顏娟+曾志偉+謝曉云

【摘要】 目的 研究分析腸上皮Syndecan-1對(duì)027型艱難梭菌（CD）所致腹瀉患者的腸黏膜屏障保護(hù)作用。方法 60例CD所致腹瀉患者的血液、糞便、尿液及組織標(biāo)本， 使用肝素（10 kU/L）、Syndecan-1 siRNA、Hanks平衡鹽溶液（HBSS）（400 mg/L）以及V-Syndecan-1進(jìn)行處理。比較處理前后Syndecan-1水平、熒光黃透過(guò)率及炎癥因子分泌水平。結(jié)果 處理后， 患者Syndecan-1水平為（0.938±0.041）μg/L， 高于處理前的（0.351±0.022）μg/L， 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。與處理前比較， 處理后患者熒光黃透過(guò)率降低， IL-6水平降低， IL-10水平增高， 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)論 腸上皮Syndecan-1水平越高對(duì)027型CD腹瀉患者腸黏膜屏障的保護(hù)作用更明顯。

【關(guān)鍵詞】 腸上皮Syndecan-1；艱難梭菌；腸黏膜屏障損傷

DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2018.05.019

艱難梭菌屬于一種革蘭染色陽(yáng)性產(chǎn)芽孢厭氧桿菌， 臨床上又被稱(chēng)為難辨梭狀芽孢桿菌， 通常在人體的腸道中寄生， 是臨床上醫(yī)院獲得性感染性腹瀉常見(jiàn)的疾病誘導(dǎo)獨(dú)立危險(xiǎn)因素， 一旦產(chǎn)生很容易引起傳染性腹瀉疾病的爆發(fā)， 提升相關(guān)疾病的復(fù)發(fā)率、死亡率[1]。Syndecan-1屬于一種硫酸乙酰肝素蛋白聚糖（HSPG）分子， 在患者的上皮細(xì)胞表面進(jìn)行表達(dá)， 可對(duì)患者細(xì)菌易位、腸上皮屏障破壞（主要由細(xì)菌毒素所引起）進(jìn)行有效抑制[2]。在2014年， 我國(guó)大陸的南方醫(yī)院首次在腹瀉患者的糞便標(biāo)本中， 將具有高產(chǎn)毒性CD菌株進(jìn)行分離， 本研究便是對(duì)Syndecan-1、類(lèi)似物對(duì)CD感染所引起的腸黏膜屏障損傷的作用、影響機(jī)制進(jìn)行探討。現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1. 1 一般資料 收集2015～2017年廣州市白云區(qū)人民醫(yī)院住院、門(mén)診以及部分社區(qū)60例CD所致腹瀉患者的腹瀉糞便（布里斯托分類(lèi) 5～7 級(jí)）標(biāo)本進(jìn)行CD菌及毒素分析?；颊咧心?6例， 女24例；年齡20～65歲， 平均年齡（42.56±7.54）歲。

臨床癥狀：所有患有均出現(xiàn)不同程度的嘔吐、腹痛、腹瀉以及發(fā)熱等癥狀。納入標(biāo)準(zhǔn)：①所有腹瀉患者均為年齡≥18歲的患者；②具有化療、抗生素治療史且<60 d；③住院后48 h內(nèi)出現(xiàn)腹瀉， 且患者腹瀉次數(shù)≥3 次/24 h， 大便形態(tài)為不成型。排除標(biāo)準(zhǔn)：①年齡<18歲患者；②有樣本采集經(jīng)歷；③為慢性腹瀉患者；④使用過(guò)瀉藥的患者；⑤有腸道功能性疾病患者。

1. 2 方法 取患者的血液、糞便、尿液及組織標(biāo)本， 使用肝素（10 kU/L）、Syndecan-1 siRNA、HBSS（400 mg/L）以及V-Syndecan-1進(jìn)行處理。并對(duì)如下指標(biāo)進(jìn)行檢測(cè)：①Syndecan-1表達(dá)水平檢測(cè)：使用蛋白質(zhì)印跡法（western blot）、熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）進(jìn)行檢測(cè)， 經(jīng)處理后觀察Syndecan-1表達(dá)水平。②上皮屏障通透性檢測(cè)：熒光黃是腸屏障通透性標(biāo)記物， 能夠通過(guò)細(xì)胞旁轉(zhuǎn)運(yùn)， 將終濃度為100 μg/ml熒光黃的HBSS 100 μl加在Transwell上， 在溫度為37℃的情況下進(jìn)行4 h育卵， 并進(jìn)行下層液體收集， 使用熒光分光光度計(jì)進(jìn)行吸光度測(cè)定， 并計(jì)算熒光黃濃度。熒光黃透過(guò)率（%）=下層熒光黃濃度/加入上層熒光黃濃度（100%）。③炎癥因子分泌：酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)（ELISA）法檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)上清中IL-6及IL-10水平。

1. 3 觀察指標(biāo) 觀察Syndecan-1水平改變前后熒光黃濃度變化及炎癥因子分泌水平變化。

1. 4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS18.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)研究數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（ x-±s）表示， 采用t檢驗(yàn)。P<0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2. 1 患者處理前后Syndecan-1水平比較 處理后， 患者Syndecan-1水平為（0.938±0.041）μg/L， 高于處理前的（0.351± 0.022）μg/L， 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見(jiàn)表1。

2. 2 患者處理前后熒光黃透過(guò)率及炎癥因子分泌水平比較

與處理前比較， 處理后患者熒光黃透過(guò)率降低， IL-6水平降低， IL-10水平增高， 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見(jiàn)表2。

3 討論

CD主要分成非產(chǎn)毒株、產(chǎn)毒株兩種， 產(chǎn)毒株是以A與B兩種毒素的產(chǎn)生而導(dǎo)致CD相關(guān)性疾病的發(fā)生， 而非產(chǎn)毒株則是在患者的腸道內(nèi)利用競(jìng)爭(zhēng)性定植在一定程度上抑制產(chǎn)毒株。CD高毒株亞BI/NAP1/027型菌株所引起的疾病具有細(xì)菌耐藥性強(qiáng)、高復(fù)發(fā)率、高死亡率的特點(diǎn)， 是醫(yī)院內(nèi)部感染性疾病傳播的主要病原菌， 可在短時(shí)間內(nèi)引起大面積流行疾病的爆發(fā)， 并能夠使患者的疾病復(fù)發(fā)率與病死率不斷升高， 最終產(chǎn)生重大的人力、物力以及財(cái)產(chǎn)損失， 其造成的重要影響已經(jīng)得到了世界各國(guó)的廣泛關(guān)注和重視[3]。

在人體正常的生理情況下， 人體機(jī)制可利用微生物屏障、腸黏膜上皮屏障以及免疫屏障等對(duì)抗毒素。病原菌進(jìn)行腸道以外的器官及組織的入侵進(jìn)行阻止， 而腸黏膜上皮屏障屬于一種物理結(jié)構(gòu)的解剖屏障， 封閉細(xì)胞的緊密連接、腸上皮細(xì)胞的完整性是腸黏膜上皮屏障的主要依賴(lài)；Syndecan-1屬于一種HSPG， 在人體通常的生理?xiàng)l件下， 可在其上皮細(xì)胞膜處進(jìn)行表達(dá)， 并粘附分子、生長(zhǎng)因子、胞外基質(zhì)成分、細(xì)胞因子以及細(xì)菌抗原等一系列配子相結(jié)合， 同時(shí)也會(huì)對(duì)促進(jìn)組織修復(fù)、調(diào)節(jié)免疫功能以及維持細(xì)胞形態(tài)等具體生理病理過(guò)程進(jìn)行參與， 并對(duì)作用于腸道的致炎因素進(jìn)行阻止[4]。研究發(fā)現(xiàn)， Syndecan-1升高后， 患者腸道通透性下降， 并且炎癥因子IL-6水平下降而IL-10水平升高。腸道通透性降低， 有助于阻礙黏膜固有層炎癥因子的激活， IL-6水平降低使腸道炎癥得到緩解， 而IL-10水平的升高則對(duì)炎癥反應(yīng)起到保護(hù)作用， 提升抗炎效果。

綜上所述， Syndecan-1水平變化對(duì)腸道炎癥具有較大影響作用， 能夠提升腸黏膜屏障的保護(hù)作用， 減少炎癥發(fā)生。但是， 對(duì)該治療的具體實(shí)施機(jī)制目前臨床上并不十分明確， 且通過(guò)Syndecan-1對(duì)CD高毒株所造成的腸黏膜屏障損傷作用并未發(fā)現(xiàn)有相關(guān)報(bào)道的出現(xiàn)。

參考文獻(xiàn)

[1] Kuehne SA， Cartman ST， Heap JT， et al. The role of toxin A and toxin B in Clostridium difficile infection. Nature， 2010， 467（7316）： 711-713.

[2] Bauer MP， Notermans DW， van Benthem BH， et al. Clostridium difficile infection in Europe： a hospital-based survey. Lancet， 2011， 377（9759）：63-73.

[3] Patterson AM， Delday MI， van Kuppevelt TH， et al. Expression of heparan sulfate proteoglycans in murine models of experimental colitis. Inflamm Bowel Dis， 2012， 18（6）：1112-1126.

[4] Wang XF， Li AM， Li J， et al. Low molecular weight heparin relieves experimental colitis in mice by downregulating IL-1β and inhibitingsyndecan-1 shedding in the intestinal mucosa. PLoS One， 2013， 8（7）：e66397.

[收稿日期：2017-10-23]endprint