查發(fā)病魚塘的環(huán)境、了解池塘水質狀況、調(diào)查飼養(yǎng)管理情況、觀察發(fā)病魚在魚池狀態(tài)等)；二是對病魚體內(nèi)外進行肉眼觀察；三是對發(fā)病魚進行鏡檢(主要目的是檢查魚體內(nèi)外寄生蟲)；四是根據(jù)危害魚的種類及規(guī)格、發(fā)病時的水溫、發(fā)病率和死亡率等流行情況來進行綜合判定。

3.2 實驗室診斷

草魚出血病實驗室診斷主要采用三重PCR技術(即針對草魚呼腸孤病毒各類型毒株的保守區(qū)域設計的3對引物，同時對樣品抽提的病毒RNA反轉錄為cDNA，并對該cDNA進行體外聚合酶鏈式反應，產(chǎn)物經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳檢測)，此技術僅需普通PCR儀和電泳儀即可檢測，方便、準確、快速，且具有良好的敏感性、特異性和穩(wěn)定性。德陽站送檢樣品經(jīng)三重PCR檢驗結果呈陽性，結果如圖1所示；將瓊脂糖凝膠電泳上的目的片段進行膠回收、測序獲得DNA序列，在GeneBank數(shù)據(jù)庫中進行Blast比對，比對結果顯示德陽站送檢樣品的基因序列與草魚呼腸孤病毒-HZ08片段6(Grass carp reovirus strain GCRV‐HZ08 segment 6)的基因序列相似度為100%，結果如圖2所示，表明德陽站送檢樣品是基因Ⅱ型草魚呼腸孤病毒感染。

圖1 德陽綜合試驗站送檢樣品瓊脂糖凝膠電泳

圖2 測序比對結果

4 草魚出血病的綜合防治技術

4.1 預防

4.1.1 魚種放養(yǎng)前，采用生石灰徹底清塘 池塘水深1m時，生石灰用量為125～150kg/667m2；排干池水(塘底留水10cm)時，生石灰用量為60～80kg/667m2。清塘后，水溫15～20℃時，7～10d放養(yǎng)魚種。

4.1.2 免疫預防 魚種放養(yǎng)前，對規(guī)格50～100g草魚種人工注射草魚出血病滅活疫苗?？紤]到草魚出血病常常與草魚“三病”(赤皮、腸炎、爛鰓病)一起迸發(fā)的特點，可與草魚出血病疫苗同時注射草魚三病三聯(lián)疫苗。為防止注射導致的細菌性感染，可在注射液中添加抗生素。近年，國家大宗淡水魚類產(chǎn)業(yè)技術體系德陽綜合試驗站將該體系病防崗位科學家團隊研發(fā)疫苗在生產(chǎn)中進行示范，疫苗注射劑量及配合使用情況主要有以下2種方式：一是出血病疫苗單用，每瓶(1000尾使用量)，用200mL注射用水稀釋，加0.5g頭孢噻呋，每尾肌肉注射0.2mL；二是出血病疫苗和三聯(lián)苗和用，每瓶(1000尾)出血病疫苗用三聯(lián)苗(200mL，1000尾)稀釋，加0.5g頭孢噻呋，每尾肌肉注射0.2mL。

4.1.3 適時開動增氧機 晴天的中午開動增氧機，減少底層氧債，改善池水溶氧狀況。

4.1.4 使用微生態(tài)制劑 定期向池塘施用微生態(tài)制劑，改良池塘底質和水質。水產(chǎn)上常用的微生態(tài)制劑主要有光合細菌、芽孢桿菌、硝化細菌、反硝化細菌、EM菌等。主要作用為降低水體氨氮、亞硝酸鹽，抑制病原菌繁殖等。

4.1.5 定期補充碳源 利用“生物絮團”生態(tài)養(yǎng)殖技術原理，定期向池塘添加糖蜜、葡萄糖等含碳物質。“生物絮團”生態(tài)養(yǎng)殖技術是在養(yǎng)殖水體零換水的基礎上，當水體氨氮含量高時，通為人為添加碳源，調(diào)節(jié)水體碳氮比，促進水體異養(yǎng)菌大量繁殖，利用細菌同化無機氮，將水體的的氨氮等有害氮源轉化為菌體蛋白，并通過細菌將水體中的藻類、原生動物、輪蟲及有機質絮凝成顆粒物質，形成“生物絮團”，最終被濾食性和雜食性魚類利用，起到調(diào)控水質、促進營養(yǎng)物質循環(huán)再利用的目的。在池塘零換水的基礎上，可每7～10d向池塘施入葡萄糖5kg。

4.1.6 搭建生物浮床，控制池塘總氮總磷 可以在精養(yǎng)池塘按不超過池塘總面積10%的比例搭建生物浮床。為防止草魚對浮床生物根部的攝食，可在浮床底部加一層攔網(wǎng)。浮床植物目前采用較多的是水雍菜，在5月中旬即可將育好的水雍菜苗移植到浮床上。

4.1.7 藥物預防 “血?！笔菄掖笞诘~類產(chǎn)業(yè)技術體系漁藥研發(fā)與臨床項目支持研發(fā)的應用試驗與示范產(chǎn)品，主要成分為天然綠茶粗提物，能滲透進魚體細胞，有效阻斷草魚出血病病毒入侵魚體，具有抑制病毒復制繁殖的能力。草魚出血病發(fā)病高峰期，按每kg飼料添加“血?！?00mg，拌料投喂5～6d。

4.2 治療

當養(yǎng)殖草魚發(fā)生病毒性出血病后，要及時采取措施治療。主要措施有：

4.2.1 水體消毒 一是發(fā)病草魚池，用聚維酮碘(含聚維酮碘10%)全池潑灑，用量為45～75mg/m3，隔日1次，連用2次。用水稀釋300～500倍后，全池遍灑；二是發(fā)病草魚池，用濃度20%的戊二醛，按水體濃度40mg/m3，隔日1次，連用2次，用水稀釋300～500倍后，全池遍灑。

4.2.2 內(nèi)服藥餌 發(fā)病草魚，飼料用“血停”1～1.5g/kg拌餌投喂，連用5～6d。

5 草魚出血病防、治實例

5.1 免疫預防

自2010年開始，國家大宗淡水魚類產(chǎn)業(yè)技術體系先后在廣元市白龍湖庫區(qū)、中江縣繼光水庫、綿竹市西南鎮(zhèn)、羅江縣新盛鎮(zhèn)等地為網(wǎng)箱和池塘養(yǎng)殖的草魚種進行草魚出血病免疫示范應用。部分免疫應用情況及效果見表1、表2。

表1 2012年中江繼光水庫草魚出血病免疫示范效果統(tǒng)計表

表2 2017年草魚出血病免疫示范效果統(tǒng)計表

5.2 “血停”應用示范

綿竹養(yǎng)殖戶張仕軍池塘發(fā)生草魚病毒性出血病，發(fā)病池塘面積6*667m2，養(yǎng)殖草魚4000尾、鯉2500尾、鯽6000尾、鰱700尾、鳙400尾。從8月10日開始使用“血?！?，按每袋“血?！?500g一袋拌100kg飼料)，每天喂2次藥餌，經(jīng)過5d的藥餌治療，草魚死亡情況由開始的每天35尾降到0尾。死亡率得到有效控制。

綿竹遵道鎮(zhèn)聯(lián)合水庫文本武發(fā)病池塘面積37*667m2，養(yǎng)殖草魚20000尾、鯉5000尾、鯽30000尾、鰱4000尾、鳙2000尾。該池于8月2日發(fā)生草魚病毒性出血病，于8月15日開始使用“血?！?，按每袋“血停”(500g1袋拌100kg飼料)，每天喂2次藥餌。經(jīng)過5d的藥餌治療，草魚死亡情況由開始的每天320尾降到0尾。死亡率得到有效控制。