蔣 奕，胡 騰，劉 冰，榮秀明

（四川綿陽四0四醫(yī)院感染科，四川 綿陽 621000）

艾滋病,即獲得性免疫缺陷綜合征（acquired Immune Deficiency Syndrome,AIDS）是一種是由人類免疫缺陷病毒（Human Immunodeficiency Virus,HIV）感染引起的危害極大的傳染病，嚴(yán)重威脅人類公共衛(wèi)生與健康，影響到經(jīng)濟(jì)發(fā)展和社會(huì)穩(wěn)定[1-2]。HIV主要攻擊人類免疫系統(tǒng)的CD4+T淋巴細(xì)胞，影響CD4+T細(xì)胞數(shù)量和功能，最終發(fā)生一系列免疫缺陷綜合征[3]。高效抗逆轉(zhuǎn)錄病毒治療（Highly active antiretroviral therapy,HAART）能夠最大限度地降低HIV病毒載量，保護(hù)和重建部分免疫功能，降低HIV相關(guān)疾病的發(fā)生率和死亡率[4]。IL-7屬于促紅細(xì)胞生成素家族Ⅰ型短鏈細(xì)胞因子，在T細(xì)胞穩(wěn)態(tài)的維持中發(fā)揮著關(guān)鍵的作用，IL-7與其受體CD127結(jié)合后促進(jìn)T細(xì)胞存活的基因高表達(dá)，并增強(qiáng)抗凋亡分子，提高T細(xì)胞的存活，刺激CD4+T細(xì)胞數(shù)量增加[5]。但HAART前后艾滋病患者IL-7水平與CD4+T細(xì)胞計(jì)數(shù)及HIV-RNA的關(guān)系尚不明確。本研究監(jiān)測HAART前后艾滋病患者血清IL-7水平、CD4+T細(xì)胞計(jì)數(shù)及HIV-RNA，并探討它們的相關(guān)性。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選擇2014年1月～2016年12月間接受HAART的艾滋病患者73例，其中男54例，女19例，年齡18～45歲，平均年齡（30.6±9.2）歲。按傳播方式分別為性傳播64例，血液傳播7例，其他2例；HAART方式分別為2NRTIs+NNRTI方式59例，2NRTIs+PI方式14例，見表1。所有患者均經(jīng)四川省綿陽市疾病預(yù)防控制中心蛋白印跡試驗(yàn)（Western Blot，WB）確認(rèn)HIV-1抗體陽性，診斷符合2012年發(fā)布的衛(wèi)生部《艾滋病和艾滋病病毒感染診斷標(biāo)準(zhǔn)》[6]，并依照2011年發(fā)布的《艾滋病診療指南》，采用HAART，推薦方案采用2種NRTIs+1種NNRTIs或者2種NRTIs+1種加強(qiáng)型PIs（含RTV）[7]。入組患者自愿簽署知情同意書。排除高血壓、心臟病、糖尿病等代謝性疾病及嚴(yán)重精神神經(jīng)疾病患者。

表1 患者一般情況統(tǒng)計(jì)Table1 General statistics of patients

1.2 實(shí)驗(yàn)設(shè)備與試劑

1.2.1 實(shí)驗(yàn)設(shè)備 美國BioTek ELx800通用酶標(biāo)儀，德國羅氏公司LightCycler96定量PCR儀，CD4+T淋巴細(xì)胞絕對(duì)計(jì)數(shù)采用美國BD Facscalibun/FACsCoum流式細(xì)胞儀測定。病毒載量的測定使用荷蘭生物梅里埃公司EasyQ病毒載量測定儀。

1.2.2 試劑 人類IL-7檢測試劑盒（美國BD公司），人類免疫缺陷病毒（HIV-1）核酸擴(kuò)增（PCR）熒光定量檢測試劑盒（深圳匹基生物工程有限公司），人類CD4抗體（美國BD公司）。

1.3 方法 收集HAART前和治療3個(gè)月后患者血液標(biāo)本，檢測IL-7水平、CD4+T細(xì)胞計(jì)數(shù)和HIV-RNA定量。

1.3.1 血清IL-7水平檢測于HAART前和治療3個(gè)月后收集艾滋病患者血液標(biāo)本，分離血清后保存于-80℃冰箱待測，通過ELISA法檢測IL-7水平，操作步驟按試劑盒說明書進(jìn)行。

1.3.2 CD4+T細(xì)胞計(jì)數(shù)于HAART前和治療3個(gè)月后收集艾滋病患者血液標(biāo)本，取100μL血液，加入10μL CD4抗體，混勻后避光孵育20 min，利用流式細(xì)胞儀檢測CD4+T細(xì)胞計(jì)數(shù)。

1.3.3 HIV-RNA定量 于HAART前和治療3個(gè)月后收集艾滋病患者血液標(biāo)本，利用人類免疫缺陷病毒（HIV-1）核酸擴(kuò)增（PCR）熒光定量檢測試劑盒分析HIV-RNA定量，根據(jù)熒光信號(hào)的變化來檢測 HIV-RNA定量。該方法定量檢測范圍為5.0×102～1.0×108拷貝/ml。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 本研究采用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)軟件，計(jì)量資料采用表示，治療前后的結(jié)果比較采用配對(duì)t檢驗(yàn)分析，兩組之間的相關(guān)系數(shù)采用r2線性表示，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 艾滋病患者HAART前后IL-7水平、CD4+T細(xì)胞計(jì)數(shù)和HIV-RNA定量 經(jīng)過HAART后艾滋病患者IL-7水平降低、CD4+T細(xì)胞計(jì)數(shù)增高，HIV-RNA定量減少（P＜0.001），見表2和圖1。

表2 HAART前后IL-7水平、CD4+T細(xì)胞計(jì)數(shù)和HIV-RNA定量情況Table2 The levels of IL-7,CD4+T and HIV-RNAwere measured before and after HAART

表2 HAART前后IL-7水平、CD4+T細(xì)胞計(jì)數(shù)和HIV-RNA定量情況Table2 The levels of IL-7,CD4+T and HIV-RNAwere measured before and after HAART

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圖1 HAART前后IL-7水平、CD4+T細(xì)胞計(jì)數(shù)和HIV-RNA定量比較Figure1 IL-7 levels before and after HAART,CD4+T cell count,and HIV-RNAquantitative comparisons

2.2 艾滋病患者HAART前后IL-7改變量與CD4+T細(xì)胞數(shù)量及HIV-RNA定量改變量的相關(guān)性 HAART前后的IL-7改變量與CD4+T細(xì)胞數(shù)量改變量成負(fù)相關(guān)（r2=0.8050）；與HIVRNA定量的對(duì)數(shù)值改變量無相關(guān)性（r2=0.0150），見圖2。

3 討論

艾滋病的病原體為獲得性免疫缺陷病毒（HIV），HAART的出現(xiàn)和廣泛推廣應(yīng)用是艾滋病發(fā)展史上最重大的事件，它能夠最大程度的抑制患者體內(nèi)的 HIV病毒水平，從而緩解HIV的臨床進(jìn)程，使患者的免疫功能得到重建，改善預(yù)后并提高生存質(zhì)量[8]。HIV-RNA主要影響以CD4+T細(xì)胞為主的T細(xì)胞及機(jī)體免疫系統(tǒng)功能，HIV血清陽性患者與健康對(duì)照試驗(yàn)以及單核-巨噬細(xì)胞系統(tǒng)體外細(xì)胞試驗(yàn)研究證明,HIV感染可導(dǎo)致細(xì)胞因子的產(chǎn)生發(fā)生紊亂[9]，反之，細(xì)胞因子也可對(duì)HIV的表達(dá)發(fā)揮調(diào)節(jié)作用。其中IL-7在維持T細(xì)胞的穩(wěn)態(tài)這方面發(fā)揮著關(guān)鍵的作用。IL-7屬于EPO家族細(xì)胞因子，可由基質(zhì)細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞等產(chǎn)生[10]，能提高成熟T細(xì)胞的生存能力[11]，動(dòng)員造血干細(xì)胞入血補(bǔ)充T細(xì)胞。國外有研究報(bào)道HIV感染者血漿IL-7水平較正常對(duì)照升高，與病毒載量呈正相關(guān)，與CD4+T細(xì)胞的數(shù)量呈負(fù)相關(guān)，同時(shí)發(fā)現(xiàn)IL-7可使CD4+T細(xì)胞上CXCR4表達(dá)水平上調(diào)，這與SI表型的形成有一定相關(guān)性，并影響疾病進(jìn)展[12]。

我們的研究發(fā)現(xiàn)HAART后艾滋病患者IL-7水平降低、CD4+T細(xì)胞計(jì)數(shù)增高，HIV-RNA定量減少（P＜0.001），這與已有的報(bào)道結(jié)果保持一致[13]；HAART前后的IL-7改變量與CD4+T細(xì)胞數(shù)量改變量成負(fù)相關(guān)（r2=0.8050）；與HIV-RNA定量的對(duì)數(shù)值改變量無相關(guān)性（r2=0.0150）。HAART后，控制大多數(shù)艾滋病患者HIV病毒復(fù)制，使得血HIV-RNA定量下降到檢出下限以下（＜5.0×102拷貝/ml），病毒量的減少使得T細(xì)胞穩(wěn)定性增加。本研究發(fā)現(xiàn)HAART后IL-7改變量與CD4+T細(xì)胞數(shù)量改變量成負(fù)相關(guān)，IL-7降低后CD4+T細(xì)胞數(shù)量增加，提示IL-7可能在艾滋病患者HAART后免疫重建中發(fā)揮著重要的作用。但I(xiàn)L-7與HIV-RNA并無相關(guān)性，其原因在于我們對(duì)于HIV-RNA的檢出下限為5.0×102拷貝/ml，大部分患者經(jīng)3個(gè)月的HAART后HIV-RNA降低到檢出下限以下，故未發(fā)現(xiàn)IL-7與HIV-RNA存在相關(guān)性。

HAART是目前艾滋病治療過程中最有效抑制HIV-RNA定量、減少并發(fā)癥、延長生命、改善生活質(zhì)量的治療手段。事實(shí)證明接受長期HAART的艾滋病患者淋巴細(xì)胞亞群數(shù)量功能和免疫功能可以得到一定程度的恢復(fù)。IL-7在固有免疫和獲得性免疫之間起著重要的橋梁作用，HAART前后的IL-7改變量與CD4+T細(xì)胞數(shù)量改變量成負(fù)相關(guān)，其機(jī)制可能是IL-7降低后導(dǎo)致CD4+T細(xì)胞數(shù)量增加，這提示IL-7在 HAART后免疫重建過程中發(fā)揮著重要的作用。在HARRT過程中動(dòng)態(tài)監(jiān)測IL-7水平和CD4+T細(xì)胞計(jì)數(shù)及病毒載量的相關(guān)性能夠更好地反映HIV感染者免疫狀態(tài)，為預(yù)防機(jī)會(huì)性感染及指導(dǎo)抗病毒治療提供依據(jù)

圖2 HAART前后IL-7改變量與CD4+T細(xì)胞數(shù)量及HIV-RNA定量改變量的相關(guān)性分析Figure2 Correlation analysis between IL-7 modified variables and CD4+T cell number and HIV-RNAquantitative changes before and after HAART

[1] Piot P,Quinn TC.Response to the AIDS pandemic--a global health model[J].N Engl J Med,2013,368(23):2210-2218.

[2] Piot P,Abdool Karim SS,Hecht R,et al.Defeating AIDS--advancing global health[J].Lancet,2015,386(9989):171-218.

[3] Turner BJ,Markson L,Taroni F.Estimation of survival after AIDS diagnosis:CD4 T lymphocyte count versus clinical severity[J].J Clin Epidemiol,1996,49(1):59-65.

[4] KillenJ,HarringtonM,FauciAS.MSM,AIDSresearch activism, and HAART[J]. Lancet, 2012,380(9839):314-316.

[5] Coiras M,Bermejo M,Descours B,et al.IL-7 Induces SAMHD1 Phosphorylation in CD4+T Lymphocytes,Improving Early Steps of HIV-1 Life Cycle[J].Cell Rep,2016,14(9):2100-2107.

[6] 邵一鳴,康來儀,汪寧,等.艾滋病和艾滋病病毒感染診斷標(biāo)準(zhǔn)[J].中國艾滋病性病,2012(4):272-274.

[7] 中華醫(yī)學(xué)會(huì)感染病學(xué)分會(huì)艾滋病學(xué)組.艾滋病診療指南(2011版)[J].中華臨床感染病雜志,2011,4(6):321-330.

[8] Dore GJ,Cooper DA.HAART's first decade:success brings further challenges[J]. Lancet, 2006,368(9534):427-428.

[9] MA Bornemann,J Verhoef,PK Peterson.Macrophages,cytokines,and HIV[J].Journal of Laboratory&Clinical Medicine,1997,129(1):10-16.

[10]Jiang Q,Li WQ,Aiello FB,et al.Cell biology of IL-7,a key lymphotrophin[J].Cytokine Growth Factor Rev,2005,16(4-5):513-533.

[11]Saini M,Pearson C,Seddon B.Regulation of T celldendritic cell interactions by IL-7 governs T-cell activation and homeostasis[J].Blood,2009,113(23):5793-5800.

[12]Q Wang,H Shang,YA Wang,et al.Association of IL-7 with disease progression in Chinese HIV-1 seropositive individuals[J].中華醫(yī)學(xué)雜志(英文版),2006,119(4):288-293.

[13]Benito JM,López M,Lozano S,et al.Down-regulation of interleukin-7 receptor(CD127)in HIV infection is associated with T cell activation and is a main factor influencing restoration of CD4(+)cells after antiretroviral therapy[J].J Infect Dis,2008,198(10):1466-1473.