熊永紅 任凌雁 卓召振 王仕敏 姜敏敏 李貴芳 黃盛文

[摘要] 目的 探討貴陽(yáng)地區(qū)孕婦5，10-亞甲基四氫葉酸還原酶（MTHFR）C677T基因多態(tài)性分布特征，為科學(xué)補(bǔ)充葉酸提供依據(jù)。 方法 選取2017年1月～2018年6月貴州省人民醫(yī)院孕檢孕婦2644例，利用PCR-熒光探針?lè)z測(cè)MTHFR C677T位點(diǎn)基因型，統(tǒng)計(jì)分析貴陽(yáng)地區(qū)漢族與少數(shù)民族女性C677T基因多態(tài)性分布特征的差異，與已報(bào)到的其他地區(qū)漢族及少數(shù)民族女性比較。 結(jié)果 貴陽(yáng)地區(qū)漢族女性MTHFR C677T位點(diǎn)CC、CT、TT基因型頻率分別為37.8%、48.3%、13.9%，C、T等位基因頻率分別為61.9%、38.1%，與貴陽(yáng)地區(qū)苗族女性比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05），與布依族、侗族、土家族女性比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P > 0.05）;與江蘇、瓊海、南寧、惠州、西安、寧夏、煙臺(tái)、廊坊、長(zhǎng)春、尚志比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05），與成都、昆明比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P > 0.05），與柳州苗族、三江侗族、三亞黎族、延邊朝鮮族女性比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05），與巴東土家族、大理白族、銀川回族比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P > 0.05）。 結(jié)論 貴陽(yáng)地區(qū)孕婦MTHFR C677T基因多態(tài)性分布在不同民族之間以及與其他地區(qū)之間比較有一定差異，具有地區(qū)和民族特點(diǎn)。

[關(guān)鍵詞] 貴陽(yáng)地區(qū);亞甲基四氫葉酸還原酶;基因多態(tài)性;葉酸

[中圖分類號(hào)] R394.3 ? ? ? ? ?[文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A ? ? ? ? ?[文章編號(hào)] 1673-7210（2018）12（c）-0083-04

[Abstract] Objective To explore the distributions of 5， 10-methylenetetrahydrofolate reductase （MTHFR） C677T gene polymorphisms among pregnant women in Guiyang region， provide a theoretical basis of scientific supplementation of folic acid. Methods From January 2017 to June 2018， in Guizhou Provincial People′s Hospital， 2644 pregnant women in Guiyang region were selected， the genotype of MTHFR C677T was detected by PCR-fluorescence probing. The distribution of C677T gene polymorphisms among Han and the ethnic minority women in Guiyang were analyzed statistically， then the results were compared with data of Han women reported and other ethnic minorities women in other regions had been reported before. Results The frequencies of CC， CT and TT of MTHFR C677T genotypes were 37.8%， 48.3% and 13.9%， frequencies of C， T alleles were 61.9% and 38.1% of Han women in Guiyang region， these were compared with Miao women， the differences were statistically significant （P < 0.05）， compared with women of Buyi， Dong and Tujia nationalities， the differences were statistically significant （P < 0.05）， Compared with the Han women in Guiyang and the Han women in Jiangsu， Qionghai， Nanning， Huizhou， Xian， Ningxia， Yantai， Langfang， Changchun， Shangzhi， the differences were statistically significant （P < 0.05）， no statistically differences between Guiyang and Chengdu， Kunming （P > 0.05）. There were statistically significant differences between Miao women in Liuzhou， Dong women in Sanjiang， Li women in Sanya， Chaoxian women in Yanbian， the differences were statistically significant （P < 0.05）， no statistically differences with Tujia women in Badong， Bai women in Dali， Hui women in Yinchuang（P > 0.05）. Conclusion The distributions of MTHFR C677T genes polymorphisms among women of childbearing age in Guiyang are different in various minorities and areas， which have national specificity and regional specificity.

[Key words] Guiyang region; MTHFR; Gene polymorphism; Folic acid

葉酸是一種水溶性B族維生素，參與核酸、蛋白質(zhì)及磷脂的代謝，是細(xì)胞生長(zhǎng)和胚胎發(fā)育必需的物質(zhì)，缺乏會(huì)導(dǎo)致胎兒神經(jīng)管缺陷、唇腭裂、先天性心臟病等出生缺陷，孕婦出現(xiàn)妊娠期高血壓、先兆子癇和巨幼細(xì)胞性貧血等[1]。5，10-亞甲基四氫葉酸還原酶（MTHFR）是葉酸代謝通路中的關(guān)鍵酶，其基因多態(tài)性將會(huì)影響血清葉酸和同型半胱氨酸水平[2]，其突變可引起MTHFR活性降低，導(dǎo)致人體利用葉酸能力降低，引起不良妊娠結(jié)局和孕婦妊娠期疾病的發(fā)生[3]。

本研究以貴陽(yáng)地區(qū)漢族和少數(shù)民族孕婦為研究對(duì)象，對(duì)MTHFR C677T基因多態(tài)性位點(diǎn)進(jìn)行檢測(cè)，得出其在不同民族中的遺傳分布特征，通過(guò)與其他地區(qū)、民族女性比較，進(jìn)一步了解貴陽(yáng)地區(qū)女性MTHFR基因多態(tài)性，為當(dāng)?shù)卦袐D個(gè)體化的孕期保健提供參考依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料

本研究選取2017年1月～2018年6月于貴州省人民醫(yī)院孕檢貴陽(yáng)地區(qū)孕婦為研究對(duì)象，并排除籍貫非本市者，曾行腸胃切除手術(shù)或患嚴(yán)重消化系統(tǒng)疾病、肝腎功能不全者，患有冠心病、糖尿病、甲狀腺疾病、惡性腫瘤、血液系統(tǒng)或免疫系統(tǒng)疾病者。共納入2644例，其中漢族2263例，苗族81例，布依族79例，土家族67例，侗族60例，其他民族 94例（仡佬族21例，彝族20例，回族11例，白族、滿族、穿青人各7例，蒙古族、黎族各5例，水族4例，毛南族、壯族各2例，瑤族、傣族、羌族各1例。平均年齡為（30.4±5.9）歲。本研究經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，所有患者和/或家屬均知情同意并簽署知情同意書(shū)。

1.2 方法

抽取EDTA抗凝靜脈血2 mL，提取全血基因組DNA，利用熒光探針與DNA模板特異性結(jié)合的特點(diǎn)，使用SLAN90熒光定量PCR儀進(jìn)行檢測(cè)，通過(guò)報(bào)告熒光強(qiáng)度確定各樣本MTHFR C677T基因型。具體操作按MTHFR C677T檢測(cè)試劑盒（PCR-熒光探針?lè)ǎ┱f(shuō)明書(shū)（深圳泰樂(lè)德醫(yī)療有限公司）進(jìn)行。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

應(yīng)用SPSS 20.0軟件對(duì)研究人群進(jìn)行單核苷酸多態(tài)性（SNPs）的Hardy-Weinberg平衡進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，不同民族及地區(qū)間基因型及等位基因頻率比較采用χ2檢驗(yàn)，以P < 0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 貴陽(yáng)地區(qū)女性MTHFR C677T基因型和等位基因頻率分布特征

貴陽(yáng)地區(qū)漢族及少數(shù)民族女性MTHFR C677T基因型及等位基因分布詳見(jiàn)表1。Hardy-Weinberg遺傳平衡檢驗(yàn)均P > 0.05，表明樣本具有區(qū)域群體代表性。貴陽(yáng)地區(qū)漢族MTHFR C677T基因型及等位基因頻率與苗族女性比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05），漢族女性MTHFR C677位點(diǎn)的CT、TT基因型頻率均高于苗族;與布依族、土家族、侗族及其他少數(shù)民族女性比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P > 0.05）。見(jiàn)表1。

2.2 不同地區(qū)漢族女性的比較

貴陽(yáng)地區(qū)漢族女性MTHFR C677T基因型和等位基因頻率與江蘇、瓊海、南寧、惠州、西安、銀川、煙臺(tái)、廊坊、長(zhǎng)春、尚志等地漢族女性比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05），與昆明、成都地區(qū)漢族女性比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P > 0.05）。見(jiàn)表2。

2.3 貴陽(yáng)地區(qū)漢族女性和其他地區(qū)少數(shù)民族女性的比較

貴陽(yáng)地區(qū)漢族女性MTHFR C677T基因型和等位基因頻率與柳州苗族、三江侗族、三亞黎族、延邊朝鮮族女性比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05），與巴東土家族、大理白族、銀川回族女性比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P > 0.05）。見(jiàn)表3。

3 討論

我國(guó)是出生缺陷高發(fā)國(guó)家，出生缺陷發(fā)生率約為5.6%，每年新增出生缺陷數(shù)90萬(wàn)～100萬(wàn)例[22]。貴陽(yáng)是我國(guó)出生缺陷高發(fā)省市之一，貴州省2017年出生缺陷率為124/10 000，低于全國(guó)平均水平，但仍高于東部地區(qū)。MTHFR在葉酸和同型半胱氨酸代謝過(guò)程中發(fā)揮重要作用，與胎兒先天畸形、自然流產(chǎn)、染色體異常、腫瘤及心腦血管疾病有密切關(guān)系[23-24]。

MTHFR基因多態(tài)性在不同國(guó)家、地區(qū)及民族分布存在差異，但貴陽(yáng)地區(qū)目前還尚未有大樣本人群關(guān)于MTHFR C667T基因多態(tài)性分析報(bào)道。本研究選取2644例貴陽(yáng)女性作為研究對(duì)象，分析發(fā)現(xiàn)貴陽(yáng)漢族和苗族女性MTHFR C667T基因多態(tài)性分布差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，漢族女性CT/TT突變基因型頻率及突變T等位基因頻率均高于苗族女性，這種差異可能與人群對(duì)多種疾病的群體易感性有關(guān)。貴陽(yáng)地區(qū)漢族女性MTHFR C667T基因型和等位基因頻率與當(dāng)?shù)夭家雷濉⑼良易?、侗族女性比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。由于少數(shù)民族樣本量較少，還需進(jìn)一步增加樣本量以明確不同民族間的差異。

中國(guó)地區(qū)MTHFR C667T 純合突變TT基因型及突變T等位基因頻率在地域分布上呈現(xiàn)北高南低的特征[25]，這與我國(guó)神經(jīng)管缺陷發(fā)病率北高南低的情況相一致。本研究顯示貴陽(yáng)漢族女性MTHFR C677T基因型和等位基因頻率與其他地區(qū)漢族女性比較大致符合該特點(diǎn)，與瓊海、南寧、惠州、江蘇、西安、銀川、煙臺(tái)、廊坊、長(zhǎng)春、尚志等地漢族女性比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P > 0.05）;貴陽(yáng)漢族女性MTHFR C667T 純合突變TT 基因型頻率高于瓊海、南寧及惠州，低于江蘇、西安、銀川、煙臺(tái)、廊坊、長(zhǎng)春、尚志（P < 0.05）;突變T等位基因頻率與純合突變TT基因型頻率從南到北逐漸上升的趨勢(shì)一致，提示該位點(diǎn)在貴陽(yáng)地區(qū)與這些地區(qū)有著不同的遺傳背景;與昆明和成都漢族女性比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P > 0.05），可能原因?yàn)橘F州、云南、四川三省地理位置毗鄰，生態(tài)環(huán)境、氣候條件及飲食習(xí)慣相似等因素，致使MTHFR C677T基因多態(tài)性分布無(wú)明顯差異。貴陽(yáng)漢族與其他地區(qū)少數(shù)民族女性比較，MTHFR C677T 基因型和等位基因頻率與柳州苗族、三江侗族、三亞黎族、延邊朝鮮族差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05），同樣符合自南向北逐漸升高的特點(diǎn)，基因多態(tài)性的地域、民族分布差異在一定層面上解釋了我國(guó)出生缺陷發(fā)病率南低北高的情況。

MTHFR C677T基因多態(tài)性在我國(guó)不同地區(qū)、不同民族之間存在差異，除了受遺傳因素的影響，可能與民族、地理環(huán)境、飲食習(xí)慣、氣候等因素有關(guān)[26-27]。這種基因多態(tài)性的差異將導(dǎo)致不同地區(qū)及人群葉酸利用和代謝能力的差異，研究表明[3]MTHFR C677T純合突變TT基因型個(gè)體的酶活性較正常個(gè)體降低60%～70%，雜合突變CT基因型則降低30%～40%。MTHFR C767T基因突變患者需補(bǔ)充更多葉酸，純合突變TT基因型女性孕期每天需要補(bǔ)充800 μg葉酸才能達(dá)到野生型CC基因型補(bǔ)充400 μg葉酸的效果[28]。通過(guò)開(kāi)展 MTHFR C677T基因多態(tài)性的檢測(cè)，了解貴陽(yáng)地區(qū)人群的遺傳特征，對(duì)孕婦個(gè)體化補(bǔ)充葉酸、降低出生缺陷的發(fā)生率及孕期疾病的一級(jí)預(yù)防具有重要指導(dǎo)意義。

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（收稿日期：2018-08-10 ?本文編輯：蘇 ? 暢）