郭東

（南充市第四人民醫(yī)院檢驗科 四川 南充 637000）

隨著越來越多的抗菌藥物在臨床中應(yīng)用，細(xì)菌耐藥性問題日益加劇。在臨床應(yīng)用中如何快速準(zhǔn)確地鑒別細(xì)菌的耐藥表型，是抗生素合理使用增強治療效果的重要前提[1]。微生物分析儀法與常規(guī)紙片擴散法是臨床較常應(yīng)用的細(xì)菌耐藥表型檢測方法，本研究對兩種檢測方法的細(xì)菌藥敏鑒定結(jié)果進行對比分析，為評價其臨床應(yīng)用提供依據(jù)。

1.資料與方法

1.1 一般資料

選取我院2015年6月至2016年6月培養(yǎng)分離的金黃色葡萄球菌、大腸桿菌和肺炎克雷伯桿菌各500株為檢測對象。對所選細(xì)菌分別使用微生物分析儀法和常規(guī)紙片擴散法進行藥敏性檢驗。微生物分析儀法所用儀器為法國梅里埃VITEK 2 Compact全自動微生物分析儀季配套檢測板；藥敏紙片、M-H培養(yǎng)基、血培養(yǎng)基、瓊脂培養(yǎng)基等紙片擴散法所需材料均采購自武漢普諾賽生命科技有限公司。

1.2 治療方法

1.2.1 常規(guī)紙片擴散法 超廣譜β-內(nèi)酰胺酶檢測確證試驗：配置大腸桿菌與肺炎克雷伯桿菌懸濁液，涂置于M-H培養(yǎng)基上按照相應(yīng)操作規(guī)范進行試驗。若抑菌圈直徑的增加值大于6mm為陽性，小于6mm為陰性。

紅霉素耐藥克林霉素誘導(dǎo)試驗：配制相應(yīng)濃度的金黃色葡萄球菌懸濁液，均勻涂于M-H培養(yǎng)基上。將克林霉素紙片和紅霉素紙片分別貼在M-H培養(yǎng)基上，兩藥邊緣相距12mm。將培養(yǎng)基在35℃條件下孵育24h。觀察兩張藥敏紙片，在靠近紅霉素紙片的一側(cè)的克林霉素的抑菌環(huán)如果出現(xiàn)截平現(xiàn)象，整個抑菌環(huán)形狀如字母D為陽性。若無D形抑菌環(huán)則為陰性。

耐甲氧西林金黃色葡萄球菌檢測試驗：制備金黃色葡萄球菌懸濁液，調(diào)至0.5麥?zhǔn)媳葷峁?，均勻涂于制備好的M-H培養(yǎng)基上。將頭孢西丁紙片貼于M-H培養(yǎng)基上，35℃孵育24小時。紙片中抑菌環(huán)直徑≥18mm則為陰性，若＜18mm則為陽性。

1.2.2 微生物分析儀法

分別取大腸桿菌及肺炎克雷伯桿菌配制成0.5麥?zhǔn)蠁挝粷舛鹊膽覞嵋?，使用Vitek-GN13檢測板進行檢測。配制相同濃度的金黃色葡萄球菌，用Vitek-GN67檢測板進行檢測。

1.3 評價標(biāo)準(zhǔn)

觀測記錄兩種檢測方法的檢測結(jié)果，對比兩種檢測方法的陽性率。

1.4 統(tǒng)計學(xué)分析

對兩種檢測方法所得到的數(shù)據(jù)采用統(tǒng)計學(xué)軟件SPSS 18.0進行分析，計數(shù)資料用百分比（%）表示，采用χ2檢驗，P＜0.05為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2.結(jié)果

2.1 兩種檢測方法超廣譜β-內(nèi)酰胺酶檢測陽性率比較

微生物分析儀法的檢測大腸桿菌和肺炎克雷伯桿菌的陽性率分別為69.8%和73.2%，高于常規(guī)紙片擴散法的69.2%和72.2%，但兩組數(shù)據(jù)對比無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。見表1。

表1 兩種檢測方法超廣譜β-內(nèi)酰胺酶檢測陽性率比較

2.2 兩種檢測方法克林霉素誘導(dǎo)試驗陽性率比較

兩種檢測方法分別進行克林霉素誘導(dǎo)實驗，微生物分析儀法的檢測陽性率為64.6%，高于常規(guī)紙片擴散法的62.2%，但兩組數(shù)據(jù)對比無顯著差異（P＞0.05）。見表2。

表2 兩種檢測方法克林霉素誘導(dǎo)試驗陽性率比較

2.3 兩種檢測方法耐甲氧西林金黃色葡萄球菌試驗陽性率比較

耐甲氧西林金黃色葡萄球菌試驗中微生物分析儀法的檢測陽性率為48.8%，高于常規(guī)紙片擴散法的47.8%，兩組結(jié)果無差異（P＞0.05）。見表3。

表3 兩種檢測方法耐甲氧西林金黃色葡萄球菌試驗陽性率比較

3.討論

微生物分析儀法和常規(guī)紙片擴散法是臨床上常用的兩種細(xì)菌耐藥表型檢測方法。微生物分析儀法是使用分析儀器與數(shù)據(jù)分析軟件的共同作用，依據(jù)特定的生物反應(yīng)現(xiàn)象對細(xì)菌鑒定與藥敏的檢測。有研究表明[2-3]，使用全自動微生物分析儀對細(xì)菌耐藥表型進行檢測能夠快速準(zhǔn)確地得到結(jié)果，對部分細(xì)菌檢測陽性率達到90%以上。紙片擴散法是將含有定量抗菌藥物的濾濾紙貼于已接種待測試菌的瓊脂培養(yǎng)皿表面，隨著紙片中的抗菌藥物在瓊脂培養(yǎng)基中的擴散距離的增加藥物的濃度呈對數(shù)減少，從而在紙片的周圍形成一種濃度梯度在紙片的周圍形成一定的藥物濃度梯度。在藥物擴散的同時，紙片周圍抑菌濃度范圍內(nèi)的測試菌不能生長，而抑菌濃度范圍外的菌株則繼續(xù)生長，從而在紙片的周圍形成透明的抑菌圈。不同抗菌藥物抑菌圈的直徑因受藥物在瓊脂中的擴散速率的影響而可能不同，抑菌圈的大小可反映測試菌對測定藥物的敏感程度。

研究表明，微生物分析儀法的超廣譜β-內(nèi)酰胺酶試驗、克林霉素誘導(dǎo)耐藥試驗及耐甲氧西林金黃色葡萄球菌試驗檢測的陽性率與常規(guī)紙片擴散法無顯著差異（P＞0.05）。表明在細(xì)菌耐藥表型檢測中兩種方法的準(zhǔn)確性無差別，但微生物分析儀法檢測速度快，具有方便快捷的優(yōu)勢。

綜上所述，在臨床應(yīng)用中微生物分析儀法與常規(guī)紙片擴散法對細(xì)菌耐藥表型檢測均能得到準(zhǔn)確有效的檢測結(jié)果，但微生物分析儀法可以方便快捷的得到檢測結(jié)果，值得在臨床實踐中推廣應(yīng)用。

[1]袁飛.細(xì)菌耐藥表型在醫(yī)院感染監(jiān)測中的預(yù)警應(yīng)用[J].山西醫(yī)藥雜志，2014，43(1)：105-107.

[2]孫燕萍.VITEK2Compact全自動微生物分析系統(tǒng)的應(yīng)用及鑒定結(jié)果分析[J].現(xiàn)代預(yù)防醫(yī)學(xué)，2010，37(20)：3890-3893.

[3]王穎，陳芳芳，黃梅.VITEK2Compact專家系統(tǒng)對腸桿菌科碳青霉烯酶耐藥表型分析的問題探討[J].現(xiàn)代檢驗醫(yī)學(xué)雜志，2017，32(4)：101-103.