齊紅雙，楊 瀚，劉 坤

(河南省南陽南石醫(yī)院檢驗(yàn)科，河南 南陽 473000)

醫(yī)務(wù)人員手部微生物污染是造成嚴(yán)重的院內(nèi)感染、多重耐藥菌傳播的重要危險(xiǎn)因素[1，2]。醫(yī)務(wù)人員保持手部衛(wèi)生是預(yù)防醫(yī)院院內(nèi)感染的最為簡單、經(jīng)濟(jì)實(shí)惠的途徑，但如何對醫(yī)務(wù)人員的手部衛(wèi)生進(jìn)行評估，尤其是對手部微生物評估仍然面臨很多問題。此前，大部分醫(yī)院多采用細(xì)菌培養(yǎng)法進(jìn)行檢測，但該方法耗時(shí)較長、結(jié)果存在延遲性以及操作復(fù)雜等局限性而限制了其推廣使用[3]。近年來，關(guān)于ATP生物熒光法檢測物體表面、醫(yī)療器械和醫(yī)務(wù)人員手部污染菌量的研究顯著增多[4，5]。該方法采用高靈敏度光度計(jì)對ATP、蟲熒光素和熒光素酶反應(yīng)發(fā)出的光進(jìn)行檢測，根據(jù)光的強(qiáng)度評估微生物的量，具有速度快、靈敏度高、結(jié)果可信等優(yōu)點(diǎn)。但關(guān)于該方法檢測結(jié)果的評估尚未形成統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)，鑒于醫(yī)務(wù)人員手部衛(wèi)生質(zhì)量監(jiān)測頻度及醫(yī)院感染管理中的意義。本研究通過在我院應(yīng)用ATP熒光微生物檢驗(yàn)技術(shù)檢驗(yàn)醫(yī)務(wù)人員手部表面微生物，為其推廣應(yīng)用奠定基礎(chǔ)。

1 資料與方法

1.1一般資料2014年3月至2016年11月選擇我院54名醫(yī)務(wù)人員，包括27名護(hù)士、13名醫(yī)生、14名醫(yī)技人員，采用ATP熒光微生物檢驗(yàn)技術(shù)對其手部表面微生物進(jìn)行檢測。

1.2試劑與材料BiotechTMBT-112D型生物熒光快速檢測儀和BioThema 266-112型ATP生物熒光檢測試劑盒，購自瑞典BioThema公司，檢測精度為10-18mol ATP。ATP提取劑、熒光素酶、裂解液、ATP標(biāo)準(zhǔn)品(液態(tài)100 nmol/L)，均購自北京陸橋技術(shù)有限責(zé)任公司。金黃色葡萄球菌株(ATCC 6538)由中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心。

1.3方法

1.3.1菌懸液制備 挑取單個(gè)金黃色葡萄球菌菌落接種于普通營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基斜面，置于37 ℃恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)24 h，再以生理鹽水洗滌新鮮斜面培養(yǎng)物制成細(xì)菌懸液，采用活菌計(jì)數(shù)法進(jìn)行計(jì)數(shù)。

1.3.2ATP生物熒光檢測法 在醫(yī)務(wù)人員手指屈側(cè)，用UltansnapTMATP采樣器以往返涂擦的方式進(jìn)行采樣，之后將采樣棉拭子重新插回取樣器，將取樣器上方的塑料閥門折斷，向其中反應(yīng)液并進(jìn)行震蕩，充分反應(yīng)后置入ATP生物熒光檢測儀中進(jìn)行分析，15 s后得出反應(yīng)結(jié)果并記錄，數(shù)據(jù)記錄為相對光單位值(RLU)。

1.3.3醫(yī)務(wù)人員手部微生物定量檢測 參照GB15982-2012《醫(yī)院消毒衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)》規(guī)定的方法進(jìn)行操作，用采樣棉拭沾取采樣液從指根至指尖往返涂抹，再將該棉拭子在無菌條件下剪斷放入10 ml采樣液中，充分震蕩洗脫后取適量洗脫液于無菌平皿內(nèi)進(jìn)行傾注培養(yǎng)，在37 ℃進(jìn)行48 h培養(yǎng)，之后可進(jìn)行計(jì)數(shù)。

1.3.4結(jié)果換算 取不同稀釋度金黃色葡萄球菌懸液各 50 μl 加入無菌離心管內(nèi)；再加入 50 μl裂解液，混勻后置室溫放置 10 min；加入 400 μl 熒光素酶，迅速混勻。然后用 BiotechTM生物熒光快速檢測儀測定第一次 RLU 值(M1)；加入10 μl ATP 標(biāo)準(zhǔn)品測定第二次 RLU 值(M2)；按照公式：ATP 含量(amol)=5 M1/(M2-M1)×105計(jì)算。

1.4評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定醫(yī)務(wù)人員手的細(xì)菌總數(shù)≤10 cfu/cm2為合格。ATP 生物熒光檢測法的衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)，根據(jù)生產(chǎn)廠家在產(chǎn)品說明書中推薦的標(biāo)準(zhǔn)≤1 RLU/cm2(30 RLU/手)為合格。

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS 19.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理。計(jì)量資料以均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示，前后比較采用配對t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料比較采用卡方檢驗(yàn)；采用線性回歸分析變量關(guān)系。P< 0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1金黃色葡萄球菌含量與ATP含量對應(yīng)關(guān)系分析如表1所示，當(dāng)金黃色葡萄球菌懸液含量在5.8×102～6.2×106時(shí)，隨著菌數(shù)的增加，ATP含量也相應(yīng)升高。以菌數(shù)對數(shù)值為橫坐標(biāo)，ATP含量對數(shù)值為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性擬合，得線性回歸方程Y= 1.0693X-0.0699，R2=0.9979，表明在該范圍內(nèi)，菌數(shù)對數(shù)與ATP含量對數(shù)存在良好的線性關(guān)系。見圖1。

圖1 金黃色葡萄球菌含量對數(shù)值與ATP含量對數(shù)值線性關(guān)系擬合

金黃色葡萄球菌含量cfu/ml對數(shù)值/0．5ml相對光單位值(RLU)M1M2ATP含量(amol)對數(shù)值(lgamol)6．2×1065．4953243879717665725．885．7×1054．43657386281412324．625．9×1043．455637889735943．565．6×1032．4951759743362．535．8×1021．46679387381．58

2.2活菌計(jì)數(shù)與ATP生物檢測結(jié)果比較如表2所示，兩種方法對醫(yī)務(wù)人員手部衛(wèi)生檢查結(jié)果差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=0.940，P> 0.05)。

表2 兩種方法對醫(yī)務(wù)人員手部衛(wèi)生情況評估結(jié)果

2.3ATP熒光微生物法對洗手前后醫(yī)務(wù)人員衛(wèi)生情況測定結(jié)果比較洗手后ATP含量顯著低于洗手前(t=11.502，P< 0.05)。洗手后醫(yī)務(wù)人員手表面微生物合格率顯著高于洗手前(χ2=9.451，P< 0.05)，見表3。

表3 ATP熒光微生物法對洗手前后醫(yī)務(wù)人員衛(wèi)生情況測定結(jié)果

3 討論

ATP熒光微生物檢驗(yàn)的理論基礎(chǔ)為所有生物機(jī)體體內(nèi)均存在一定含量的ATP，通過熒光素酶催化熒光素和ATP發(fā)生反應(yīng)生成能夠產(chǎn)生熒光的熒光素氧化產(chǎn)物，且熒光強(qiáng)度與機(jī)體內(nèi)ATP的含量呈正比，因此對機(jī)體ATP含量的檢測可以間接反應(yīng)微生物的含量[6]。目前，國內(nèi)學(xué)者將ATP熒光微生物檢測與傳統(tǒng)的微生物培養(yǎng)法用于評估醫(yī)療器械的清洗效果，結(jié)果表明兩種方法所得結(jié)果基本一致，這說明ATP熒光微生物檢測的實(shí)際應(yīng)用是可行的[7]。醫(yī)務(wù)人員手部被微生物污染將會產(chǎn)生嚴(yán)重的安全風(fēng)險(xiǎn)，如交叉感染等，不僅對患者的健康產(chǎn)生威脅，而且也會對醫(yī)務(wù)人員自身的健康產(chǎn)生隱患[8～10]。因此，建立對醫(yī)務(wù)人員手部微生物污染的評估方法具有重要意義。

本研究結(jié)果表明當(dāng)金黃色葡萄球菌懸液含量在5.8×102～6.2×106時(shí)，菌數(shù)對數(shù)與ATP含量對數(shù)存在良好的線性關(guān)系。這一結(jié)果說明菌數(shù)在一定范圍內(nèi)時(shí)，ATP含量能夠與金黃色葡萄菌濃度相對應(yīng)，可以通過測定ATP的含量用于評估微生物的含量，這與相關(guān)研究基本一致[11，12]

兩種方法對醫(yī)務(wù)人員手部衛(wèi)生檢查結(jié)果差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，上述結(jié)果說明ATP熒光微生物檢驗(yàn)法對醫(yī)務(wù)人員手表面微生物的評估結(jié)果與傳統(tǒng)的微生物培養(yǎng)法的檢驗(yàn)結(jié)果基本一致，間接反映了ATP熒光微生物檢驗(yàn)用于醫(yī)務(wù)人員手表面微生物評估的可靠性。相對于微生物培養(yǎng)法，該法能夠在現(xiàn)場快速取樣、測定，可在較短時(shí)間能拿到結(jié)果，有助于醫(yī)務(wù)人員根據(jù)測定結(jié)果采取相應(yīng)的應(yīng)對措施。而常規(guī)的微生物培養(yǎng)一般需要在取樣后24 h內(nèi)才能觀察結(jié)果，存在嚴(yán)重的滯后性，對實(shí)際工作的指導(dǎo)意義較差。

此外，本研究采用ATP熒光微生物檢驗(yàn)法分別在醫(yī)務(wù)人員洗手前后分別測定手部表面微生物情況，結(jié)果表明洗手后ATP含量顯著低于洗手前，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，洗手后，醫(yī)務(wù)人員手表面微生物合格率顯著高于洗手前。這一結(jié)果與實(shí)際情況相符，即通過洗手能夠減少醫(yī)務(wù)人員手表面的微生物[13]。通過應(yīng)用該方法能夠督促醫(yī)務(wù)人員經(jīng)常洗手，減少手部表面微生物數(shù)量，降低醫(yī)務(wù)人員及患者交叉感染的風(fēng)險(xiǎn)。

綜上所述，ATP熒光微生物檢驗(yàn)技術(shù)能夠用于評估醫(yī)務(wù)人員手部微生物污染情況，結(jié)果與常規(guī)微生物培養(yǎng)法基本一致，可在實(shí)際工作中推廣應(yīng)用。

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