陳麗艷
(福建省福州市食品藥品檢驗(yàn)所,福建 福州 350007)
活血散是福州市盤嶼中醫(yī)骨科醫(yī)院的自制藥品,由乳香、沒藥、赤芍等十幾味中藥經(jīng)加工制成,具有舒筋活絡(luò)、活血化瘀、行氣消腫止痛的功效,用于治療傷筋及骨折腫痛等?,F(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中沒有含量測定項(xiàng)。赤芍為活血散的主藥,在處方中起祛瘀止痛、涼血消腫之功效,其有效成分為芍藥苷[1]。為了更好地控制該制劑質(zhì)量,本文參考有關(guān)資料[2],采用高效液相色譜法建立了活血散中芍藥苷的含量測定,操作簡便,重復(fù)性好,結(jié)果準(zhǔn)確。
1.1 實(shí)驗(yàn)儀器 島津LC-20A高效液相色譜系統(tǒng)(紫外檢測器,自動(dòng)進(jìn)樣器,柱溫箱)(日本島津公司);KQ-500WDE三頻數(shù)控超聲波清洗器(昆山市超聲儀器公司);Milli-Q-Reference超純水機(jī)(法國密理博公司);BP211D電子天平(北京賽多利斯公司)。
1.2 試藥與試劑 芍藥苷對(duì)照品(中國食品藥品檢定研究院,批號(hào):110736-201640,含量 96.4%)。乙腈為色譜純;水為超純水;其余試劑均為分析純;活血散3批(福州市盤嶼中醫(yī)骨科醫(yī)院,批號(hào):161201、161203、161204)。
2.1 色譜條件 色譜柱:C18ODS柱(250 mm×4.6 mm,5 μm,大連依利特);流動(dòng)相:乙腈-0.1%磷酸(14∶86),流速:1.0 mL/min,檢測波長:230 nm,柱溫:35 ℃,進(jìn)樣量:20 μL。
2.2 溶液的制備
2.2.1 對(duì)照品的制備 精密稱取芍藥苷對(duì)照品20.24 mg,置50 mL棕色量瓶中,加稀乙醇溶解,制成0.39 mg/mL的溶液,作為對(duì)照品貯備液。精密吸取該貯備液5 mL置50 mL量瓶中,用稀乙醇稀釋至刻度,搖勻,即得對(duì)照品溶液。
2.2.2 供試品溶液的制備 取本品,混勻,取約1.5 g,精密稱定,置具塞錐形瓶中,精密加入稀乙醇50 mL,密塞,稱定重量,超聲(250 W,33 kHz)1 h,放冷,再稱定重量,用稀乙醇補(bǔ)足減失的重量,搖勻,離心,取上清液,即得。
2.2.3 陰性對(duì)照溶液的制備 根據(jù)處方制備不含赤芍的陰性樣品,按照供試品溶液制備方法制得活血散陰性對(duì)照溶液。
2.3 專屬性考察 取對(duì)照品溶液、供試品溶液、陰性對(duì)照溶液按“2.1項(xiàng)”色譜條件進(jìn)行測定,色譜圖見圖1~圖3。結(jié)果顯示供試品中芍藥苷分離度好(分離度大于1.5),陰性溶液無干擾。
2.4 線性范圍 精密量取“2.2.1項(xiàng)”下的芍藥苷對(duì)照品貯備液,用稀乙醇稀釋成 3.90、7.80、19.51、39.02、58.53、78.04 μg/mL 梯度濃度溶液,分別進(jìn)樣20 μL。以芍藥苷峰面積對(duì)溶液濃度進(jìn)行線性回歸,得回歸方程 A=2.595×104C-1.006×104,r=0.9996??梢娚炙庈杖芤簼舛仍?.90~78.04 μg/mL范圍內(nèi)具良好的線性關(guān)系。
2.5 精密度實(shí)驗(yàn) 取對(duì)照品溶液,連續(xù)進(jìn)樣6次,每次 20 μL,記錄峰面積,RSD=1.52%,表明精密度良好。
2.6 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn) 取同一份供試品溶液,每隔2 h進(jìn)樣1次,共進(jìn)樣6次,記錄峰面積,RSD=1.52%,由實(shí)驗(yàn)結(jié)果可見供試品溶液在12 h內(nèi)是穩(wěn)定的。
2.7 重復(fù)性實(shí)驗(yàn) 取同一批號(hào)(批號(hào)161201)活血散樣品,共6份,按“2.2.2項(xiàng)”的方法制備供試品溶液,進(jìn)樣,記錄峰面積,結(jié)果芍藥苷的平均含量為1.70 mg/g,RSD=1.85%。
2.8 加樣回收實(shí)驗(yàn) 取同一批,6份已知含量的活血散0.75 g,置具塞錐形瓶中,分別精密加入一定量芍藥苷對(duì)照品,按“2.2.2項(xiàng)”供試品含量測定法依法測定,計(jì)算回收率。見表1。
2.9 樣品測定 取3批樣品,按“2.2.2項(xiàng)”的方法制備供試品溶液,按“2.1項(xiàng)”的色譜條件進(jìn)樣,測定芍藥苷含量,見表2。
3.1 檢測波長的選擇 根據(jù)主要成分的紫外吸收光譜,芍藥苷在波長230 nm處有最大吸收,在這一波長下測定,樣品中其他化學(xué)成分未見干擾,故本實(shí)驗(yàn)采用230 nm作為測定波長。
注:A芍藥苷。
圖2 供試品HPLC色譜圖
圖3 陰性樣品HPLC色譜圖
表1 芍藥苷回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果
表2 3批活血散樣品測定結(jié)果(n=3)
3.2 流動(dòng)相的選擇 比較3種不同流動(dòng)相,A:乙腈-0.1%磷酸(14∶86),B:甲醇-水(15∶85),C:乙腈-水(15∶85),選擇流動(dòng)相 A,芍藥苷峰形對(duì)稱,與其他成分峰分離良好。
3.3 提取方法的選擇 比較回流提取與超聲波提取,二者差別不大。考慮到超聲波提取操作簡單,受熱溫度低,故選擇超聲波提??;曾以甲醇、稀乙醇及水超聲提取,結(jié)果表明稀乙醇提取芍藥苷含量最高,因此采用稀乙醇提取;考察了不同時(shí)間提取效果,發(fā)現(xiàn)1 h提取率最高,故選擇超聲1 h。
[1] 陸小華,馬驍,王建,等.赤芍的化學(xué)成分和藥理作用研究進(jìn)展[J].中草藥,2015,46(4):595-602.
[2] 國家藥典委員會(huì).中華人民共和國藥典[M].北京:中國醫(yī)藥科技出版社,2015:462.