劉 峰

(河北省張家口市中醫(yī)院，河北 張家口 075000)

膿毒癥是導(dǎo)致危重病患者死亡的主要原因，多由感染引起的急性全身性炎癥反應(yīng)綜合征(SIRS)。最新研究發(fā)現(xiàn)，microRNA中的microRNA-23b通過(guò)調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)多種信號(hào)通路進(jìn)而影響細(xì)胞的增殖、分化、凋亡以及與組織間的黏附[1]。國(guó)外報(bào)道，microRNA-23b可防止自身免疫性疾病的發(fā)生，可能與其能夠調(diào)節(jié)白細(xì)胞介素-1β(IL-1β)、白細(xì)胞介素-17(IL-17)、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)等多種炎性因子及核轉(zhuǎn)錄因子-κB(NF-κB)通路介導(dǎo)血管內(nèi)皮細(xì)胞的活化等機(jī)制有關(guān)[2]。研究表明，microRNA-23b在腫瘤組織中低表達(dá)，具有一定的抑制腫瘤細(xì)胞增殖的作用[3]。本研究通過(guò)觀察膿毒癥患者及正常人群外周血中microRNA-23b的表達(dá)情況，初步探討microRNA-23b在膿毒癥疾病進(jìn)展及預(yù)后的作用機(jī)制，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 臨床資料

1.1 一般資料 選取2013年5月—2016年12月我院重癥監(jiān)護(hù)室(ICU)收治的88例膿毒癥患者為膿毒癥組，均符合美國(guó)胸科醫(yī)師學(xué)會(huì)/危重病醫(yī)學(xué)會(huì)制定的關(guān)于膿毒癥的相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn)[4]，排除年齡<18歲者，不符合膿毒癥的診斷標(biāo)準(zhǔn)者，因器官移植及激素類藥物服用導(dǎo)致處于長(zhǎng)期免疫抑制狀態(tài)者，長(zhǎng)期服用抗凝藥物者。88例患者中男52例，女36例；年齡22～79(52.1±10.6)歲；根據(jù)疾病嚴(yán)重程度分為一般膿毒癥25例，嚴(yán)重膿毒癥32例，膿毒癥休克31例；急性生理學(xué)及慢性健康狀況(APACHEⅡ)評(píng)分系統(tǒng)輕度21例，中度40例，重度27例；無(wú)凝血功能障礙35例，凝血功能障礙糾正22例，凝血功能障礙未糾正31例。同時(shí)選取40例門診健康體檢者為對(duì)照組，其中男23例，女17例；年齡23～78(53.4±9.5)歲。2組一般資料比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均>0.05)，具有可比性。本研究經(jīng)我院倫理委員會(huì)研究批準(zhǔn)，所有入組對(duì)象均對(duì)研究過(guò)程知情同意。

1.2 檢測(cè)方法

1.2.1 標(biāo)本采集 用EDTA處理過(guò)的抗凝管采集所有對(duì)象靜脈血3 mL，4 ℃ 3 000 r/min離心15 min，將血漿收集后，4 ℃ 12 000 r/min離心15 min，將細(xì)胞碎片去除，-80 ℃冰箱中保存待用。

1.2.2 microRNA-23b檢測(cè) 首先用Trizol依照試劑盒說(shuō)明書(shū)提取外周血200 μL中的總RNA，并用0.1%焦碳酸二乙酯水溶解總RNA，在分光光度計(jì)上進(jìn)行RNA純度及濃度測(cè)定。采用qRT-PCR法檢測(cè)microRNA-23b表達(dá)量：反轉(zhuǎn)錄miRNA，均在冰上進(jìn)行，反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)條件：37 ℃ 60 min，95 ℃ 5 min，用無(wú)RNase的純凈水稀釋cDNA，并進(jìn)行qRT-PCR反應(yīng)，反應(yīng)程序：95 ℃預(yù)變性10 min，95 ℃變性10 s，60 ℃退火20 s，70 ℃延伸10 s，50個(gè)擴(kuò)增循環(huán)，在qRT-PCR儀中進(jìn)行microRNA-23b含量檢測(cè)。

1.3 觀察指標(biāo) 統(tǒng)計(jì)所有膿毒癥患者的病情，并統(tǒng)計(jì)入住ICU 28 d內(nèi)的死亡患者例數(shù)；檢測(cè)并比較2組外周血中microRNA-23b的表達(dá)情況；對(duì)microRNA-23b表達(dá)與膿毒癥患者的臨床病理特征進(jìn)行相關(guān)性分析。

2 結(jié) 果

2.1 88例膿毒癥患者病情分析 88例膿毒癥患者中出現(xiàn)肺部感染42例，腹膜炎14例，泌尿系統(tǒng)感染13例，細(xì)菌性心內(nèi)膜炎10例，膽管感染9例。病死率為20.45%(18/88)。

2.2 2組microRNA-23b表達(dá)情況比較 與對(duì)照組比較，膿毒癥組外周血中microRNA-23b的表達(dá)量明顯降低(P<0.05)；隨膿毒癥嚴(yán)重程度的增加患者microRNA-23b表達(dá)呈逐漸降低趨勢(shì)，嚴(yán)重膿毒癥和膿毒癥休克的患者microRNA-23b表達(dá)明顯低于一般膿毒癥患者(P<0.05)，膿毒癥休克的患者microRNA-23b表達(dá)又低于嚴(yán)重膿毒癥患者(P<0.05)，見(jiàn)圖1及圖2。

圖1 2組microRNA-23b表達(dá)情況比較

圖2 不同程度膿毒癥患者microRNA-23b表達(dá)情況比較

2.3microRNA-23b表達(dá)情況與臨床病理特征的相關(guān)性分析microRNA-23對(duì)膿毒癥診斷的AUC為0.826，靈敏度82.45%，特異度86.41%，膿毒癥患者依據(jù)microRNA-23表達(dá)水平分為2組，低表達(dá)組35例和高表達(dá)組53例。經(jīng)相關(guān)性分析結(jié)果顯示，膿毒癥患者microRNA-23表達(dá)與疾病嚴(yán)重程度、APACHEⅡ評(píng)分系統(tǒng)、凝血功能障礙情況及是否糾正及預(yù)后有明顯的相關(guān)性(P均<0.05)，與患者的性別及年齡無(wú)關(guān)(P均>0.05)。見(jiàn)表1。

3 討 論

膿毒癥是臨床ICU危重病患者死亡的常見(jiàn)原因，患者多因進(jìn)行大型手術(shù)、嚴(yán)重創(chuàng)傷、燒傷及休克等因素引發(fā)不同程度的感染。目前關(guān)于膿毒癥的病理生理學(xué)機(jī)制醫(yī)學(xué)界尚未明確，且臨床治療手段有限，患者預(yù)后差。相關(guān)研究結(jié)果表明，膿毒癥患者多存在免疫功能失調(diào)現(xiàn)象，感染后炎性遞質(zhì)大量釋放，血管內(nèi)皮細(xì)胞受損，血管通透性增加，機(jī)體凝血功能異常，進(jìn)而膿毒癥由SIRS進(jìn)展為伴發(fā)多器官功能障礙綜合征(MODS)及持續(xù)性低血壓的膿毒癥休克[5]。膿毒癥在臨床治療初期可被誤診為SIRS，致使延誤疾病治療，因此對(duì)于膿毒癥的確診臨床需要更為精確和特異性的生物標(biāo)志物。

microRNA是轉(zhuǎn)錄后具有調(diào)節(jié)作用的一類基因，與靶基因結(jié)合后可調(diào)節(jié)相關(guān)基因的表達(dá)，在分泌代謝、機(jī)體炎癥、腫瘤等多種疾病的病理生理過(guò)程中起重要作用。microRNA在血液、汗液及母乳等體液中均可被檢出，且穩(wěn)定性較RNA更高，更適合作為生物標(biāo)記物對(duì)疾病進(jìn)行早期診斷及預(yù)后評(píng)估。目前在膿毒癥的研究中，對(duì)microRNA-125b、microRNA-150、microRNA-223、microRNA-146等的研究較為深入，均參與膿毒癥的病理過(guò)程及疾病進(jìn)程中的相關(guān)細(xì)胞因子的調(diào)控[6-7]。microRNA-23b是最新發(fā)現(xiàn)的microRNA，其與腫瘤的發(fā)生、轉(zhuǎn)移等關(guān)系密切，并可調(diào)控細(xì)胞增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移。研究顯示，外周血microRNA-23b作為胃癌篩查分子標(biāo)志物，可反映患者病情進(jìn)展，診斷效果較高，應(yīng)用價(jià)值廣泛[8-9]。茅凌翔等[10]，microRNA-23b可抑制EV71型病毒在神經(jīng)細(xì)胞中復(fù)制。李娜等[11]研究顯示，重癥肌無(wú)力患者外周血microRNA-23b呈現(xiàn)高表達(dá)。另外研究發(fā)現(xiàn)，大量炎癥因子形成復(fù)雜網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)，在膿毒癥的疾病進(jìn)展中起重要作用，膿毒癥發(fā)病早期可檢測(cè)到IL-6、TNF-α等炎癥細(xì)胞因子水平升高，且升高程度可間接反映疾病的嚴(yán)重程度[12]。microRNA-23b通過(guò)靶定TGF-β活性激酶1靶蛋白2(TAB2)，從而對(duì)自身免疫性疾病起保護(hù)作用，抑制炎癥反應(yīng)程度。

表1 膿毒癥患者microRNA-23表達(dá)情況與臨床病理特征的相關(guān)性分析 例(%)

本研究結(jié)果顯示，與對(duì)照組比較，膿毒癥組外周血中microRNA-23b的表達(dá)量明顯降低；隨膿毒癥嚴(yán)重程度的增加患者microRNA-23b表達(dá)呈逐漸降低趨勢(shì)，嚴(yán)重膿毒癥和膿毒癥休克患者microRNA-23b表達(dá)明顯低于一般膿毒癥患者，膿毒癥休克的患者microRNA-23b表達(dá)又低于嚴(yán)重膿毒癥患者。相關(guān)性研究結(jié)果表明，膿毒癥患者microRNA-23b表達(dá)與疾病嚴(yán)重程度、APACHEⅡ評(píng)分、凝血功能障礙情況及是否糾正及預(yù)后有明顯的相關(guān)性。表明膿毒癥患者外周血中microRNA-23b的表達(dá)與疾病的嚴(yán)重程度密切相關(guān)，疾病越嚴(yán)重，APACHEⅡ評(píng)分越低，其microRNA-23b在外周血中的表達(dá)水平越低；另外microRNA-23b的表達(dá)與預(yù)后也有相關(guān)性，膿毒癥死亡患者與存活患者相比，外周血中microRNA-23b水平明顯降低。膿毒癥患者通常致凝血系統(tǒng)處于激活狀態(tài)，30%～50%膿毒癥患者有不同程度的凝血功能障礙現(xiàn)象[13]，因感染后大量炎癥遞質(zhì)釋放，IL-6、IL-8等炎癥遞質(zhì)具有明顯的促凝效應(yīng)，另外抗凝血酶、蛋白C等合成不足也可導(dǎo)致膿毒癥患者發(fā)生凝血功能障礙[14]，相關(guān)分析表明外周血中microRNA-23b與凝血障礙發(fā)生也具有一定相關(guān)性，有凝血障礙患者及未能被糾正患者外周血中microRNA-23b表達(dá)量更低。

綜上，microRNA-23b在膿毒癥患者外周血中明顯降低，其表達(dá)量與患者的疾病嚴(yán)重程度、APACHEⅡ評(píng)分、凝血功能障礙情況及是否糾正及預(yù)后有明顯的相關(guān)性。

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