熊克宮 柯坤宇 孔金峰 陳麗芳

自身免疫性肝炎（AIH）是一種自身免疫反應(yīng)所介導(dǎo)的慢性肝損傷，病因和發(fā)病機(jī)制仍未闡明[1]。程序性死亡因子配體1（PD-L1）通過與其受體相互作用，從而介導(dǎo)負(fù)性共刺激信號，與多種自身免疫性疾病密切相關(guān)[2]。但目前關(guān)于PD-L1表達(dá)與1型AIH的相關(guān)性研究卻報道較少，現(xiàn)研究探討1型AIH患者外周血CD4+、CD8+T細(xì)胞表面PD-L1表達(dá)情況及其與肝功能的相關(guān)性。

1 資料與方法

1.1 研究對象

我院2014年1月—2017年8月收治的62例1型AIH患者。AIH參考2010年美國肝病學(xué)會更新的AIH診治指南[3]。緩解是指癥狀消失，血清轉(zhuǎn)氨酶、膽紅素及IgG均正常，肝組織正?；驘o活動性肝硬化。另選取20例健康者為對照組。排除合并其他肝病者。

1.2 PD-L1表達(dá)的檢測

每例患者采取外周靜脈血5 ml，EDTA抗凝，6 h內(nèi)送檢。取100 μl全血分別加入2支試管中，各加入10 μl抗體，其中1支加入小鼠抗人PE-PD-L1、FITC-CD4、FITC-CD8、CD3 PerCP-Cy5.5，另1支加入FITC-IgGl、PE-IgGl。避光室溫孵育30 min，加入2 ml紅細(xì)胞裂解液避光靜置10 min，加緩沖液洗滌3次，1%多聚甲醛重懸細(xì)胞，立刻上機(jī)流式細(xì)胞儀檢測。以CD3及CD4雙陽性圈定為CD4+T淋巴細(xì)胞，以CD3及CD8雙陽性圈定為CD8+T淋巴細(xì)胞，再測定CD4+、CD8+T淋巴細(xì)胞PD-L1陽性比例。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 研究對象一般資料

62例1型AIH患者，其中活動期43例，男性4例、女性39例，平均年齡（46.8±12.1）歲；緩解期19例，男2例、女17例，平均年齡（48.3±12.5）歲?；顒悠诮M血清轉(zhuǎn)氨酶、膽紅素、GGT、ALP、IgG較緩解期組均下降（均P＜0.05），而自身抗體譜及自身抗體滴度之間差異無統(tǒng)計學(xué)意義。

2.2 1型AIH患者外周血CD4+、CD8+T細(xì)胞PD-L1表達(dá)情況

外周血CD4+、CD8+T細(xì)胞PD-L1的表達(dá)率均高于對照組，且活動期組、緩解期組及對照組逐漸下降（均P＜0.05）（詳見表1）。

2.3 1型AIH患者外周血CD4+、CD8+T細(xì)胞PD-L1表達(dá)與肝功能的相關(guān)性

1型AIH患者外周血CD4+、CD8+T細(xì)胞PD-1表達(dá)與TBIL、ALT、AST及IgG水平均呈正相關(guān)（r=0.773、0.851、0.734、0.814，均P＜0.05）。

3 討論

AIH可能是各種誘發(fā)因素、自身抗原、遺傳因素和免疫調(diào)節(jié)之間錯綜復(fù)雜的相互作用而使自身免疫耐受被打破，由自身免疫異常導(dǎo)致的慢性免疫性肝損傷。目前，隨著醫(yī)務(wù)人員對AIH的不斷認(rèn)識，我國AIH診斷率呈逐年升高趨勢。

PD-L1是B7家族的重要成員，通過與受體PD-1相互作用，參與調(diào)控免疫應(yīng)答過程中效應(yīng)性T淋巴細(xì)胞的凋亡。PD-L陽性細(xì)胞能與表達(dá)PD-1的T、B淋巴細(xì)胞相互作用，降低T、B淋巴細(xì)胞免疫效應(yīng)并抑制其功能，避免外周組織受自身免疫系統(tǒng)的攻擊，從而防止疾病的發(fā)生發(fā)展[4]。國內(nèi)關(guān)于PD-1及其配體的研究主要集中在病毒性肝炎和風(fēng)濕性疾病[5-6]。亦有研究發(fā)現(xiàn)外周血PD-L1是1型AIH有用的診斷指標(biāo)，且能反應(yīng)1型AIH患者臨床特征?？吕び畹萚7-8]研究表明PD-L1在AIH患者肝組織中表達(dá)上調(diào)，并與患者臨床指標(biāo)密切相關(guān)。由此可見，PD-1/PD-L1介導(dǎo)的免疫功能異常在免疫相關(guān)性疾病中的作用已被人們所關(guān)注，但PD-L1在AIH中的研究仍較少。

表1 各組外周血T淋巴細(xì)胞PD-L1的表達(dá)率

研究發(fā)現(xiàn)1型AIH患者外周血CD4+、CD8+T細(xì)胞PD-L1的表達(dá)率高于對照組。這與理論上自身免疫性疾病患者PD-1/PD-L1的表達(dá)應(yīng)下調(diào)不符，推測T細(xì)胞PD-L1雖表達(dá)上調(diào)，但是表達(dá)PD-L1的T細(xì)胞的增殖能力反而下降，從而沒有達(dá)到下調(diào)免疫反應(yīng)及抑制自身免疫的作用，T細(xì)胞PD-L1高表達(dá)可能是機(jī)體的代償反應(yīng)。PD-L1在AIH活動期組患者外周血CD4+、CD8+T細(xì)胞的表達(dá)率高于緩解期組。提示免疫抑制劑治療可能通過提高表達(dá)PD-L1的CD4+、CD8+T細(xì)胞的增殖能力，使PD-L1的表達(dá)下調(diào)而發(fā)揮作用。此外，本研究亦發(fā)現(xiàn)1型AIH患者外周血CD4+、CD8+T細(xì)胞PD-L1表達(dá)與TBIL、ALT、AST及IgG水平均呈正相關(guān)。提示PD-L1可能參與了1型AIH疾病進(jìn)展。分析原因可能為特異性T細(xì)胞功能部分恢復(fù)后，機(jī)體免疫仍處于紊亂狀態(tài)，炎性反應(yīng)加重，肝細(xì)胞死亡增加，膽紅素代謝障礙，機(jī)體為恢復(fù)免疫耐受而過度表達(dá)PD-L1。

綜上所述，1型AIH患者外周血CD4+、CD8+T細(xì)胞PD-L1表達(dá)率增加，且與肝功能指標(biāo)密切相關(guān)，提示PD-L1參與了1型AIH的發(fā)生發(fā)展，其具體機(jī)制有待今后進(jìn)一步研究。

[1] KRAWITT EL. Autoimmune hepatitis[J]. N EngI J Med，2006，354（1）：54-66．

[2] Francisco LM，Sage PT，Sharpe AH. The PD-1 pathway in tolerance and autoimmunity[J]. Immunol Rev，2010（236）： 219-242.

[3] Manns MP，Czaja AJ，Gorham JD，et al. Diagnosis and management of auto-immune hepatitis[J]. Hepatology，2010，51（6）： 2193-2213.

[4] 魏欣，張野，白雪帆. PD-1及其配體與免疫調(diào)節(jié)[J]. 細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志，2008，24（7）：744-745，749.

[5] 謝冬英，林炳亮，陳鳳娟，等. 慢性乙型肝炎患者抗病毒治療過程中程序性死亡分子1及其配體表達(dá)的變化[J]. 中華肝臟病雜志，2010，18（9）：646-650.

[6] 謝長好，王元元，李志軍，等. 系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者外周血CD14 + 單核細(xì)胞表達(dá)PD-L1的分析和意義[J]. 細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志，2012，28（4）：429-432.

[7] 柯坤宇，熊克宮，魏大海，等. 自身免疫性肝炎患者肝組織程序性細(xì)胞死亡因子配體1的表達(dá)及其與肝功能的相關(guān)性[J]. 中華傳染病雜志，2016，34（10）：577-581.

[8] 柯坤宇，魏大海，陳麗芳，等. 自身免疫性肝炎患者肝組織程序性細(xì)胞死亡因子1及其配體1的表達(dá)及其與臨床的相關(guān)性[J]. 肝臟，2016，18（11）：911-914.