廖光沖，林 彬，陳 健

(新疆醫(yī)科大學(xué)第四附屬醫(yī)院，新疆 烏魯木齊 830000)

根據(jù)國(guó)家衛(wèi)計(jì)委最新統(tǒng)計(jì)顯示，心臟疾病位居近年十大死因的第三位(占總死亡人口的8.96%)，僅次于惡性腫瘤(占總死亡人口的26.05%)和腦血管疾病(占總死亡人口10.37%)[1]。導(dǎo)致死亡的心臟疾病包括缺血性心臟疾病、高血壓性心臟病、瓣膜性心臟病、非缺血性或原發(fā)性心臟病及先天性心臟病，其中缺血性心臟病是造成心臟病患者死亡的主要原因，占所有心臟疾病死亡人數(shù)的80%～90%[2-3]。90%以上的缺血性心臟病是由于動(dòng)脈粥樣硬化造成冠狀動(dòng)脈血流量減少引起，而迅速恢復(fù)冠狀動(dòng)脈血流量有助于防止心臟病病情進(jìn)一步惡化乃至缺血性壞死。但恢復(fù)血流量對(duì)曾缺血過(guò)一段時(shí)間的心臟而言并不全然是有益的，血液再灌注除了將氧氣及養(yǎng)分提供給心臟外，也會(huì)對(duì)心肌帶來(lái)一些傷害，且心肌受損程度與其缺氧時(shí)間成正比[4]，故如何減輕心臟缺血再灌流損傷成為研究的熱點(diǎn)之一。厚樸酚是厚樸干燥樹皮之萃取物，其對(duì)心血管系統(tǒng)有一定的保護(hù)作用[5]，本研究探討了不同劑量厚樸酚對(duì)成年雄性大鼠冠狀動(dòng)脈缺血再灌注后心肌損傷的影響，旨在進(jìn)一步明確其作用。

1 實(shí)驗(yàn)資料

1.1 動(dòng)物 健康雄性成年大鼠60只，體質(zhì)量250～450 g，選取新疆醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)中心，動(dòng)物合格證號(hào)：SCXK 2015-0016。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法 將大鼠隨機(jī)分為模型組、厚樸酚1 μg/kg組、厚樸酚10 μg/kg組、厚樸酚100 μg/kg組，每組15只。各組大鼠均在腹腔注射氨基甲酸乙酯1.25 g/kg麻醉后剪開氣管，接人工呼吸器(潮氣體積為15 mL/kg，調(diào)整呼吸速率為60～70次/min)，插頸靜脈管作為給藥途徑；插頸動(dòng)脈管接Statham P23XL 身體壓力傳感器監(jiān)測(cè)血壓(BP)。在大鼠四肢末端接上銀電極，記錄心電圖的變化，采用MacLab數(shù)據(jù)采集系統(tǒng)軟件記錄血壓、心搏和心電圖。準(zhǔn)備完成后，以左胸廓切開術(shù)打開胸腔，剪開外皮后于接近胸骨2 mm處以電刀剪斷第4根及第5根肋骨，用開創(chuàng)器固定傷口，剪開心包膜，以棉花將左心耳隔開，將左心耳及肺動(dòng)脈間心肌上的左主冠狀動(dòng)脈以帶勾絲線迅速勾起，并將穿過(guò)左主冠狀動(dòng)脈下方之絲線套上一小塑料管，松開開創(chuàng)器使傷口閉合，靜置15 min，如在此期間出現(xiàn)心律不齊或是收縮壓小于80 mmHg(1 mmHg=0.133 kPa)則予以淘汰。15 min后記錄各組大鼠心搏、血壓及心電圖，然后厚樸酚1 μg/kg組、厚樸酚10 μg/kg組、厚樸酚100 μg/kg組由靜脈給予相應(yīng)劑量厚樸酚溶液，模型組由靜脈給予0.1% DMSO稀釋溶液，過(guò)15 min后再次記錄心搏、血壓及心電圖。然后將穿過(guò)絲線之塑料小管向下擠壓5 min，造成急性心肌缺血后松開塑料小管使結(jié)扎冠狀動(dòng)脈之絲線松開，使冠狀動(dòng)脈重新再灌注，再灌注30 min后，由頸動(dòng)脈抽1～2 mL的血液用于檢測(cè)乳酸脫氫酶(LDH)及 肌酸激酶(CK)的活性，觀察缺血再灌注后心室性心搏過(guò)速(VT)、心室纖維顫動(dòng)(VF)的發(fā)生率及發(fā)生時(shí)間，統(tǒng)計(jì)動(dòng)物死亡情況。之后再擠壓存活大鼠冠狀動(dòng)脈30 min，再灌注2 h后，由頸靜脈管注入1%甲基藍(lán)約1 mL(心臟未缺血區(qū)域染成藍(lán)紫色，而缺血區(qū)域仍保持紅色)，然后注射過(guò)量麻醉劑后迅速將心臟取下至生理鹽水中，去除心房結(jié)締組織，稱心臟質(zhì)量，剪下未染成藍(lán)色的區(qū)域稱質(zhì)量，通過(guò)圖像分析系統(tǒng)來(lái)計(jì)算心肌壞死區(qū)域比例(心肌壞死區(qū)域面積/整個(gè)心肌面積)。

1.3 LDH和CK測(cè)定方法 頸動(dòng)脈中加入肝素(50 IU/mL)，以10 000 r/min離心3 min后取上清液，置于-20 ℃保存。分別取500 μL LDH和CK反應(yīng)試劑(LDH reagent set,Analyticon Diagnostics,Ca.U.S.A)于37 ℃預(yù)熱2 min后，分別加入12.5 μL的血清，再置于37 ℃反應(yīng)后，以Photometer BTS-330生化分析儀讀取在波長(zhǎng)340 nm的吸光值。

2 結(jié) 果

2.1 各組大鼠缺血再灌注后心律不齊發(fā)生情況比較 各組間大鼠VT發(fā)生率比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均>0.05)；厚樸酚10 μg/kg組大鼠VT總發(fā)生時(shí)間明顯低于模型組和厚樸酚1 μg/kg組(P均<0.05)；厚樸酚10 μg/kg組大鼠VF發(fā)生率和總發(fā)生時(shí)間、大鼠死亡率均明顯低于模型組和厚樸酚1 μg/kg組(P均<0.05)。見表1。

2.2 各組大鼠血清 LDH 與CK活性比較 厚樸酚各組大鼠血清LDH活性與模型組相比有降低的趨勢(shì)，但差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均>0.05)；各組大鼠血清 CK 活性相比差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均>0.05)。見表2。

2.3 各組大鼠缺血再灌注心肌壞死區(qū)域比例比較厚樸酚1 μg/kg組大鼠心肌壞死區(qū)域比例為(52.2±4.9)%，厚樸酚10 μg/kg組為(43.4±5.4)%，厚樸酚100 μg/kg組為(57.7±4.3)%，模型組為(64.8±3.5)%，厚樸酚1 μg/kg組和厚樸酚10 μg/kg組缺血再灌注心肌壞死區(qū)域比例均明顯低于模型組(P均<0.05)，厚樸酚100 μg/kg組與模型組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

表1 各組大鼠缺血再灌注后心律不齊發(fā)生情況比較

注：①與厚樸酚10 μg/kg組比較，P<0.05。

表2 各組大鼠血清 LDH 與CK活性比較

3 討 論

心肌壞死后，由于細(xì)胞膜破損，使得許多細(xì)胞內(nèi)大分子流出，并擴(kuò)散至血流中，故在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ图芭R床對(duì)急性心肌梗死患者的確診上，皆以血清中細(xì)胞內(nèi)特有大分子(如酵素等)的含量作為評(píng)估心肌壞死程度指標(biāo)[6]。常用的心肌壞死指標(biāo)有很多種，本實(shí)驗(yàn)中除了直接觀察心肌組織壞死比例外，選用了LDH及CK作為心臟損傷的指標(biāo)。

本研究中，厚樸酚1 μg/kg組VF發(fā)生率、發(fā)生時(shí)間及死亡率與模型組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；厚樸酚10 μg/kg組VF發(fā)生率和死亡率明顯降低，VF發(fā)生時(shí)間明顯縮短；厚樸酚100 μg/kg 組VF發(fā)生率、發(fā)生時(shí)間及死亡率有下降的趨勢(shì)。提示厚樸酚對(duì)缺血再灌注損傷大鼠的心臟保護(hù)作用和應(yīng)用劑量有關(guān)，10 μg/kg時(shí)保護(hù)作用最強(qiáng)，超過(guò)10 μg/kg效能反而變差，這可能和厚樸酚的水溶性有關(guān)，厚樸酚可能在低劑量時(shí)通過(guò)增加NO的釋放等作用增加缺血組織周邊微循環(huán)而產(chǎn)生保護(hù)效果，但較高劑量可能在血管中析出，堵塞血管，造成沉積處組織毒性及降低局部循環(huán)血流量，反而造成傷害，然此推論則需進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)證實(shí)[7-9]。

本研究中，厚樸酚各組大鼠血清LDH活性與模型組相比有降低的趨勢(shì)，但差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；各組大鼠血清CK活性相比差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；厚樸酚1 μg/kg組和厚樸酚10 μg/kg組大鼠心肌壞死區(qū)域比例均明顯低于模型組，厚樸酚100 μg/kg組與模型組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。提示厚樸酚1 μg/kg及10 μg/kg對(duì)心肌壞死有保護(hù)作用，但對(duì)CK及LDH 活性皆沒有明顯影響，且其對(duì)缺血再灌流心肌損傷的保護(hù)作用并非隨濃度增加而增加。

綜上所述，10 μg/kg厚樸酚能減少冠狀動(dòng)脈缺血再灌流引起的VF并降低動(dòng)物死亡率，1 μg/kg及10 μg/kg厚樸酚能降低大鼠心肌缺血壞死區(qū)域比例，具體機(jī)制還有待研究。

[1] 邸倩. 預(yù)適應(yīng)抗缺血再灌注性心律失常的心臟保護(hù)作用及機(jī)制[D]. 石家莊：河北醫(yī)科大學(xué),2015

[2] Yifu Zhou,Suna Wang,Bogdan Kindzelski,et al. 細(xì)胞學(xué)方法治療缺血性心臟病的新進(jìn)展[J]. 心肺血管病雜志,2014,33(6):756-759

[3] 翟恒博,劉俊. 缺血性心臟病再認(rèn)識(shí)[J]. 心血管病學(xué)進(jìn)展,2016,37(4):395-400

[4] 崔新明，曹霞，谷欣權(quán)，等. 在體大鼠心肌缺血時(shí)間對(duì)再灌注損傷形成的影響[J]. 中國(guó)實(shí)驗(yàn)診斷學(xué),2010,14(3):340-342

[5] 孫羅瓊,崔嵐. 厚樸酚與和厚樸酚對(duì)腦缺血-再灌注損傷作用的研究進(jìn)展[J]. 醫(yī)藥導(dǎo)報(bào),2008,27(1):69-71

[6] 龐敏,劉茹,厲志洪,等. CK中的反向收縮技術(shù)在判定心肌梗死中心肌壞死程度的應(yīng)用[J]. 齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2015,36(10):1475-1476

[7] 黃信全,王從平,陳開廣. 厚樸酚對(duì)大鼠局灶性腦缺血再灌注損傷保護(hù)作用的研究[J]. 中國(guó)神經(jīng)免疫學(xué)和神經(jīng)病學(xué)雜志,2007,14(2):118-119

[8] Ho JH,Hong CY. Cardiovascular protection of magnolol:cell-type specificity and dose-related effects[J]. J Biomed Sci,2012,19(1):1-9

[9] 宋永輝. 厚樸酚減輕缺血大鼠心肌損傷[J]. 基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床,2015,35(4):518-522