王曉婷 閆 麗 孫冬月 王馨雅 高 慧

遼寧中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，遼寧大連 116600

知母為百合科植物知母（Anemarrhena asphodeloides Bge）的干燥根莖，始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，具有清熱瀉火、滋陰潤(rùn)燥的功效，用于外感熱病，高熱煩渴，肺熱燥咳，骨蒸潮熱，內(nèi)熱消渴，腸燥便秘等癥[1]。鹽炙知母最早見(jiàn)于宋代的《扁鵲心書(shū)》，鹽炙法是歷史上知母的主流炮制方法，鹽知母為歷版《中國(guó)藥典》收載的知母飲片的唯一炮炙品種。傳統(tǒng)理論認(rèn)為知母鹽炙后能夠“引藥入腎經(jīng)，增強(qiáng)滋陰降火的作用”[2-4]。

在前期的實(shí)驗(yàn)研究中，我們多次證明了知母鹽制后降糖效果顯著增強(qiáng)[5-7]。知母皂苷AⅢ、知母皂苷BⅢ、芒果苷均具有降血糖活性，且為炮制后增量，是鹽知母降血糖作用增強(qiáng)的物質(zhì)基礎(chǔ)。在鹽知母降血糖作用增強(qiáng)未知的情況下，我們以當(dāng)時(shí)2005、2010版《中國(guó)藥典》知母含量測(cè)定項(xiàng)下的菝葜皂苷元、芒果苷含量為指標(biāo)進(jìn)行了鹽知母炮制工藝的研究[8]。隨著研究的深入，降血糖作用物質(zhì)基礎(chǔ)的揭示，有必要以降血糖有效成分為指標(biāo)對(duì)炮制工藝進(jìn)行優(yōu)選，并對(duì)工藝優(yōu)化后的鹽知母降血糖作用進(jìn)行再評(píng)價(jià)，為鹽知母飲片的炮制提供規(guī)范的工藝參數(shù)，為生產(chǎn)質(zhì)優(yōu)效確的飲片提供技術(shù)支持。

現(xiàn)版《中國(guó)藥典》鹽知母的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中的含量測(cè)定項(xiàng)，為測(cè)定芒果苷、知母皂苷Ⅱ的含量，其中對(duì)鹽知母中兩種成分含量的規(guī)定均低于生知母飲片。我們研究表明知母鹽炙后芒果苷、知母皂苷Ⅱ的含量均增加，可見(jiàn)藥典中質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)缺乏真正控制鹽知母質(zhì)量的有效性。另外，知母皂苷Ⅱ是炮制過(guò)程的中間產(chǎn)物，在鹽炙過(guò)程中會(huì)進(jìn)一步水解成降血糖的活性成分知母皂苷BⅢ、知母皂苷AⅢ，所以將知母皂苷Ⅱ作為含量測(cè)定指標(biāo)亦不夠科學(xué)。所以本課題以優(yōu)化后的鹽炙工藝自行炮制鹽知母樣品，以知母炮制后的增量成分知母皂苷A III、知母皂苷B III、芒果苷為含量測(cè)定指標(biāo)[9]，建立鹽知母質(zhì)量評(píng)價(jià)的含量測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)。以彌補(bǔ)《中國(guó)藥典》鹽知母飲片含量測(cè)定指標(biāo)的不足，為藥典再版時(shí)制訂針對(duì)鹽知母質(zhì)量的真正能有效控制鹽知母的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供科學(xué)依據(jù)。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 儀器

LC-20AB高效液相色譜儀（日本島津公司）；Corona電霧式檢測(cè)器（美國(guó)ESA公司）；電熱恒溫水浴鍋（北京市長(zhǎng)風(fēng)儀器儀表公司）；十萬(wàn)分之一分析天平（瑞士METTLER公司）；電子天平（上海精密科學(xué)儀儀器有限公司）；Waters高效液相色譜儀（waters e2695、Waters2998PDA、自動(dòng)進(jìn)樣裝置）；KQ-250DB型數(shù)控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）。

1.2 主要材料及試劑

知母飲片購(gòu)于四川新荷花片飲股份有限公司（1405127），知母藥材采自河北省易縣西陵鎮(zhèn)太和莊、龍泉莊，經(jīng)遼寧中醫(yī)藥大學(xué)翟延君教授鑒定為百合科知母屬植物知母Anemarrhena asphodeloides Bge.干燥根莖。知母皂苷AⅢ對(duì)照品（純度≥98%，批號(hào)MUST-13042609）、知母皂苷BⅢ對(duì)照品（純度≥98%，批號(hào)MUST-13121110）均購(gòu)自成都曼思特生物科技有限公司，芒果苷對(duì)照品（純度≥98%，批號(hào)111607-200402）購(gòu)自中國(guó)藥品食品生物制品檢定所。甲醇、乙腈為色譜純，娃哈哈純凈水，其余試劑均為分析純。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 知母皂苷類(lèi)含量測(cè)定

2.1.1 色譜條件 Thermo C18柱（250mm× 4.6mm，5μm）； 流動(dòng)相為水 -乙腈 ，流速為 1mL/min；進(jìn)樣量：20μL，柱溫：30℃，Corona參數(shù)：氮?dú)鈮毫?5psi（241.3kPa），filter：High，Range：200pA； 梯度洗脫程序見(jiàn)表1。在上述色譜條件下，分別精密吸取對(duì)照品溶液和供試品溶液注入液相色譜儀，測(cè)定。對(duì)照品、知母樣品的色譜分離圖見(jiàn)圖1。結(jié)果表明，保留時(shí)間適中，供試品色譜峰的保留時(shí)間和峰形與對(duì)照品均一致，供試品中知母皂苷A-Ⅲ、知母皂苷B-Ⅲ與其它相鄰色譜峰的分離度良好，對(duì)照品、供試品的理論塔板數(shù)不少于5000。說(shuō)明該分析條件良好，符合定量分析要求。

2.1.2 對(duì)照品溶液制備 分別精密稱(chēng)取知母皂苷A-Ⅲ、知母皂苷B-Ⅲ對(duì)照品適量，甲醇溶解，作為對(duì)照品儲(chǔ)備液。精密量取各儲(chǔ)備液適量，置10mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，得知母皂苷A-Ⅲ、知母皂苷B-Ⅲ質(zhì)量濃度分別為0.273mg/mL，0.265mg/mL的混合對(duì)照品溶液。

表1 梯度洗脫條件

圖1 知母皂苷類(lèi)對(duì)照品及知母樣品HPLC圖

2.1.3 供試品溶液制備 取鹽知母粉末（過(guò)三號(hào)篩）1.0g，精密稱(chēng)定，用約8倍量70%乙醇回流提取2次，每次1h，濾過(guò)，合并濾液，得醇浸膏。浸膏以100mL甲醇分散濾過(guò)，即得。

2.1.4 方法學(xué)考察 （1）線性范圍考察：分別精密吸取對(duì)照品儲(chǔ)備溶液 1、4、8、10mL 置 25mL 量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。分別進(jìn)樣20μL，以進(jìn)樣濃度為橫坐標(biāo)（X），色譜峰面積為縱坐標(biāo)（Y），分別繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。知母皂苷AIII回 歸 方 程 為 Y=282360.784X+1712592，r=0.9997；知母皂苷BIII回歸方程為：Y=1995356.06 X-3190777，r=0.9995。結(jié)果表明知母皂苷A-Ⅲ在 0.2184～ 2.184μg、知母皂苷 B-Ⅲ在0.212～2.12μg范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系。（2）精密度試驗(yàn)：分別精密吸取上述配制的知母皂苷AIII、知母皂苷BIII對(duì)照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣6次，每次均20μL，按前述色譜條件，測(cè)定色譜峰面積，結(jié)果知母皂苷AIII、知母皂苷BIII峰面積RSD分別為1.69%、1.33%。測(cè)定結(jié)果表明，儀器精密度良好。（3）穩(wěn)定性試驗(yàn)：精密吸取同一份供試品溶液，按上述色譜條件分別于 0、2、4、6、8、12、24h 進(jìn)樣 20μL，測(cè)定色譜峰面積，結(jié)果知母皂苷AIII、知母皂苷BIII的RSD分別為1.53%、1.64%，表明供試品溶液在制備后24h內(nèi)色譜峰面積無(wú)明顯變化，穩(wěn)定性良好。（4）重復(fù)性試驗(yàn)：取鹽知母樣品6份，按供試品項(xiàng)下制備供試品溶液，分別精密吸取20μL按擬定色譜條件進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算含量。結(jié)果樣品中知母皂苷AIII、知母皂苷BIII含量的RSD 分別為1.42%和1.22%，表明方法重復(fù)性好。（5）加樣回收率：精密稱(chēng)定已知知母皂苷AIII、知母皂苷BIII含量的知母飲片6份，每份0.25 g，置50mL量瓶中，分別精密加入知母皂苷AIII對(duì)照品溶液（0.273mg/mL）20 mL、知母皂苷BIII對(duì)照品溶液（0.265mg/mL）20mL，按供試品制備制成樣品，以上述色譜條件進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算加樣回收率，知母皂苷AIII、知母皂苷BIII加樣回收率分別為99.98%、99.65%，RSD值為1.2%、0.79%，符合規(guī)定。2.1.5 樣品含量測(cè)定 按上述方法制備供試品溶液，按照上述色譜條件，每次進(jìn)樣20μL，測(cè)定峰面積，采用外標(biāo)一點(diǎn)法計(jì)算知母皂苷AIII、知母皂苷BIII的含量。

2.2 知母中芒果苷含量測(cè)定

2.2.1 色譜條件 Ecosil色譜柱（4.6mm×150mm，5μm），流動(dòng)相乙腈（A）-0.2% 冰醋酸（B），梯度洗脫（0～ 10min，10%A；10～ 25min，15%A），體積流量1.0mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)258nm，進(jìn)樣量10μL。在上述色譜條件下，分別精密吸取對(duì)照品溶液和供試品溶液注入液相色譜儀，測(cè)定。對(duì)照品、知母樣品的色譜分離見(jiàn)圖2。結(jié)果表明，保留時(shí)間適中，供試品色譜峰的保留時(shí)間和峰形與對(duì)照品均一致，供試品中芒果苷與其它相鄰色譜峰的分離度良好，對(duì)照品、供試品的理論塔板數(shù)不少于5000。說(shuō)明該分析條件良好，符合定量分析要求。

圖2 芒果苷與知母供試品的色譜圖

2.2.2 對(duì)照品溶液制備 精密稱(chēng)取芒果苷對(duì)照品適量，置10mL量瓶中，加甲醇溶解至刻度，搖勻，得芒果苷質(zhì)量濃度為0.8065 mg/mL的對(duì)照品溶液。

2.2.3 供試品溶液制備 取鹽知母粉末（過(guò)三號(hào)篩）0.1g，精密稱(chēng)定，至于25mL具塞錐形瓶中，加稀乙醇約25mL，稱(chēng)重，超聲提取（功率40W，頻率100Hz）放冷后，補(bǔ)足失重，即得。

2.2.4 方法學(xué)考察 （1）線性范圍考察：分別精密吸取對(duì)照品儲(chǔ)備溶液 1、4、8、10mL 置 25mL 量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。分別進(jìn)樣20μL，以進(jìn)樣濃度為橫坐標(biāo)（X），色譜峰面積為縱坐標(biāo)（Y），分別繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。芒果苷回歸方程為：Y=150684X+20288，r=0.9991。結(jié)果表明芒果苷在0.6452～6.452μg范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系。（2）精密度試驗(yàn)：分別精密吸取上述配制的芒果苷對(duì)照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣6次，每次均20μL，按前述色譜條件，測(cè)定色譜峰面積，結(jié)果芒果苷峰面積RSD為1.47%。測(cè)定結(jié)果表明，儀器精密度良好。（3）穩(wěn)定性試驗(yàn)：精密吸取同一份供試品溶液，按上述色譜條件分別于 0、2、4、6、8、12、24h 進(jìn)樣 20μL，測(cè)定色譜峰面積，結(jié)果芒果苷的RSD為1.61%，表明供試品溶液在制備后24 h內(nèi)色譜峰面積無(wú)明顯變化，穩(wěn)定性良好。（4）重復(fù)性試驗(yàn)：取鹽知母樣品6份，按供試品項(xiàng)下制備供試品溶液，分別精密吸取20 μL按擬定色譜條件進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算含量。結(jié)果樣品中芒果苷含量的RSD為1.42%和1.39%，表明方法重復(fù)性好。（5）加樣回收率：精密稱(chēng)定已知芒果苷含量的知母飲片6份，每份0.5g，置100mL量瓶中，分別精密加入芒果苷對(duì)照品溶液（0.8065mg/mL）10 mL，配制成樣品，計(jì)算加樣回收率為99.82%，RSD值為0.85%，符合規(guī)定。

2.2.5 樣品含量測(cè)定 按上述方法制備供試品溶液，按照上述色譜條件，每次進(jìn)樣10μL，測(cè)定峰面積，采用外標(biāo)一點(diǎn)法計(jì)算芒果苷的含量。

2.3 單因素考察

首先以“藥透湯盡”作為加水量、悶潤(rùn)時(shí)間的判斷標(biāo)準(zhǔn)，確定加水量為30mL/100g、悶潤(rùn)時(shí)間以藥透湯盡判斷，大約2～4h。然后根據(jù)經(jīng)驗(yàn)以加鹽量、炒制溫度、炒制時(shí)間為影響因素，進(jìn)行單因素考察。

2.3.1 炒制時(shí)間的選擇 取知母10份，加鹽量為3g/100g，悶潤(rùn)吸盡后，以150℃為炒制溫度，分別炒制 0、2、4、6、8、10、12、14、16、18min，以“炒干”這一傳統(tǒng)判斷標(biāo)準(zhǔn)對(duì)不同的炒制時(shí)間進(jìn)行評(píng)價(jià)，結(jié)果表明炒制10～12min時(shí)效果最好，“干而不糊”。

2.3.2 炒制溫度的選擇 取3份知母，加鹽量為3g/100g，悶潤(rùn)吸盡后，分別以 120、150、180℃炒制，用鹽量為3g，炒制10min，以“炒干”這一傳統(tǒng)判斷標(biāo)準(zhǔn)對(duì)不同的炒制溫度進(jìn)行評(píng)價(jià)，結(jié)果表明150℃效果最好。

表3 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)及結(jié)果

2.3.3 加鹽量的選擇 取5份知母，加鹽量分別為 1g/100g、2g/100g、3g/100g、4g/100g、5g/100g，在150℃下炒制10min，通過(guò)外觀對(duì)不同用鹽量進(jìn)行評(píng)價(jià)，各用鹽量之間無(wú)明顯差異。

2.4 星點(diǎn)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)與效應(yīng)面分析[10]

在單因素考察的基礎(chǔ)上，采用軟件Design-Expert 8.0.7.1中Central Composite試驗(yàn)設(shè)計(jì)方法，結(jié)合經(jīng)驗(yàn)選取加鹽量（A）、炒炙時(shí)間（B）、炒炙溫度（C）為試驗(yàn)的3個(gè)因素，5個(gè)水平分別以±1.732，±1，0進(jìn)行編碼，見(jiàn)表2。制備樣品，以知母皂苷AⅢ、知母皂苷BⅢ、芒果苷總含量（mg/g）為效應(yīng)值（Y）。采用Design-Expert 8.0.7.1軟件進(jìn)行多元回歸擬合，判斷模型優(yōu)劣，確定最佳工藝，并進(jìn)行工藝驗(yàn)證。每次稱(chēng)取100g鹽知母，按表2試驗(yàn)，并以HPLC-CAD法測(cè)定知母皂苷AⅢ、知母皂苷BⅢ的含量，以HPLC-PDA法測(cè)定芒果苷的含量。

表2 星點(diǎn)設(shè)計(jì)因素與水平表

3 結(jié)果

3.1 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)及結(jié)果

根據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，在單因素考察基礎(chǔ)上，利用星點(diǎn)設(shè)計(jì)效應(yīng)面法，對(duì)加鹽量、炒炙時(shí)間、炒炙溫度這3個(gè)影響顯著的考察因素進(jìn)行優(yōu)化設(shè)計(jì)。每個(gè)因素設(shè)計(jì)5個(gè)水平，分別用代碼值0，-1，1，-0.1732，0.1732表示，結(jié)果見(jiàn)表3，知母皂苷B-Ⅲ、知母皂苷A-Ⅲ、芒果苷的總含量為指標(biāo)，用三因素五水平的星點(diǎn)設(shè)計(jì)效應(yīng)面法優(yōu)化鹽知母炮制工藝。結(jié)果表明，20組實(shí)驗(yàn)所得出知母皂苷B-Ⅲ、知母皂苷A-Ⅲ、芒果苷的差異很大，其中知母皂苷A-Ⅲ的范圍是1.091%～3.483%，知母皂苷B-Ⅲ的范圍是0.883%～1.942%，芒果苷的范圍是0.598～1.024%。

3.2 模型擬合度

由試驗(yàn)結(jié)果分析得出，運(yùn)用Design-Expert.V8.0.6.1軟件以總評(píng)OD值為因變量，對(duì)自變量進(jìn)行分析，所得回歸方程為：Y=0.79-0.020A+0.041B+0.027C-0.047AB+0.06AC+0.00763BC-0.018A2-0.062B2-0.06C2（r=0.9193），相關(guān)系數(shù)r較大，表明模型具有較高的顯著性，可看出方程預(yù)測(cè)性和擬合度較好，可用此模型對(duì)知母鹽炙工藝進(jìn)行預(yù)測(cè)分析。由方差分析表，可看出B加熱溫度對(duì)總評(píng)OD影響較為顯著。

3.3 效應(yīng)面優(yōu)化與預(yù)測(cè)性評(píng)價(jià)

根據(jù)回歸方程式，運(yùn)用星點(diǎn)設(shè)計(jì)的相關(guān)軟件得到3D圖像，再由圖3得到最優(yōu)區(qū)域，并篩選出最佳炮制工藝。由圖3可以得知，在A、B因素中，隨著因素B溫度的增加，而曲面變陡峭；而A鹽量的影響相對(duì)變小。而在A、C因素中，隨著A鹽量和C炒制時(shí)間的增加，曲面走向變得平緩；在B、C方面，隨著B(niǎo)溫度的增加，OD值也隨之增加，而使得曲面變陡，隨著C炒制時(shí)間的增加，使得OD值得變化變得平緩。由以上的分析可知，B炒制溫度對(duì)其影響較大，而B(niǎo)、C影響較小。采用軟件Design-Expert 8.0.7.1中Central Composite響應(yīng)面法得到的最佳工藝參數(shù)為用鹽量3.37g，炒制溫度150.06℃，炒制時(shí)間為12.07min。根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，結(jié)合生產(chǎn)實(shí)際，確定鹽知母炮制工藝為：加鹽量3.5g/100g、溶解鹽用水量為30mL/100g、悶潤(rùn)時(shí)間為2～4h，炒制溫度為（150±10）℃，炒制時(shí)間為12min。并對(duì)此工藝進(jìn)行驗(yàn)證。證明此炮制工藝可行，可用于實(shí)際生產(chǎn)。

表4 模型擬合度

4 討論

星點(diǎn)設(shè)計(jì)（central composite design，CCD）是一種新型的試驗(yàn)設(shè)計(jì)方法，是由數(shù)學(xué)方法和統(tǒng)計(jì)學(xué)方法結(jié)合而產(chǎn)生的，既二者的結(jié)合體[11]。盡管效應(yīng)對(duì)因素的真實(shí)效應(yīng)面不可能完全用數(shù)學(xué)模型表達(dá)，但可以用某一數(shù)學(xué)模型近似進(jìn)行模擬，依據(jù)該模型描繪的效應(yīng)面進(jìn)行條件優(yōu)選，效應(yīng)面法使用起來(lái)直觀、方便、效果較好。近幾年來(lái)，CCD設(shè)計(jì)效應(yīng)面法在藥學(xué)領(lǐng)域的范圍內(nèi)具有非常好的推廣應(yīng)用前景與價(jià)值[12-13]。本研究運(yùn)用星點(diǎn)設(shè)計(jì)-效應(yīng)面法，進(jìn)一步對(duì)鹽制知母的炮制工藝進(jìn)行優(yōu)化，為其在今后的生產(chǎn)中提供更加合理的依據(jù)。

圖3 各因素對(duì)總評(píng)OD影響的三維效應(yīng)面

本研究以鹽知母降血糖作用為切入點(diǎn)，進(jìn)行了知母、鹽知母的化學(xué)成分含量比較及HPLC-UV、HPLC-CAD指紋圖譜比較，對(duì)知母炮制前后知母皂苷及芒果苷的含量進(jìn)行對(duì)比時(shí)發(fā)現(xiàn)，知母鹽炙后知母皂苷BⅡ、知母皂苷BⅢ和知母皂苷AⅢ含量升高，知母皂苷E的含量降低，并對(duì)幾種皂苷之間的轉(zhuǎn)化做了推測(cè)，知母皂苷E為受熱發(fā)生裂解生成知母皂苷BII，知母皂苷BII再發(fā)生脫水反應(yīng)，生成知母皂苷BIII和知母皂苷A III[14]。對(duì)知母中雙苯吡酮類(lèi)成分的研究發(fā)現(xiàn)鹽炙后新芒果苷、異芒果苷的含量減少，芒果苷的含量增加。分析了新芒果苷、芒果苷在炮制過(guò)程中可能發(fā)生的轉(zhuǎn)化，即新芒果苷的糖苷基（O-glc）在發(fā)生斷裂，轉(zhuǎn)化成芒果苷，使芒果苷含量升高[15]。

此次進(jìn)行工藝優(yōu)化研究，我們考慮從生產(chǎn)實(shí)際出發(fā)，單因素考察結(jié)合經(jīng)驗(yàn)，采用星點(diǎn)設(shè)計(jì)效應(yīng)面法，以加鹽量、炒制時(shí)間、炒制溫度為影響因素，結(jié)合炮制機(jī)理，結(jié)合活性成分在炮制過(guò)程中的變化規(guī)律，以知母皂苷AⅢ、知母皂苷BⅢ、芒果苷含量為考察指標(biāo)，確定鹽知母炮制工藝研究。

[1]國(guó)家藥典委員會(huì).中國(guó)藥典.一部[S].北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2015：212-213.

[2] 賈天柱.中藥炮制學(xué)[M].上海：上?？茖W(xué)技術(shù)出版社，2008：196.

[3] 丁安偉.中藥炮制學(xué)[M].北京：高等教育出版社，2007：232.

[4] 龔千鋒.中藥炮制學(xué)[M].北京：中國(guó)中醫(yī)藥出版社，2007：199.

[5] 張爽，高雁，王曉婷，等.知母鹽炙前后體外降血糖作用的研究 [J].現(xiàn)代藥物與臨床，2016，31（12）：1883-1886.

[6] 吳瑩，高慧，宋澤璧.知母鹽制前后對(duì)α-葡萄糖苷酶抑制作用比較[J].醫(yī)學(xué)研究雜志，2013，43（10）：40-42.

[7] 吳瑩，高慧，宋澤璧.鹽知母不同有效部位改善鏈脲佐菌素誘導(dǎo)2型糖尿病大鼠糖代謝的研究[J].現(xiàn)代藥物與臨床，2016，31（3）：280-283.

[8] 高慧.鹽知母炮制原理研究[D].沈陽(yáng)：遼寧中醫(yī)藥大學(xué)，2010.

[9] 宋澤璧，吳瑩，高慧.HPLC法測(cè)定鹽炙前后知母中新芒果苷、芒果苷和異芒果苷[J].現(xiàn)代藥物與臨床，2015，30（2）：145-148.

[10] 丁黎艷，郭晏華，黃婷，等.星點(diǎn)設(shè)計(jì)-效應(yīng)面法優(yōu)化補(bǔ)骨脂炮制工藝 [J].中國(guó)現(xiàn)代中藥，2013，15，（1）：56-60.

[11] 劉艷杰，項(xiàng)榮武 .中國(guó)現(xiàn)代應(yīng)用藥學(xué)雜志，2007，24，（6）：455-457.

[10] WU W，MEIL，CHEN J，et al.Optimization formulation of rizatriptan benzo are tablet by a central composite design/response surface methodology[J].Fudan Univ J Med Sci（復(fù)旦學(xué)報(bào)醫(yī)學(xué)版），2003，30（4）：381-383，387.

[13] Hao YZ，Lu CT，Meix G.Application of response surface methodology combined with central composite design in optimization of synchronization in Taxus chinensis cells[J].Chin J Biochemi Pharm（中國(guó)生化藥物雜志），2004，25（5）：291-293.

[14] 吳瑩.鹽知母增強(qiáng)降血糖作用機(jī)理研究[D].沈陽(yáng)：遼寧中醫(yī)藥大學(xué)，2015.

[15] 宋澤璧.鹽知母降血糖物質(zhì)基礎(chǔ)研究[D].沈陽(yáng)：遼寧中醫(yī)藥大學(xué)，2015.