薩喆燕 ，萬 隆 ，黃倩茹 ，許金森

（1.福建省中醫(yī)藥研究院，福建 福州 350003；2.福建省經(jīng)絡感傳重點實驗室，福建 福州 350003）

冠狀動脈性心臟病，簡稱冠心病，是全球死亡率最高的疾病之一，嚴重威脅人類健康和生活質(zhì)量，據(jù)統(tǒng)計全球每年約有1700萬人死于冠心病［1］，我國也是冠心病發(fā)病率和病死率上升較快的國家之一［2］。臨床研究顯示，針刺治療冠心病有一定療效［3-4］，但其機制仍不明確。本研究采用多點位皮下注射鹽酸異丙腎上腺素（isoproterenol，ISO）建立大鼠急性心肌缺血模型，通過電針內(nèi)關穴，觀察治療前后大鼠心肌缺血程度的改變。

1 實驗材料

1.1 實驗動物 成年雄性SD大鼠18只，清潔級，體質(zhì)量（250±20）g，購自福建醫(yī)科大學實驗動物中心，許可證號：SCXK（閩）2012-0001。實驗前7天適應性飼養(yǎng)于福建省中醫(yī)藥研究院實驗動物中心，飼養(yǎng)條件：溫度（22±2）℃，濕度（55±15）%，12 h 明暗交替，自由進食與飲水。

1.2 實驗儀器 PowerLab多導數(shù)據(jù)采集分析系統(tǒng)（澳大利亞埃德公司）；小動物麻醉呼吸系統(tǒng)（深圳瑞沃德生命科技有限公司）；Varioskan Flash全波長掃描式多功能酶標儀（美國Thermo公司）；SDZ-Ⅱ型華佗牌電子針療儀（蘇州醫(yī)療用品廠有限公司）。

1.3 實驗試劑 ISO購于美國Sigma公司；肌酸激酶（CK）活性檢測試劑盒（貨號 MAK116-1KT）、谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）活性檢測試劑盒（貨號MAK055-1KT）均購自美國Sigma公司。

2 實驗方法

2.1 模型制備 采用隨機數(shù)字表法將SD大鼠分為對照組、模型組、電針組各6只。將大鼠連接至小動物呼吸麻醉機，吸入異氟烷，在麻醉狀態(tài)下，通過PowerLab多導生理記錄儀記錄正常狀態(tài)下大鼠心電圖（electrocardiogram，ECG）。對照組采用皮下多點位（大鼠四肢內(nèi)側(cè)根部和背部）注射生理鹽水（85 mg／kg），模型組和電針組皮下多點位注射ISO（85 mg／kg），分別注射2次，間隔24 h。確認造模成功的ECG變化為T波由正向變?yōu)樨撓蚧虺孰p相，并伴有ST段抬高。

2.2 干預措施 電針組于第2次注射ISO后24 h開始干預，參考《實驗針灸學》［5］選取內(nèi)關穴，采用0.25 mm×13 mm華佗牌無菌毫針直刺0.1 cm，連接電針儀，電壓5～10 V，以針體輕微抖動為度，疏密波，頻率 2／10 Hz，每次 20 min，每日 1 次，連續(xù)治療5 d。對照組和模型組給予同等條件抓取，不做任何治療。

2.3 觀測指標

2.3.1 體質(zhì)量變化率 分別對第1天、第7天實驗前3組大鼠進行稱重，并計算體質(zhì)量變化率。

體質(zhì)量變化率＝（第7天體質(zhì)量－第1天體質(zhì)量）／第1天體質(zhì)量×100%。

2.3.2 ECG分析 治療結束后分別記錄3組大鼠的ECG，各取5個心動周期，以T波終點至P波起點連線，即TP連線為基線，測量ST段電位偏移變化，作為評價心肌缺血程度的指標。

2.3.3 CK、AST活性檢測 在治療結束后經(jīng)大鼠腹主動脈采血3 mL，靜置30 min后，3500 r／m常溫離心15 min，提取血清，按照試劑盒說明，用多功能酶標儀測定心肌激酶（CK）、谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）的活性。

2.4 統(tǒng)計學方法 采用SPSS 17.0統(tǒng)計軟件進行分析處理，計量資料符合正態(tài)分布以（）表示，采用方差分析、LSD檢驗。

3 實驗結果

3.1 3組體質(zhì)量變化率比較 見表1。

表1 3組體質(zhì)量變化率比較（）%

表1 3組體質(zhì)量變化率比較（）%

注：與對照組比較，1） P＜0.01；與模型組比較，2） P＜0.01。

組別對照組模型組電針組大鼠／只6 6 6體質(zhì)量變化率19.31±0.78 8.72±1.201）13.26±0.801）2）

3.2 3組ST段電位偏移值比較 見表2。

表2 3組ST段電位偏移值比較（） μV

表2 3組ST段電位偏移值比較（） μV

注：與對照組比較，1） P＜0.01；與模型組比較，2） P＜0.01。

組別對照組模型組電針組大鼠／只6 6 6 ST段偏移值104.30±23.56 396.18±47.421）182.01±34.452）

3.3 3組CK、AST活性比較 見表3。

表 3 3 組 CK、AST 活性比較（）U／L

表 3 3 組 CK、AST 活性比較（）U／L

注：與對照組比較，1） P＜0.01，2） P＜0.05；與模型組比較，3） P＜0.01，4） P＜0.05。

組別對照組模型組電針組大鼠／只6 6 6 CK 129.02±17.61 194.17±11.001）112.29±14.173）AST 52.56±4.65 70.62±5.582）53.33±5.324）

4 討論

急性心肌缺血模型的制備方法包括冠脈結扎法、微量直流電刺激法、球囊堵塞法以及藥物注射法等［6］。本研究采用多點皮下注射ISO造成大鼠急性心肌缺血損傷。大劑量注射ISO可激活心肌細胞β1受體，使心肌收縮加強，代謝旺盛，增加耗氧量；同時激活心肌細胞β2受體，擴張外周血管，減少回心血量，造成動脈壓下降、冠脈血流減少，導致心肌缺血、缺氧，引發(fā)缺血性心肌病。這種損傷與人急性心肌缺血比較相似，因此常作為急性心肌缺血的動物模型之一［7］。

ISO造成心肌缺血的主要指標可用Ⅱ?qū)?lián)心電圖ST段的偏移值來評價［8］。本研究結果也提示皮下注射ISO后，模型組大鼠ST段偏移值顯著高于對照組。體質(zhì)量變化可直觀反映大鼠生理機能狀況，造模后模型組大鼠體質(zhì)量變化率降低，表明注射ISO影響大鼠生理機能狀況。血清心肌酶活性水平與心肌細胞壞死程度密切相關，可用于判斷心功能和心肌細胞的受損程度，心肌酶活性降低成為對心肌細胞起保護作用的指標之一［9］。注射ISO后模型組大鼠血清CK、AST活性較對照組顯著升高，這些結果在一定程度上反映出注射ISO導致大鼠心功能改變及心肌缺血損傷。

內(nèi)關穴不僅是動物實驗取穴的常用穴位，也是臨床治療冠心病的常用穴位。內(nèi)關穴首見于《靈樞·經(jīng)脈》，是手厥陰心包經(jīng)的絡穴，又是八脈交會穴之一，通于陰維脈，與心包絡、心之間相互關聯(lián)，存在著不可分割的內(nèi)在聯(lián)系［10］。針灸臨床療效產(chǎn)生的關鍵在于：作用特定經(jīng)絡、特定腧穴產(chǎn)生特定效應，因此臨床上的取穴原則，都是以穴位-經(jīng)絡-臟腑為核心［11］。 因此，本研究遵循“經(jīng)脈所過，主治所及”，循經(jīng)選取內(nèi)關穴作為針刺穴位，研究電針治療心肌缺血的特異性。結果發(fā)現(xiàn)，電針組大鼠體質(zhì)量變化率顯著高于模型組，提示電針后大鼠生理機能狀態(tài)好轉(zhuǎn)。此外，電針組大鼠ST段偏移值明顯低于模型組，心肌酶CK活性及AST活性均顯著下降，均提示電針內(nèi)關穴可以改善心肌缺血大鼠的心功能，減輕大鼠心肌缺血程度，起到對抗心肌缺血的作用。

本研究通過ECG、心肌酶等指標觀察了電針內(nèi)關穴治療心肌缺血的療效，為豐富針刺療效提供了更加詳實的實驗依據(jù)，也為今后課題組進一步研究電針治療心肌缺血的機制奠定了基礎。

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