張麗+艾霞+彭頁

[摘要] 目的 探討電針不同腧穴配伍對(duì)心肌缺血損傷大鼠心肌功能的影響。 方法 按隨機(jī)數(shù)字表法將60只雄性Wistar大鼠分為正常組、模型組、腧穴配伍組、常規(guī)配穴組四組，每組各15只。造模方法：鹽酸異丙腎上腺素皮下注射（5 mL/kg）。正常組注射同等劑量的0.9%氯化鈉溶液，1次/d，連續(xù)1周；模型組造模；腧穴配伍組取造模成功的大鼠，電針其雙內(nèi)關(guān)穴、雙足三里穴及關(guān)元穴，每天各1次，連續(xù)2周；常規(guī)配穴組取雙內(nèi)關(guān)、雙神門及膻中，余法同腧穴配伍組。觀察各組大鼠心電圖變化及心肌超氧化物歧化酶（SOD）活性、谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）活性和丙二醛（MDA）含量。 結(jié)果 與正常組比較，模型組心率（HR）加快明顯，S-T段振幅抬高顯著，差異有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.01）；電針干預(yù)后，腧穴配伍組及常規(guī)配穴組HR有所減慢，S-T段振幅抬高降低，與模型組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05）。與正常組比較，模型組大鼠心肌SOD活性、GSH-Px活性顯著降低，MDA含量顯著升高，差異有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.01）；電針干預(yù)后，腧穴配伍組及常規(guī)配穴組大鼠心肌SOD活性、GSH-Px活性顯著升高，MDA含量降低，與模型組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05）；與常規(guī)配穴組比較，腧穴配伍組心肌SOD、GSH-Px活性升高，MDA含量降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05）。 結(jié)論 腧穴配伍針刺法具有很好的保護(hù)心肌缺血的效果，能夠有效減輕心肌細(xì)胞變性及心肌組織的損害，為臨床運(yùn)用針灸治療心肌缺血性疾病提供依據(jù)。

[關(guān)鍵詞] 腧穴配伍；電針；心肌缺血損傷；心肌功能

[中圖分類號(hào)] R245 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1673-7210（2018）01（c）-0134-04

[Abstract] Objective To explore the effect of different acupoints of electroacupuncture on myocardial function in rats with myocardial ischemia injury. Methods Sixty male Wistar rats were randomly divided into four groups by random number table method： normal group， model group， acupoint compatibility group， normal distribution group， with 15 rats in each group. Building methods： subcutaneous injection of Isoproterenol Hydrochloride （5 mL/kg） was given. Normal group： the same dose of 0.9% sodium chloride solution was injected， once a day， for one week. Model group was made the model. Acupoint compatibility group： the successful rats of the model were taken， and each day， the electric needle of the double “neiguan”， double “zusanli” and “guanyuan” were performed respectively for two weeks. Normal distribution group： "neiguan"， double "shenmen" and "danzhong" were performed respectively， the followed method was as the same as the acupoint compatibility group. The changes of electrocardiogram in rats， and the activities of superoxide dismutase （SOD）， glutathione peroxidase （GSH-Px） and malondialdehyde （MDA） were observed. Results Compared with normal group， the heart rate （HR） in model group was accelerated significantly， and the amplitude of S-T segment was significantly enhanced， the differences were highly statistically significant （P < 0.01）. After the electroacupuncture intervention， the HR of the acupoints in the acupoint compatibility group and normal distribution group was decreased， and the amplitude of S-T was decreased， which had statistically significant differences compared with those of model group （P < 0.05）. Compared with the normal group， the activities of myocardial SOD and GSH-Px in the model group were decreased significantly， and the content of MDA was increased significantly， the differences were highly statistically significant （P < 0.01）. After the electroacupuncture intervention， the activities of SOD and GSH-Px of the myocardium of the rats in the acupoint compatibility group and normal distribution group were significantly increased， and the content of MDA was decreased， which had statistically significant differences compared with those of model group （P < 0.05）. Compared with normal distribution group， the activities of myocardial SOD and GSH-Px in the acupoint compatibility group were significantly increased， and the content of MDA was decreased significantly， the differences were statistically significant （P < 0.05）. Conclusion Compatibility of acupuncture acupoints method has very good protection effect for myocardial ischemia， which can effectively reduce the myocardial cell degeneration and the myocardial tissue damage， and it can provide basis for clinical controlling the myocardial ischemic diseases with acupuncture.endprint

[Key words] Acupoint compatibility； Electroacupuncture； Myocardial ischemia injury； Myocardial function

心肌缺血是因心臟的血液灌注量小、心臟供氧能力弱而導(dǎo)致的心肌能量代謝異常，不能維持心臟正常運(yùn)行的一種病理特征[1]。心肌缺血的發(fā)生機(jī)制較為復(fù)雜，目前較為集中的觀點(diǎn)是自由基的大量產(chǎn)生、細(xì)胞內(nèi)鈣離子的超載、心肌細(xì)胞的凋亡、中性粒細(xì)胞的過度浸潤(rùn)、能量代謝的異常及內(nèi)皮細(xì)胞功能異常等均參與其發(fā)生[2-3]。中醫(yī)學(xué)認(rèn)為心肌缺血屬“胸痹心痛”的范疇，本虛標(biāo)實(shí)為其基本病機(jī)，以補(bǔ)虛瀉實(shí)為其治療原則[4]。多項(xiàng)研究顯示，內(nèi)關(guān)穴是歷代針灸醫(yī)案治療心胸疾病的首選要穴，電針“內(nèi)關(guān)”可保護(hù)缺血的心肌細(xì)胞[5-6]。本研究在已有文獻(xiàn)[7-8]的基礎(chǔ)上，以“內(nèi)關(guān)”為主穴瀉標(biāo)實(shí)，配伍“足三里”“關(guān)元”穴補(bǔ)本虛，并與對(duì)照常規(guī)配穴法進(jìn)行對(duì)比，觀察電針以“內(nèi)關(guān)”為不同腧穴配伍對(duì)心肌缺血損傷大鼠的治療效應(yīng)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及分組

Wistar大鼠60只，雄性，11～13周齡，體重180～220 g，SPF級(jí)，均購(gòu)自西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，合格證號(hào)：SCXK（陜）2016-0011，室溫條件下適養(yǎng)1周。按隨機(jī)數(shù)字表法將其分為正常組、模型組、腧穴配伍組、常規(guī)配穴組，每組各15只。本研究經(jīng)動(dòng)物倫理委員會(huì)審批通過。

1.2 儀器與試劑

主要儀器：BIOBASE TD-6M離心機(jī)（山東博科生物產(chǎn)業(yè)有限公司）；日立全自動(dòng)生化分析儀7600（羅氏）；BL-420F生物功能實(shí)驗(yàn)裝置（泰盟科技）；華佗牌Hans電針儀（深圳市百合醫(yī)療器械有限公司）；華佗牌毫針（蘇州醫(yī)療用品廠有限公司，0.25 mm×15 mm）。

主要試劑：鹽酸異丙腎上腺素（美國(guó)Sigma，批號(hào)：201621）；肌鈣蛋白T（cTnT）試劑盒（美國(guó)Sigma，批號(hào)：201605）；超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）、丙二醛（MDA）試劑盒（南京建成，批號(hào)：A001、A003、A005）。

1.3 模型制作

取鹽酸異丙腎上腺素100 mg溶于100 mL 0.9%氧化鈉溶液中，以5 mL/kg皮下注射大鼠背部來制作動(dòng)物心肌缺血損傷模型，1次/d，連續(xù)1周。以心電圖S-T段變異幅度≥0.1 mV為評(píng)價(jià)模型成功的標(biāo)準(zhǔn)。

1.4 方法

正常組：于正常大鼠背部皮下注射0.9%氯化鈉溶液（5 mL/kg），1次/d，連續(xù)1周；模型組：制作心肌缺血?jiǎng)游锬Ｐ停浑蜓ㄅ湮榻M：制作心肌缺血?jiǎng)游锬Ｐ?，取造模成功的大鼠，電針其雙內(nèi)關(guān)穴、雙足三里穴及關(guān)元穴，每天各1次，后進(jìn)行相同于正常組的皮下注射，連續(xù)2周；常規(guī)配穴組：制作心肌缺血?jiǎng)游锬Ｐ?，每天電針雙“內(nèi)關(guān)”、雙“神門”及“膻中”各1次，后進(jìn)行相同于正常組的皮下注射，連續(xù)2周。

1.5 取穴及電針方法

參照《小動(dòng)物針灸技法手冊(cè)》[9]及《大鼠穴位圖譜的研制》[10]取穴。內(nèi)關(guān)穴：大鼠前肢橈骨內(nèi)側(cè)，與尺骨接合部下方1/3處，即離腕關(guān)節(jié)3 mm左右的尺橈骨縫間，腕橫紋上3～4 mm，針刺深度直刺2～3 mm，用毫針直刺穿皮達(dá)筋間，捻轉(zhuǎn)60 s；足三里穴：在膝關(guān)節(jié)下的外側(cè)，腓骨頭下約5 mm，直刺3～5 mm即可；關(guān)元穴：取大鼠臍下正中2～5 mm，即臍與恥骨聯(lián)合上緣中點(diǎn)連線的上3/5與下2/5的交界處，呈45°角向劍突方向斜刺3 mm；神門穴：前肢腕橫紋側(cè)，直刺約2 mm；膻中穴：動(dòng)物兩乳連線中間點(diǎn)位置，即前胸正中部，呈約15°角斜刺2 mm[11-15]。

腧穴配伍組和常規(guī)配穴組分別取穴，毫針針刺后接電針儀。其中腧穴配伍組同側(cè)內(nèi)關(guān)穴和足三里穴配為一組電極；淺刺腹部關(guān)元穴附近處皮膚，作為輔助電極，與關(guān)元穴配為一組電極。常規(guī)配穴組同側(cè)內(nèi)關(guān)穴和神門穴配為一組電極；淺刺胸部膻中穴附近皮膚淺刺，作為輔助電極，與膻中穴配為一組電極。連續(xù)波，頻率80次/min，強(qiáng)度1 mA，通電15 min，以大鼠肢體和胸腹部有明顯震顫為度，1次/d，連續(xù)3周。

1.6 觀察指標(biāo)

各組大鼠心電圖的變化情況：具體操作：干預(yù)后第2天，10%水合氯醛（0.35 mL/100 g）進(jìn)行大鼠麻醉，仰臥位固定于操作臺(tái)，用針狀電極刺入動(dòng)物肢體皮下，參考人體標(biāo)準(zhǔn)導(dǎo)聯(lián)Ⅱ連接的方法，將左下肢接正極，右上肢接負(fù)極，行泰盟BL-420F生物功能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)檢測(cè)所有大鼠的心率（HR）及S-T段電壓的改變情況。

心肌SOD、GSH-Px和MDA檢測(cè)：左心室其余心肌組織剪碎液氮冷凍，每組各取心肌組織0.2 g溶于9倍體積的0.9%氯化鈉溶液中研磨；研磨液離心，3000～4000 r/min，10 min，取上清液；心肌組織總SOD活性、GSH-Px活性、MDA含量的檢測(cè)按照酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定（ELISA）法以試劑盒說明書進(jìn)行操作。

1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 20.0對(duì)所得數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，多組間比較采用方差分析，組間兩兩比較采用LDS-t檢驗(yàn)。以P < 0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

在實(shí)驗(yàn)過程中，除模型組死亡1只外，余下各組均無動(dòng)物死亡。

2.1 各組HR和心電圖S-T段振幅結(jié)果比較

與正常組比較，模型組HR加快明顯，S-T段振幅抬高顯著（P < 0.01）；電針干預(yù)后，腧穴配伍組及常規(guī)配穴組HR有所減慢，S-T段振幅抬高降低，與模型組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05）。見表1。

2.2 各組大鼠心肌總SOD活性、GSH-Px活性、MDA含量測(cè)定結(jié)果比較endprint

與正常組比較，模型組大鼠心肌SOD活性、GSH-Px活性顯著降低，MDA含量顯著升高（P < 0.01）；電針干預(yù)后，腧穴配伍組及常規(guī)配穴組大鼠心肌SOD活性、GSH-Px活性升高，MDA含量降低，與模型組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05）；與常規(guī)配穴組比較，腧穴配伍組心肌SOD活性、GSH-Px活性升高，MDA含量降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05）。見表2。

3 討論

心肌缺血一旦發(fā)生，會(huì)嚴(yán)重影響到心室復(fù)極正常化進(jìn)行，缺血區(qū)相關(guān)導(dǎo)聯(lián)的S-T段會(huì)出現(xiàn)明顯的異常[16]，本結(jié)果中模型組大鼠的心電圖Ⅱ?qū)?lián)S-T段變異幅度達(dá)0.18 mV，提示心肌出現(xiàn)缺血損傷，造模成功。

心肌缺血在中醫(yī)辨證醫(yī)學(xué)中屬“心痛”“胸痹”，多為臟腑氣血不足、心脈失養(yǎng)、閉塞不暢所致。其病位在心，病性為標(biāo)實(shí)本虛。標(biāo)實(shí)者，多為勞逸失度、膏粱厚味、七情內(nèi)傷，致氣血所瘀不通后致痛；本虛者，多因久病體衰、稟賦有缺、營(yíng)血虛少，使得心之氣血不足[17-18]。本研究以中醫(yī)傳統(tǒng)的“治未病”理論作為依據(jù)，采用“標(biāo)本配穴”，即選用固護(hù)正氣的關(guān)元穴、足三里穴為本，以祛除邪氣的內(nèi)關(guān)穴為標(biāo)。

MDA是機(jī)體內(nèi)氧自由基作用于脂質(zhì)過氧化代謝的最終產(chǎn)物，其含量能反映細(xì)胞氧化損傷的程度[19-20]。SOD和GSH-Px是一類抗自由基損傷的活性酶，前者能反映機(jī)體清除氧自由基的能力，后者能保護(hù)細(xì)胞膜穩(wěn)定性，減輕線粒體膜脂質(zhì)過氧化程度和心肌線粒體不可逆損傷[21]。本研究提示心肌細(xì)胞受到氧自由基的過度攻擊，細(xì)胞脂質(zhì)過氧化程度較高，氧化損傷較為嚴(yán)重，與模型組電鏡顯示線粒體損傷的結(jié)果一致，再次從微觀角度證實(shí)心肌缺血模型制作成功。

不同腧穴配伍間的差異一直是基礎(chǔ)針灸學(xué)研究的重點(diǎn)，合理的腧穴配伍能提高針灸療效。標(biāo)本配穴法是根據(jù)中醫(yī)“治未病”理論提出的腧穴配伍理論?！氨尽奔凑龤庵?，“標(biāo)”即病邪之標(biāo)，“本”穴與“標(biāo)”穴配伍旨在扶正祛邪。本研究中所選的關(guān)元穴是元陰、元陽關(guān)藏出入之所，有補(bǔ)元?dú)?、益腎精、扶人體之功效；足三里為胃經(jīng)合穴和胃腑下合穴，發(fā)揮調(diào)理脾胃，補(bǔ)益氣生化血之功效。本研究中的兩穴相配，可調(diào)脾補(bǔ)腎、補(bǔ)益正氣。內(nèi)關(guān)穴為八脈交會(huì)穴之一，發(fā)揮寧心定智、理氣寬胸之效。

本研究中，注射鹽酸異丙腎上腺素之后，模型組大鼠心肌組織受損傷嚴(yán)重，這與心臟超聲及心肌病理檢測(cè)一致，且腧穴配伍可顯著升高心肌缺血大鼠心肌SOD活性、GSH-Px活性，降低MDA含量，提示腧穴配伍針刺法具有較好的保護(hù)心肌缺血的效果，電針標(biāo)本配穴可有效減輕心肌細(xì)胞變性及心肌組織的損傷，其機(jī)制可能是針灸通過調(diào)控氧自由基作用來改善心肌缺血，這為臨床運(yùn)用針灸治療心肌缺血性疾病提供理論基礎(chǔ)和科學(xué)依據(jù)。

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（收稿日期：2017-08-22 本文編輯：張瑜杰）endprint