石進德 (福建省廈門市集美區(qū)灌口中學 福建廈門 361023)
隨著人民生活水平的提高及生活方式的改變和疾病診斷技術(shù)的進步,糖尿病患者總數(shù)迅速增加,成為第三大非傳染性疾病,嚴重威脅人類健康。糖尿病發(fā)病取決于多種因素,其中攝入大量脂肪是促進糖尿病發(fā)病的原因之一。
閩南盛產(chǎn)花生,每年農(nóng)民收完花生后,花生根莖就“毫無價值”丟棄在農(nóng)田里作肥料。閩南有農(nóng)民采取新鮮(或曬干)的花生地下根莖水煮液服用治療糖尿病的偏方,了解這些知識后,經(jīng)過網(wǎng)上查詢,卻未找到有關(guān)利用花生根莖降血糖的相關(guān)實驗報道,因而考慮設(shè)計了“花生根莖水煮液對小鼠血糖的影響”的實驗,如果能通過實驗驗證花生根莖水煮液確實能降低血糖,尋找開發(fā)降血糖新途徑、將花生根莖變廢為寶,又能解決農(nóng)民就地用藥問題,則可節(jié)約開支,一舉兩得。
1.1 實驗動物及飼料 查閱相關(guān)文獻,采用四氧嘧啶溶液對小鼠進行糖尿病造模實驗成功率基本可超過50%[1-2],高者達80%,因而本次選擇240只普通小鼠進行實驗。雌、雄兼用,體重18~22 g,購自廈門大學動物醫(yī)學實驗中心。飼料中主要成分配比為: 標準飼料中蛋白質(zhì)21%,碳水化合物51%,脂肪3%。
1.2 制備花生根莖水煮液 花生根莖采于學生家里種植。第1 步:剪取花生根莖500 g,再加8倍水浸泡2 h;第2 步:進行2 次水煮,第1 次煮2 h,過濾后取濾液進行第2 次水煮1 h;第3 步:過濾后取濾液,將2 次濾液合并;第4 步:過夜靜置后過濾;第5 步:濾液加熱并濃縮至500 g/500 mL;第6 步:根據(jù)實驗需要配制所需給藥濃度。
1.3 準備儀器與試劑 動物血糖測試儀,上海玉研科學儀器有限公司生產(chǎn);四氧嘧啶,美國Sigma公司生產(chǎn)。
1.4 建立糖尿病動物模型
1)模型小鼠選擇。將240 只小鼠隨機分組,進行適應(yīng)性喂養(yǎng)7 d,禁食24 h 后稱重并做好記錄。
2)造模藥劑處理。用檸檬酸緩沖液(pH4.4)溶解四氧嘧啶,調(diào)試成濃度為14 mg/mL。
3)造模實驗處理。將240 只小鼠中的200 只設(shè)置為模型組,另40 只設(shè)置為空白對照組(每組雌、雄各占一半)。模型組每只小鼠腹腔注射四氧嘧啶溶液、對照組每只小鼠腹腔注射生理鹽水(劑量都為0.1 mL/10 g); 實驗實施7 d 后對小鼠禁食但不禁水4 h,采用小鼠眼眶后靜脈叢采血,通過血糖儀測定血糖值。本實驗中血糖值大于11.1 mmoL/L的小鼠為造型成功的模型小鼠[3-4],模型組200 只小鼠共造模成功113 只,占比56.5%,其中雌性52 只,雄性61 只。
1.5 實驗分組與給藥方法 參照植物降血糖實驗文獻并請教專家,對于植物降血糖實驗中各實驗組小鼠樣本均采用10 只一組,所以本次實驗從造模成功的113 只糖尿病模型小鼠中按雌、 雄各半隨機選擇40 只,并隨機分成4 個實驗組,每組10 只(雌、雄 各5 只)[5-6]:模 型 對 照 組(生 理 鹽水);花生根莖水煮液高劑量組(30 g/kg);花生根莖水煮液中劑量組(20 g/kg);花生根莖水煮液低劑量組(10 g/kg);另從腹腔注射生理鹽水的對照組中選擇一組10 只(雌、雄各5 只)為空白對照組(生理鹽水)。每天分別用花生根莖水煮液、生理鹽水按每只0.2 mL 灌胃,連續(xù)14 d。
1.6 血糖測定 空腹血糖測試采用末梢全血快速血糖測定法,剪尾取血,血糖儀檢測。
1.7 數(shù)據(jù)分析 本實驗利用SPSSv11.9 統(tǒng)計軟件處理數(shù)據(jù),根據(jù)實驗結(jié)果進行統(tǒng)計分析,用(M±SD)表示數(shù)據(jù)結(jié)果,用P 檢驗對比分析組間差異的顯著性。
1)受試小鼠灌胃前,4 組實驗小鼠之間的血糖值沒有差異且均明顯高于空白對照組。
灌胃14 d 后進行血糖值的測定,結(jié)果見表1。
表1 灌胃前、后各組血糖值比較(M±SD)(n=10)
2)由表1看,生理鹽水灌胃后空白對照組與模型對照組小鼠血糖值均較灌胃前有所升高,是否因灌胃實驗刺激導致腎上腺素增多從而提高小鼠血糖有待進一步探究,高血糖模型小鼠血糖值升高明顯還可能是由于四氧嘧啶造模的高血糖模型小鼠血糖值在不同實驗期存在波動, 這也是下一階段研究的問題之一; 實驗后花生根莖水煮液低、中、高劑量組的實驗小鼠血糖值均低于高血糖模型小鼠對照組,但花生根莖水煮液低劑量組血糖值與模型對照組比較差異不顯著,而花生根莖水煮液中、 高劑量組與模型對照組比較差異極顯著,而且高劑量組顯著性更明顯;從血糖差值看,花生根莖水煮液低、中、高劑量組血糖均為負值,說明灌胃實驗后高血糖模型小鼠血糖都有所下降,而且花生根莖水煮液中、高劑量組的實驗小鼠血糖差值與高血糖模型小鼠對照組相比較,血糖明顯下降且差異顯著性提高,說明花生根莖水煮液中、高劑量組均具有較好的降血糖效果。
糖尿病是一種常見病,現(xiàn)已成繼心血管、腫瘤后的第三大嚴重威脅人類健康的非傳染病。糖尿病患者數(shù)逐年上升。目前臨床上降血糖藥以西藥為主,而西藥普遍存在肝、腎、心臟毒性及低血糖癥,胃腸道反應(yīng)等不良反應(yīng),在農(nóng)村(特別是邊遠山區(qū))群眾仍存在缺醫(yī)少藥情況,或是采用土方法應(yīng)付。從天然植物中尋找降血糖有效成分已成為研究前沿領(lǐng)域,天然植物有效成份治療糖尿病具有降糖作用溫和持久、毒性和不良反應(yīng)小等作用,能有效延緩糖尿病并發(fā)癥的發(fā)生與發(fā)展。本實驗發(fā)現(xiàn)一定濃度的花生根莖水煮液能在一定程度上降低高血糖小鼠的血糖。
本次實驗初步研究了花生根莖水煮液的降血糖作用, 有助于明確花生根莖水煮液具有降血糖作用,對相關(guān)的花生根莖降血糖作用機理和有效成分開發(fā)及臨床應(yīng)用提供線索。本項活動取得預(yù)期的目標,并在第30 屆廈門市青少年科技創(chuàng)新大賽中獲獎。