田蜜+陳芳+賀建昌

[摘要] 目的 為了提高黃地吉仙片的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，建立高效液相色譜法（HPLC）測定其菟絲子含量，并對其進行重金屬及砷鹽的檢查。 方法 色譜柱Symmetry C18（5 μm，6 mm×150 mm）；流動相：乙腈-0.1%磷酸水（18∶82）；流速：1.0 mL/min；檢測波長：353 nm；進樣量10 μL。參考《中國藥典》（2010年）方法對重金屬、砷鹽進行雜質(zhì)限量檢查。 結(jié)果 金絲桃苷在2.0～100.0 μg/mL范圍內(nèi)，與峰面積呈良好的線性關(guān)系（R2 = 0.9998），平均回收率為75.61%。重金屬小于百萬分之十，砷鹽小于百萬分之二，與《中國藥典》（2010年）對中藥制劑重金屬、砷鹽的要求相符。 結(jié)論 HPLC測定金絲桃苷含量方法簡便，靈敏度高，重復(fù)性好，可用于黃地吉仙片中金絲桃苷的含量測定；黃地吉仙片的重金屬、砷鹽檢查符合要求，為臨床用藥安全提供了依據(jù)。

[關(guān)鍵詞] 黃地吉仙片；金絲桃苷；高效液相色譜法；含量；重金屬；砷鹽

[中圖分類號] R285.5 [文獻標(biāo)識碼] A [文章編號] 1673-7210（2018）01（c）-0122-04

[Abstract] Objective To improve the quality standard of Huangdi Jixian Tablets， high performance liquid chromatography （HPLC） method was established to detect the contents of hyperin and the contents of heavy metal and arsenic salt in Huangdi Jiexian Tablets were detected. Methods Symmetry C18 （5 μm， 6 mm×150 mm） column was used. The mobile phase contained acetonitrile and 0.1% phosphoric acid （18∶82）. The flow rate was 1.0 mL/min and the detection wavelength was 353 nm. The injection volume was 10 μL. In addition， the impurity of heavy metal and arsenic salt was also detected according to Chinese Pharmacopoeia （2010）. Results Within the range from 2.0 to 100.0 μg/mL， hyperin presented an ideal linear relationship with the peak areas （R2 = 0.9998）. The average recovery rate was 75.61%. Heavy metal was less than 10 parts per million and arsenic salt was less than 2 parts per million. These results conformed to the requirements of Chinese Pharmacopoeia （2010）. Conclusion HPLC method for determining the content of hyperin is simple， with high sensitivity and good repeatability， which can be used for the content determination of hyperin in Huangdi Jixian Tablets. The contents of heavy metal and arsenic salt are conformed to the requirement， which provides evidence for the safety of clinical medication.

[Key words] Huangdi Jixian Tablets； Hyperin； High performance liquid chromatography； Content； Heavy metal； Arsenic salt

黃地吉仙片為成都軍區(qū)昆明總醫(yī)院（以下簡稱“我院”）研發(fā)的醫(yī)院制劑，由人參、熟地、菟絲子、蒼術(shù)、雞血藤等藥材制成，具有健脾補腎、益氣養(yǎng)陰、活血化瘀、降糖消脂的功效，運用于非胰島素依賴型糖尿病，并可用于胰島素依賴型糖尿病的輔助治療。經(jīng)臨床使用多年，有顯著的效果及良好的安全性。原制劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中僅對君藥玄參、人參、佐藥大黃和使藥黃連、黃芪進行了薄層鑒別，無含量測定項，因此為更好地控制本制劑質(zhì)量，現(xiàn)對黃地吉仙片的原質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進行完善，參考相關(guān)文獻[1-10]，采用高效液相色譜法（HPLC）測定菟絲子中金絲桃苷的含量。經(jīng)方法學(xué)驗證，表明其方法簡便，重復(fù)性好，靈敏度高。參照《中國藥典》（2010年版）[11]重金屬檢查法和砷鹽檢查法及相關(guān)文獻[12-20]，對黃地吉仙片進行重金屬及砷鹽的檢查研究，以了解其重金屬及砷鹽是否超標(biāo)，為臨床用藥的安全提供依據(jù)。

1 儀器與試藥

WATERS高效液相色譜儀（2695-2487，美國waters）；電子天平（BP121S，德國賽多利斯）；超聲機（SY1200-T，上海聲源超聲波儀器設(shè)備有限公司）；密理博純水機（Z00QSV001，德國默克密理博）。

鹽酸小檗堿（中國食品藥品檢定研究院，110713-201212，含量86.7%）；金絲桃苷（中國食品藥品檢定研究院，111521-201406，含量92.5%）；甲醇、磷酸為分析純；乙腈為色譜純；硝酸鉛（分析純）；酚酞指示劑；硫酸（分析純）；硝酸（分析純）；鹽酸（分析純）；醋酸鹽緩沖液（pH=3.5）；標(biāo)準(zhǔn)砷貯備液（100 μg/mL）；三氧化二砷（分析純）；氫氧化鈣（分析純）；碘化鉀（分析純）；氯化亞錫（分析純）；黃地吉仙片（我院生產(chǎn)，批號：150601、150602、150603）。endprint

2 方法與結(jié)果

2.1 含量測定

2.1.1 色譜條件

色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；流動相為乙腈-0.1%磷酸水（18∶82）；檢測波長為353 nm。理論板數(shù)按金絲桃苷峰計應(yīng)不低于5000。

2.1.2 樣品制備

2.1.2.1 對照品溶液的制備 取對照品金絲桃苷適量，精密稱定，用甲醇制成每1 mL含30 μg的溶液，即得。

2.1.2.2 供試品溶液的制備 取本品，研細，精密稱定6 g，加80%甲醇50 mL，稱重，超聲處理（功率250 W，頻率40 kHz）1 h，放冷，稱定重量，80%甲醇補足減少的重量，搖勻，濾過，續(xù)濾液用0.45 μm的微孔濾膜濾過，即得。

2.1.2.3 陰性對照溶液的制備 取不含菟絲子的陰性樣品按“1.2.2.2”同法制備。

2.1.2.4 檢測波長的選擇 將金絲桃苷對照品溶液（100 μg/mL）在200～400 nm下全掃，254.1 nm及353.2 nm有最大吸收。又因在353 nm下樣品的干擾峰最小，所以最終確定掃描波長為353 nm。與《中國藥典》（2010年版）[11]菟絲子項下一致。

2.1.3 專屬性試驗

取陰性對照樣品照含量測定方法進行試驗，色譜圖見圖1。結(jié)果表明，在對照品主峰相應(yīng)位置上陰性對照樣品無色譜峰，樣品與對照品主峰保留時間一致，說明該項檢測專屬性良好。

2.1.4 線性關(guān)系考察

精密稱定適量金絲桃苷對照品，用甲醇配置成2.0、5.0、10.0、20.0、50.0、100.0 μg/mL的對照品溶液，注入高效液相色譜儀，進行含量測定。以峰面積（A）為縱坐標(biāo)（Y），金絲桃苷的濃度（μg/mL）為橫坐標(biāo)（X），繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到回歸方程：Y = 20455X + 31 162，R2 = 0.9998。結(jié)果顯示，黃地吉仙片金絲桃苷含量在2.0～100.0 μg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.1.5 精密度試驗

取濃度為20 μg/mL的金絲桃苷對照品溶液連續(xù)測定6次，結(jié)果見表1。結(jié)果RSD%為0.24%，小于2%。表明該法精密度良好。

2.1.6 重復(fù)性試驗

取同一批號（150601）樣品6份，按照“1.2.2.2”項下供試品制備方法制備測定，結(jié)果見表2。RSD為0.83%，小于2%。表明該法重復(fù)性良好。

2.1.7 加樣回收試驗

精密稱取同一批（150601）樣品6份，分別加入一定量的金絲桃苷對照品，按照“1.2.2.2”項下供試品溶液制備方法制備，各取10 μL進樣，計算加樣回收率，結(jié)果見表3，金絲桃苷的平均回收率為75.61%，RSD%為2.69%，表明該方法較準(zhǔn)確可靠。

2.1.8 穩(wěn)定性試驗

取供試品溶液（150601），分別在0、2、4、6、8 h進樣，記錄峰面積。結(jié)果峰面積平均值為433 579，RSD為0.42%。表明供試品溶液在8 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.1.9 含量測定

取3批樣品，每批樣品平行制樣2份進行含量測定，結(jié)果見表4。

2.2 重金屬及砷鹽檢查

2.2.1 檢測方法

參照《中國藥典》（2010年版）[11]一部附錄重金屬檢查法（IXE）、砷鹽檢查法（IXF），進行三批樣品中重金屬和砷鹽的測定，并按測定方法制備儀器空白溶液及試劑，分別按照上述重金屬、砷鹽的檢查方法進行陰性空白樣品的測定。

2.2.2 樣品測定

2.2.2.1 重金屬檢查 取3批樣品，按上述方法測定，供試品溶液、空白對照溶液的顏色均比對照品溶液淺，測定結(jié)果見表5。

2.2.2.2 砷鹽檢查 取3批樣品，按上述方法測定，供試品及空白對照樣品的砷斑顏色均比標(biāo)準(zhǔn)砷斑淺，測定結(jié)果見表6、圖2。

3 討論

3.1 金絲桃苷的含量測定

從3批樣品測定結(jié)果看，含量最高為0.1594 mg/g，最低為0.1538 mg/g，平均值為0.1570 mg/g。本品每片重0.3 g，因此，將本品的金絲桃苷含量定為每片不得少于0.3 g×0.1570 mg/g×80%=0.03768 mg。本品每片含菟絲子以金絲桃苷計（C21H20O12），不得少于0.03 mg。

在含量測定中，對流動相乙腈-0.1%磷酸水的不同比例進行了考察，結(jié)果以乙腈-0.1%磷酸水（18∶82）為最佳，基線平穩(wěn)，金絲桃苷的色譜峰分離最好，峰形最好。

在質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提升過程中，首先對君藥人參進行了人參皂苷Re、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1的含量測定研究。實驗結(jié)果表明，在對照品出峰處，陰性樣品有干擾，因此將人參的含量測定排除，進行了菟絲子中金絲桃苷的研究。

3.2 重金屬及砷鹽的檢查研究

中藥新藥制劑若重金屬<10 ppm，砷鹽<2 ppm，可以不收入質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中[20]。因此未將此部分列入黃地吉仙片的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中。中藥重金屬及砷鹽的質(zhì)量控制在種植、制劑、炮制加工、貯藏與運輸?shù)热^程都應(yīng)重視。近些年來，環(huán)境污染越來越嚴(yán)重，要控制好中藥及其成方制劑的重金屬及砷鹽等超標(biāo)的情況，須從源頭抓起，因此我院在中藥自制制劑的原材料采購時嚴(yán)把關(guān)，并從輔料、生產(chǎn)、運輸?shù)榷鄠€環(huán)節(jié)控制，保證制劑的質(zhì)量和安全。

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（收稿日期：2017-10-02 本文編輯：張瑜杰）endprint