李艷林 黎亮 唐秀芳 吳秀娟

結(jié)核病發(fā)病率僅以每年1.5%的速度低速下降，仍是全球死亡率最高的十大疾病之一，嚴(yán)重威脅著人類的健康[1]。據(jù)世界衛(wèi)生組織的報道，2015年新發(fā)結(jié)核病患者為140萬例，結(jié)核病死亡患者數(shù)為140萬例[2]。流行病學(xué)研究顯示，全球約有1/3的人群感染過結(jié)核分枝桿菌(Mycobacteriumtuberculosis，MTB)，但僅有10%的感染者發(fā)展為活動性結(jié)核病。結(jié)核病的發(fā)病是MTB、宿主遺傳因素和環(huán)境因素共同影響的結(jié)果，宿主易感性在結(jié)核病的發(fā)生發(fā)展中起重要作用[3]。

目前，已有學(xué)者進(jìn)行了白細(xì)胞介素2(IL-2)和IL-6基因啟動子區(qū)域中的多態(tài)性位點(diǎn)與結(jié)核病易感性的關(guān)聯(lián)研究，但結(jié)論不一。為了客觀評價IL-2基因-330T/G和IL-6基因-174G/C與結(jié)核病易感性的關(guān)系，筆者采用Meta分析的方法，通過增大樣本量，對既往研究結(jié)果進(jìn)行系統(tǒng)、定量、綜合性分析，來增加結(jié)論的可信度，解決研究結(jié)果的不一致性。

材料和方法

1.文獻(xiàn)檢索策略：分別以“IL-2”或“Cytokine”或“Interleukine-2”和“TB”或“Tuberculosis”或“TB infection”，以及“Polymorphism”或“genotype”為關(guān)鍵詞，檢索數(shù)據(jù)庫PubMed、Medline、EMBase、Web of Science和Elsevier Science Direct中公開發(fā)表的IL-2與結(jié)核病易感性相關(guān)的病例-對照研究文獻(xiàn)。分別以“IL-6”或“Cytokine”或“Interleukine-6”和“TB”或“Tuberculosis”或“TB infection”，以及“Polymorphism”或“genotype”為關(guān)鍵詞，檢索公開發(fā)表的IL-6與結(jié)核病易感性相關(guān)的病例-對照研究文獻(xiàn)。檢索語種為“英語”。以“白細(xì)胞介素”“細(xì)胞因子”“結(jié)核”“多態(tài)性”和“易感性”為檢索詞，檢索1990年1月至2017年6月在萬方數(shù)據(jù)庫、中國知網(wǎng)(CNKI)和維普數(shù)據(jù)庫公開發(fā)表的IL-2、IL-6與結(jié)核病易感性相關(guān)的病例-對照研究文獻(xiàn)。檢索語種為“漢語”。初步檢索共獲得相關(guān)文獻(xiàn)573篇，根據(jù)納入排除標(biāo)準(zhǔn)剔除文獻(xiàn)561篇，最終納入文獻(xiàn)12篇[4-15]。

2.納入排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)納入標(biāo)準(zhǔn)：①研究內(nèi)容為結(jié)核病患者與健康對照者的IL-2基因-330T/G和(或)IL-6基因-174G/C位點(diǎn)多態(tài)性；②病例-對照研究，報告數(shù)據(jù)完整，文獻(xiàn)包含各個基因型的分布頻數(shù)；③有各基因型與結(jié)核病患病風(fēng)險性的OR(95%CI)值。(2)排除標(biāo)準(zhǔn)：①非隨機(jī)對照研究；②系統(tǒng)評價、綜述、病例報告等無法利用的文獻(xiàn)；③具體數(shù)據(jù)描述不清，僅有摘要或會議匯編，無法得到原始數(shù)據(jù)的資料；④重復(fù)報道的文獻(xiàn)取其一；⑤僅有基因型頻率，未提及基因型頻數(shù)的研究。

3.資料提取：由2名研究者分別獨(dú)立進(jìn)行文獻(xiàn)檢索，并評價所獲文獻(xiàn)，不同的檢索結(jié)果經(jīng)討論解決，最終達(dá)成一致。提取的信息包括：作者、發(fā)表年份、樣本量、研究對象所屬地區(qū)、納入研究的多態(tài)性位點(diǎn)的基因型頻率及等位基因頻率等。

4.文獻(xiàn)質(zhì)量評價：采用Begg檢驗(yàn)與Egger檢驗(yàn)評估納入研究文獻(xiàn)的發(fā)表偏倚，P<0.05提示可能存在發(fā)表偏倚。納入的所有研究根據(jù)Newcastle-Ottawa Scale(NOS)原則進(jìn)行評估，評分≥7分提示文獻(xiàn)質(zhì)量較好。

5.統(tǒng)計(jì)學(xué)分析：運(yùn)用Stata 12.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，采用綜合定量分析并繪制Meta分析的森林圖。對各研究結(jié)果的異質(zhì)性進(jìn)行檢驗(yàn)，若各研究間異質(zhì)性差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，則采用固定效應(yīng)模型進(jìn)行數(shù)據(jù)合并；若各研究間異質(zhì)性差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，則采用隨機(jī)效應(yīng)模型進(jìn)行數(shù)據(jù)合并。計(jì)算OR(95%CI)值評價IL-2基因-330T/G 和IL-6基因-174G/C多態(tài)性與結(jié)核病易感性的關(guān)系，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié) 果

1.基本情況：納入的12篇文獻(xiàn)中，累計(jì)病例組2416例，健康對照組3474名。納入文獻(xiàn)中研究對象為亞洲人群的有6篇，歐洲人群的有4篇，美洲人群的有2篇。納入文獻(xiàn)基本信息特點(diǎn)見表1。本研究納入的12篇文獻(xiàn)采用NOS系統(tǒng)進(jìn)行評分，均≥7分。經(jīng)Begg檢驗(yàn)與Egger檢驗(yàn)，未發(fā)現(xiàn)各項(xiàng)研究間存在明顯發(fā)表偏倚，因此認(rèn)為所納入文獻(xiàn)質(zhì)量較高。

2.異質(zhì)性分析：將收集的文獻(xiàn)資料根據(jù)不同地區(qū)進(jìn)行異質(zhì)性分析。IL-2基因-330T/G位點(diǎn)各研究間均存在異質(zhì)性，且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(圖1顯示為-330T/G等位基因模型異質(zhì)性分析：I2=70.3%，P<0.05)，采用隨機(jī)效應(yīng)模型進(jìn)行Meta分析。IL-6 基因-174G/C位點(diǎn)各研究間存在一定的異質(zhì)性，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(圖2為-174G/C等位基因模型異質(zhì)性分析：I2=18.2%，P>0.05)，故采用固定效應(yīng)模型。

3. Meta分析結(jié)果：IL-2基因-330T/G位點(diǎn)納入研究共8篇，病例組971 例，對照組1519名。Meta分析結(jié)果顯示，IL-2基因-330T/G多態(tài)性可能與結(jié)核病患病風(fēng)險降低有關(guān)(T對G：OR=0.75，95%CI=0.59～0.95，P=0.019)。亞組分析顯示，-330T等位基因與歐洲人群結(jié)核病患病風(fēng)險降低有關(guān)(T對G：OR=0.55，95%CI=0.31～0.98，P=0.042)，見表2、圖1。

注NOS：Newcastle-Ottawa Scale量表；HWE：Hardy-Weinberg平衡

I2為異質(zhì)性部分在總變異中所占的比重；分組分析時美洲組參考文獻(xiàn)僅1篇，故無I2和P值數(shù)據(jù)圖1 白細(xì)胞介素2基因-330T/G等位基因模型森林圖

地區(qū)等位基因模型(T對G)純合子模型(TT對GG)雜合子模型(TG對GG)顯性模型(TT+TG對GG)隱性模型(TT對TG+GG)OR(95%CI)值P值OR(95%CI)值P值OR(95%CI)值P值OR(95%CI)值P值OR(95%CI)值P值總體075(059～095)0019057(032～102)0056097(056～167)0902077(047～125)0290062(042～093)0020亞洲081(060～110)0174066(028～154)0331083(032～216)0702078(032～191)0581074(050～110)0134歐洲055(031～098)0042036(013～100)0049108(060～198)0791066(038～113)0127036(012～105)0061美洲102(074～140)0927113(056～227)0728123(061～250)0566118(060～229)0634096(063～147)0857

IL-6基因-174G/C位點(diǎn)納入研究共9篇，病例組1445例，對照組1955名。Meta分析結(jié)果顯示，IL-6基因-174G/C多態(tài)性可能與結(jié)核病患病風(fēng)險增加相關(guān)(G對C：OR=1.40，95%CI=1.21～1.62，P<0.01；GG對GC：OR=1.98，95%CI=1.36～2.87，P<0.01；GG+GC對CC：OR=1.75，95%CI=1.22～2.52，P=0.002；GG對GC+CC：OR=1.44，95%CI=1.21～1.72，P<0.01)。亞組分析顯示，-174G等位基因與美國人群(G對C：OR=1.65，95%CI=1.28～2.13，P<0.01；GG對GC：OR=2.64，95%CI=1.39～5.01，P=0.003；GG+GC對CC：OR=2.20，95%CI=1.18～4.12，P=0.014；GG對GC+CC：OR=1.76，95%CI=1.28～2.41，P<0.01)和亞洲人群(G對C：OR=1.40，95%CI=1.13～1.72，P=0.002；GG對GC：OR=2.15，95%CI=1.17～3.92，P=0.013；GG+GC對CC：OR=1.85，95%CI=1.03～3.32，P=0.040；GG對GC+CC：OR=1.43，95%CI=1.12～1.83，P=0.005)結(jié)核病患病風(fēng)險增加有關(guān)，見表3、圖2。

4.發(fā)表偏倚分析：各研究間均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義上的發(fā)表偏倚，結(jié)果具有一定的可信度(圖3，4)。

I2為異質(zhì)性部分在總變異中所占的比重圖2 白細(xì)胞介素6基因-174G/C等位基因模型森林圖

地區(qū)等位基因模型(G對C)純合子模型(GG對CC)雜合子模型(GC對GG)顯性模型(GG+GC對CC)隱性模型(GG對GC+CC)OR(95%CI)值P值OR(95%CI)值P值OR(95%CI)值P值OR(95%CI)值P值OR(95%CI)值P值總體140(121～162)<001198(136～287)<001146(100～214)0049175(122～252)0002144(121～172)<001亞洲140(113～172)0002215(117～392)0013151(083～275)0179185(103～332)0040143(112～183)0005歐洲109(079～150)0594125(062～252)0528123(060～253)0573125(064～246)0518106(070～161)0773美洲165(128～213)<001264(139～501)0003163(084～315)0149220(118～412)0014176(128～241)<001

縱坐標(biāo)為OR的對數(shù)值，橫坐標(biāo)為log[OR]的標(biāo)準(zhǔn)誤圖3 白細(xì)胞介素2等位基因模型納入分析文獻(xiàn)Begg檢驗(yàn)發(fā)表偏倚圖

縱坐標(biāo)為OR的對數(shù)值，橫坐標(biāo)為log[OR]的標(biāo)準(zhǔn)誤值圖4 白細(xì)胞介素6等位基因模型納入分析文獻(xiàn)Begg檢驗(yàn)發(fā)表偏倚圖

討 論

大量研究證實(shí)，細(xì)胞因子在結(jié)核病的發(fā)展中發(fā)揮著重要的作用。肺結(jié)核的易感性及其疾病的進(jìn)展可能是不同染色體的多個等位基因共同作用的結(jié)果[16]。細(xì)胞因子基因中的多態(tài)性影響基因的轉(zhuǎn)錄表達(dá)，從而導(dǎo)致了細(xì)胞因子之間的個體差異[17]。

IL-2和IL-6作為細(xì)胞因子共同作用以促進(jìn)機(jī)體對MTB的免疫應(yīng)答[18-19]。IL-2在感染初期通過效應(yīng)細(xì)胞擴(kuò)增產(chǎn)生的γ干擾素在抗結(jié)核免疫中起重要作用。此外，在感染后期IL-2通過控制炎癥反應(yīng)促進(jìn)調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的生長，并延長其存活時間[20]。IL-6作為關(guān)鍵的促炎細(xì)胞因子，在活動性肺結(jié)核的發(fā)展中發(fā)揮作用，促進(jìn)結(jié)核肉芽腫的形成，并誘導(dǎo)感染MTB的巨噬細(xì)胞凋亡[21]。結(jié)核病患者IL-2和IL-6的血清水平明顯升高，揭示IL-2和IL-6可能作為結(jié)核病的潛在生物標(biāo)志物[22]。

從本研究結(jié)果可看出，歐洲人群的IL-2基因-330T/G等位基因模型中攜帶等位基因T者結(jié)核病患病率低于攜帶等位基因G者，提示IL-2基因-330T/G的T等位基因可能降低歐洲人群結(jié)核病患病風(fēng)險。IL-6基因-174G/C與亞洲和美洲人群結(jié)核病患病風(fēng)險增加有明顯相關(guān)性，提示IL-6基因-174G/C的G等位基因可能增加亞洲和美洲人群結(jié)核病患病風(fēng)險。

Mao等[23]通過Meta分析發(fā)現(xiàn)，IL-6基因-174G/C多態(tài)性與亞洲人結(jié)核病風(fēng)險的增加明顯相關(guān)。筆者經(jīng)過Meta分析不僅發(fā)現(xiàn)-174G/C基因型的存在與亞洲人群結(jié)核病患病風(fēng)險增加有關(guān)，同時還和美洲人群結(jié)核病患病風(fēng)險增加有關(guān)。究其原因，可能為樣本量的大小及納入文獻(xiàn)量的不同導(dǎo)致的Meta分析結(jié)果的差異。

文獻(xiàn)質(zhì)量評價結(jié)果顯示，本次Meta分析納入文獻(xiàn)的質(zhì)量較高，其結(jié)果也具有一定的可信度，但本研究也存在一定的局限性。首先，本次分析中，4項(xiàng)研究[4-5,10-11]中對照的基因型分布不符合HWE，表明這些研究也可能導(dǎo)致異質(zhì)性。其次，所收集的研究數(shù)量較少。第三，亞組分析和Meta回歸分析受到限制，因?yàn)橐恍┭芯繘]有提供有關(guān)年齡、性別和其他可能與結(jié)核病患病風(fēng)險相關(guān)的全面信息。因此，上述結(jié)論仍需更多高質(zhì)量、大規(guī)模的研究進(jìn)一步證實(shí)。

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