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        沉水樟芝降血糖作用的初步藥效學(xué)研究

        2018-03-08 08:34:49陳耀金
        福建中醫(yī)藥 2018年1期
        關(guān)鍵詞:小鼠劑量糖尿病

        王 瑾,陳耀金,王 宮

        (福建省中醫(yī)藥研究院,福建 福州 350003)

        牛樟芝是一種原產(chǎn)于我國(guó)臺(tái)灣省的珍稀藥用菌。研究證實(shí),其具有降血糖、解毒保肝、抗腫瘤、補(bǔ)腎強(qiáng)心、益胃整腸、強(qiáng)化免疫、鎮(zhèn)痛抗菌等多種作用[1-4]。牛樟樹作為自然界中樟芝的唯一宿主,只分布在臺(tái)灣地區(qū),數(shù)量極為稀少,加上野生牛樟芝生長(zhǎng)緩慢,資源嚴(yán)重短缺,價(jià)格十分昂貴。其高昂的價(jià)格嚴(yán)重制約了樟芝這種具有極大藥用價(jià)值的菌類的應(yīng)用和開發(fā)。我們利用福建地區(qū)資源豐富的沉水樟樹來作為樟芝的新宿主,培育出沉水樟芝。本實(shí)驗(yàn)進(jìn)行沉水樟芝降血糖的初步藥效學(xué)研究,旨在為沉水樟芝資源的進(jìn)一步開發(fā)利用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

        1 實(shí)驗(yàn)材料

        1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 清潔級(jí)昆明種小鼠,雌雄兼用,體重16~20 g,由福建中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供,生產(chǎn)許可證號(hào):SGXK(閩)2004-0001。

        1.2 實(shí)驗(yàn)藥品與試劑 二甲雙胍(深圳中聯(lián)制藥有限公司,批號(hào):201511299);四氧嘧啶(德國(guó) Fluka);胰島素注射液(Lilly France S.A.S,批號(hào):20150 906),葡萄糖(AR 級(jí),批號(hào):F20150811);葡萄糖測(cè)定試劑盒(上海榮勝生物技術(shù)有限公司,批號(hào):2016 0206);游離脂肪酸測(cè)試盒(南京建成生物工程研究所,批號(hào):20160331);沉水樟芝(福建永安,人工培育)。

        1.3 實(shí)驗(yàn)儀器 可見紫外分光光度儀(島津公司,UV25 01PC);電子天平(BP211D,塞多利斯);穩(wěn)步快速血糖儀(強(qiáng)生公司);冷凍干燥儀(Savant ModulyoD,美國(guó)熱電)。

        2 實(shí)驗(yàn)方法

        2.1 沉水樟芝藥液的制備 取沉水樟芝適量,加入10倍量水,煎煮提取2次,每次1 h,合并兩次濾液,濃縮,即得沉水樟芝藥液(含生藥量0.4 g/mL),置于冰箱,備用。

        2.2 2型糖尿病模型的建立 取60只小鼠禁食12 h,稱重,10只做正常對(duì)照,其余小鼠灌胃脂肪乳10 d,10 d后禁食12 h,腹腔注射四氧嘧啶200 mg/kg。給藥72 h后,測(cè)空腹血糖,以空腹血糖值≥10 mmol/L者納入實(shí)驗(yàn)范圍,即2型糖尿病模型成立。

        2.3 分組及給藥 取2型糖尿病小鼠40只,分為模型組、陽性對(duì)照組、低劑量組和高劑量組各10只。 低劑量組、高劑量組分別予 4 g/kg、16 g/kg沉水樟芝藥液灌胃,陽性對(duì)照組予0.25 g/kg二甲雙胍藥液灌胃,對(duì)照組及模型組予等量生理鹽水灌胃。每周重稱1次,調(diào)整灌胃量,共灌胃干預(yù)30 d。

        2.4 觀察指標(biāo) ① 分別于灌胃給藥15 d、30 d后,禁食12 h,割尾靜脈取血,測(cè)定4組小鼠血清葡萄糖(Glu)和游離脂肪酸(NEFA)含量。② 糖耐量實(shí)驗(yàn):灌胃30 d后,將各組小鼠禁食12 h,灌胃葡萄糖 0.2 g/kg,分別測(cè)定灌胃前、灌胃后 0.5 h、1 h、2 h血糖值,觀察各組血糖變化,計(jì)算曲線下面積,曲線下面積越大,說明糖耐量越差,糖尿病越嚴(yán)重。

        2.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用PEMS3.1 for Windows軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理,計(jì)量資料符合正態(tài)分布以()表示,采用t檢驗(yàn)。

        3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

        3.1 6組小鼠干預(yù)后Glu和NEFA含量比較 見表1。

        表1 6組小鼠干預(yù)后Glu和NEFA含量比較()mmol/L

        表1 6組小鼠干預(yù)后Glu和NEFA含量比較()mmol/L

        注:與對(duì)照組比較,1) P<0.01,2) P<0.05;與模型組比較,3) P<0.01,4) P<0.05。

        組 別對(duì)照組模型組二甲雙胍組低劑量組高劑量組n 10 10 10 10 10 Glu NEFA灌胃后15 d 5.89±0.88 24.38±0.652)16.97±1.502)4)12.66±1.722)4)11.58±0.792)4)灌胃后30 d 5.50±0.77 12.00±3.321)10.95±2.672)3)8.77±2.342)4)8.45±0.072)3)灌胃后15 d 2.72±0.40 3.98±0.372)3.40±0.242)3)2.67±0.104)2.34±0.094)灌胃后30 d 2.62±0.51 3.98±0.332)3.26±0.233)2.87±0.394)2.34±0.094)

        3.2 4組小鼠糖耐量水平比較 見表2。

        表2 4組小鼠糖耐量水平比較()

        表2 4組小鼠糖耐量水平比較()

        注:與對(duì)照組比較,1) P<0.01,2) P<0.05;與模型組比較,3) P<0.01,4) P<0.05。

        組 別對(duì)照組模型組二甲雙胍組低劑量組高劑量組n 10 10 10 10 10 0 h 5.50±0.77 12.10±3.32 10.95±2.67 8.77±2.34 8.45±0.07糖耐量實(shí)驗(yàn)后血清 Glu/(mmol/L)0.5 h 7.58±1.08 26.50±1.83 26.90±1.27 24.28±3.46 25.10±1.69 1 h 6.50±0.16 26.30±2.12 16.50±0.35 16.60±3.30 16.45±2.47 2 h 5.86±0.83 16.00±0.35 9.30±0.14 9.17±1.79 8.35±1.34曲線下面積AUC 12.70±0.65 44.01±1.501)33.20±0.981)3)31.36±5.481)3)31.18±3.372)4)

        4 討論

        沉水樟芝低、高劑量組均有降低糖尿病小鼠血糖、脂肪酸和提高糖耐受作用,高劑量組效果更為明顯,說明沉水樟芝具有較好降低2型糖尿病小鼠血糖和改善糖尿病小鼠身體機(jī)能的作用,并有一定的量效關(guān)系。

        在造模型過程中,我們應(yīng)用脂肪乳灌胃和四氧嘧啶所誘導(dǎo)對(duì)非胰島素依賴型糖尿病模型,其中灌胃脂肪乳10 d后造成胰島素抵抗,再通過注射四氧嘧啶,導(dǎo)致胰腺代償性分泌胰島素障礙。在四氧嘧啶劑量選擇中200 mg/kg的劑量。此造模方法最接近于2型糖尿病患者的發(fā)病機(jī)理,具有很好的類比性。

        葡萄糖、游離脂肪酸、糖耐量均是反映糖尿病情況的重要指標(biāo),其中正常血清中NEFA含量極微,饑餓、運(yùn)動(dòng)及情緒激動(dòng)可以升高,在甲狀腺機(jī)能亢進(jìn)、注射腎上腺素或去甲腎上腺素及生長(zhǎng)激素后可升高。任何疾病影響血中激素水平者,均對(duì)游離脂肪酸有影響。未治療糖尿病中血清游離脂肪酸可達(dá)1.5 mmol/L。所以,血清中NEFA含量越大,證明其糖尿病越嚴(yán)重。實(shí)驗(yàn)測(cè)定了各時(shí)間段各組小鼠空腹血糖值、游離脂肪酸值、糖耐量,顯示灌胃沉水樟小鼠的血糖值、游離脂肪酸含量、糖耐量的曲線下面積均顯著小于模型組小鼠。其中灌胃1 g/kg與4 g/kg沉水樟芝無顯著差異,顯示此兩劑量藥效相似。

        由于沉水樟芝具有較豐富的使用價(jià)值和顯著的降血糖效果,而且純天然,安全、無毒副作用,無疑對(duì)廣大糖尿病患者是一個(gè)極大的福音,可開辟臨床防治糖尿病及其并發(fā)癥新途徑,提高糖尿病的治療水平,因而具有廣闊的前景。有關(guān)糖尿病有效成分研究和降血糖的作用機(jī)理,還需進(jìn)一步探討和研究。

        [1] 張遠(yuǎn)騰,李曉波.牛樟芝化學(xué)成分及其藥理作用研究進(jìn)展[J].中草藥,2016,47(6):1034-1042.

        [2] 韓金龍,趙培城,劉士旺.樟芝藥理學(xué)作用研究進(jìn)展[J].食用菌學(xué)報(bào),2014,21(1):76-82.

        [3] 陸震鳴,敖宗華,陶文沂,等.樟芝菌粉對(duì)乙醇誘導(dǎo)的大鼠急性肝損傷的保護(hù)作用[J].中草藥,2007,38(3):420-422.

        [4] CHEN Y J,THANG M W,CHAN Y T,et al.Global assessment of Antrodia cinnamomea-induced microRNA alterations in hepatocarcinoma cells [J].PLoS One,2013,8(12):e82751.

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