孟雪梅，馬文芳，張玲玲，王敏

（西北農(nóng)林科技大學(xué)食品科學(xué)與工程學(xué)院，陜西楊凌 712100）

便秘是臨床常見的復(fù)雜癥狀，隨著人們飲食結(jié)構(gòu)、工作生活方式及心理和社會(huì)因素的影響，便秘發(fā)病率有增高趨勢[1]。流行病研究發(fā)現(xiàn)，便秘一般人群的患病率約為20%，根據(jù)定義和人口研究的不同，它的范圍在0.7%～29.6%之間[2]。女性慢性便秘病率高于男性，全球女性和男性患病率比值為1.1～10.0[3]。便秘的發(fā)生率隨年齡增加而增加，特別是65歲以上便秘發(fā)生率明顯增高[2]。我國成年人患病率在7.0%～20.3%[2]。老年人慢性便秘總患病率為11.5%，其中年齡在60～65歲患病率為8.7%，而>85歲的老人患病率則高達(dá)19.5%[3。排便困難和排便次數(shù)減少是便秘的兩類主要表現(xiàn)，另外還伴有排便費(fèi)力，大便堅(jiān)硬以及產(chǎn)生排便不盡感等癥狀。便秘會(huì)誘發(fā)或加重冠心病、心絞痛及中風(fēng)等心血管疾病患者的病情，嚴(yán)重時(shí)導(dǎo)致其猝死[4]。

苦蕎(F.tataricum Gaertn.)屬于蓼科蕎麥屬谷類作物，在中國糧食作物中屬小宗作物，是重要的救災(zāi)填閑作物和蜜源作物[5]?？囵B(yǎng)麥的藥用情況我國醫(yī)書多有記載，《本草綱目》記載苦蕎麥能練五臟滓穢，降氣寬腸。磨積滯，消熱腫風(fēng)痛，除萬濁[6]。苦蕎擁有多種營養(yǎng)物質(zhì)，富含蛋白質(zhì)、蘆丁、多糖、膳食纖維、脂類、多酚和微量元素等。蕎麥中總膳食纖維(TDF)的含量豐富。時(shí)政等[6]人研究發(fā)現(xiàn)不同產(chǎn)地的30份苦蕎的TDF含量平均值為17.18%；不可溶性膳食纖維(IDF)平均值為9.65%；可溶性膳食纖維(SDF)平均值為7.53%。蕎麥粉中包含20～240 mg/g的TDF，帶殼麩皮中包含400 mg/g的TDF，SDF為250 mg/g；無殼麩皮中含有160 mg/g的TDF，SDF的含量為750 mg/g。纖維攝入不足可導(dǎo)致便秘、痔瘡、血液中膽固醇和糖水平升高；相反，過量的攝入纖維有時(shí)會(huì)導(dǎo)致腸梗阻、腹瀉甚至脫水[7]。適當(dāng)?shù)財(cái)z入膳食纖維能夠助于人體消化食物，維護(hù)胃腸道功能，增加食物的體積，增強(qiáng)飽腹感并減輕體重，同時(shí)對肥胖和Ⅱ型糖尿病患者具有十分重要的意義[8]。本試驗(yàn)以苦蕎麥為原料制備復(fù)合苦蕎沖劑，研究其潤腸通便的功效，為進(jìn)一步開發(fā)苦蕎功能食品提供依據(jù)。

1 材料與試劑

1.1 材料

1.1.1 樣品

復(fù)合苦蕎粉以熟化后的苦蕎麥全粉為基礎(chǔ)，輔配糊精、桑葉粉等，混合均勻；加入75%的醫(yī)藥乙醇將混合好的原料制成適宜軟材，再經(jīng)40目的篩網(wǎng)振蕩搓壓過篩，制成濕顆粒；濕顆粒于40 ℃烘干，分裝。淺棕色顆粒劑，臨用時(shí)用蒸餾水配成所需濃度。

1.1.2 試驗(yàn)動(dòng)物

SPF級昆明種小鼠100只，雄性，(20±2)g，購于中國人民解放軍第四軍醫(yī)大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，許可證號：SCXK(軍)2012-0007。

1.1.3 試驗(yàn)環(huán)境及飼料

小鼠購入后于西北農(nóng)林科技大學(xué)清潔級實(shí)驗(yàn)動(dòng)物房；適應(yīng)性喂養(yǎng)3 d后開始試驗(yàn)，室溫控制在23～26 ℃，濕度控制在(60±20)%，12 h照明，12 h黑暗。試驗(yàn)期間各組動(dòng)物均自由進(jìn)食、飲水。大小鼠配合飼料配制參考《GB 14924.3-2010實(shí)驗(yàn)動(dòng)物配合飼料營養(yǎng)成分》，如表1所示，由中國人民解放軍第四軍醫(yī)大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。

表1 試驗(yàn)小鼠配合飼料營養(yǎng)成分表(每千克飼糧含量)Table 1 Nutrients for formula feeds of mice (/kg formula feeds)

1.2 試劑及藥品

復(fù)方地芬諾酯片(每片含復(fù)方地芬諾酯2.5 mg)，國藥準(zhǔn)字H32022716，常州康普藥業(yè)有限公司；活性炭(粉狀)，天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司；阿拉伯樹膠粉，天津市天力化學(xué)試劑有限公司；以上均為分級純試劑。

復(fù)方地芬諾酯混懸液的配制：濃度為0.025%。取復(fù)方地芬諾酯片25 mg(10片)，用研缽研碎呈粉末后加水至100 mL，小腸運(yùn)動(dòng)試驗(yàn)臨用前配制。濃度為0.05%。取復(fù)方地芬諾酯片50 mg(20片)，用研缽研碎呈粉末后加水至100 mL，排便試驗(yàn)臨用前配制

墨汁的配制：準(zhǔn)確稱取阿拉伯樹膠100 g，加水800 mL，煮沸至溶液透明，稱取活性碳(粉狀)50 g加至上述溶液中煮沸三次，待溶液涼后加水定容到100 mL，于冰箱中4 ℃保存，用前搖勻。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 試驗(yàn)分組

選用成年雄性昆明小鼠，體重20±2 g，每組10只。試驗(yàn)中復(fù)合苦蕎粉攝入量為人體推薦量(0.175/日/kg?BW)的5倍(0.875/ kg?BW)、10倍(1.75/ kg?BW)和30倍(5.25/ kg?BW)共三個(gè)劑量組并設(shè)1個(gè)空白對照組和1個(gè)便秘模型組，空白對照組和便秘模型組用蒸餾水灌胃，給予時(shí)間14 d。

1.3.2 小腸運(yùn)動(dòng)試驗(yàn)

連續(xù)灌胃給予小鼠不同濃度受試物14 d后，各組小鼠禁食16 h，期間自由飲水。便秘模型組和三個(gè)劑量組灌胃給予復(fù)方地芬諾酯(5 mg/ kg?BW)?？瞻讓φ战M給蒸餾水。給予復(fù)方地芬諾酯30 min后，低、中、高劑量組分別灌胃給予含相應(yīng)劑量受試物的墨汁懸液，空白對照組和便秘模型組灌胃給予空白墨汁。25 min后立即脫頸椎處死動(dòng)物，打開腹腔分離腸系膜，剪取上端自幽門、下端至回盲部的腸管，置于托盤上，輕輕將小腸拉成直線，測量腸管長度為“小腸總長度”，從幽門至墨汁前沿為“墨汁推進(jìn)長度”。按下式計(jì)算墨汁推進(jìn)率[9～12]：

墨汁推進(jìn)率(%)=墨汁推進(jìn)長度(cm)/小腸總長度(cm)×100

1.3.3 排便試驗(yàn)

灌胃給予受試樣品14 d后，各組小鼠禁食16 h，期間自由飲水。便秘模型組和三個(gè)劑量組灌胃給予復(fù)方地芬諾酯(10 mg/ kg?BW)?？瞻讓φ战M給蒸餾水。給予復(fù)方地芬諾酯30 min后，低、中、高劑量組灌胃給予含相應(yīng)劑量受試物的墨汁懸液?？瞻讓φ战M和便秘模型組給予空白墨汁。動(dòng)物均單籠飼養(yǎng)，正常飲水進(jìn)食。從灌胃墨汁開始，記錄每只動(dòng)物首粒排黑便時(shí)間、6 h內(nèi)排黑便粒數(shù)及重量，并同時(shí)觀察記錄動(dòng)物的糞便性狀[9～12]。

1.3.4 數(shù)據(jù)處理及結(jié)果判定

用SPSS18.0統(tǒng)計(jì)軟件對試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理。墨汁推進(jìn)率需進(jìn)行數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)換，墨汁推進(jìn)率轉(zhuǎn)換

式中P為墨汁推進(jìn)率，用小數(shù)表示。各組以變異數(shù)(ANOVA)進(jìn)行比較，需按方差分析的程序先進(jìn)行方差齊性檢驗(yàn)，方差齊采用Least-Significant Difference方法分析；對非正態(tài)或方差不齊的數(shù)據(jù)進(jìn)行適當(dāng)?shù)淖兞哭D(zhuǎn)換，待滿足正態(tài)或方差齊要求后，用轉(zhuǎn)換后的數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)；若變量轉(zhuǎn)換后仍未達(dá)到正態(tài)或方差齊的目的，改用秩和檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。

在模型成立的前提下，當(dāng)受試樣品組小鼠的墨汁推進(jìn)率顯著高于模型對照組的墨汁推進(jìn)率時(shí)，可判定該項(xiàng)試驗(yàn)結(jié)果陽性。在小腸便秘模型成立的前提下，受試樣品組小鼠的首粒排黑便時(shí)間明顯短于模型對照組，即可判定該項(xiàng)指標(biāo)結(jié)果陽性。5或6 h內(nèi)排糞便質(zhì)量和糞便粒數(shù)任一項(xiàng)結(jié)果陽性，同時(shí)小腸運(yùn)動(dòng)試驗(yàn)和排便時(shí)間任一項(xiàng)結(jié)果陽性，可判定該項(xiàng)試驗(yàn)結(jié)果陽性。

2 結(jié)果與討論

試驗(yàn)期間，各組小鼠無死亡，生長情況良好，無腹瀉等各種不良反應(yīng)。表2表明：各組小鼠間體質(zhì)量增長無差別無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p>0.05)，復(fù)合苦蕎粉對小鼠體質(zhì)量無影響。

表2 復(fù)合苦蕎粉對小鼠體質(zhì)量的影響Table 2 The effect of compound tartary buckwheat flour on the bodyweight of mice

表3 復(fù)合苦蕎粉對小鼠小腸墨汁推進(jìn)率的影響Table 3 The effect of compound tartary buckwheat flour on the ink-pushing rate of small intestine in mice

表3顯示，5組實(shí)驗(yàn)小鼠的小腸總長度最短為42.74 cm，最長為46.31 cm，無差異性；便秘模型組墨汁推進(jìn)長度為22.82 cm、墨汁推進(jìn)率為1.45，與空白對照組(這2項(xiàng)指標(biāo)分別為40.75 cm、1.24)相比有顯著性差異(p<0.01)，說明造模成功。高劑量組轉(zhuǎn)化后墨汁推進(jìn)率與便秘模型組的差異顯著；中、低劑量組轉(zhuǎn)化后墨汁推進(jìn)率增加，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。上述結(jié)果表明，復(fù)合苦蕎粉攝入量達(dá)到5.25 g/ kg?BW及以上劑量時(shí)可以明顯縮短食糜在小腸中的停留時(shí)間，促進(jìn)小腸蠕動(dòng)。這一效果可能受兩方面因素的影響。其一，蕎麥本身對食糜在小腸中的移動(dòng)具有促進(jìn)作用。Bo Kyung Son等[13]人以白米飯為對照，研究攝入薏苡、蕎麥、糯大麥對肥胖大鼠的血脂指數(shù)、腸道轉(zhuǎn)運(yùn)時(shí)間、主動(dòng)脈壁厚度的影響，在腸道轉(zhuǎn)運(yùn)時(shí)間上白米飯為9.4 h，薏苡、蕎麥和糯大麥分別為7.4 h、7.8 h和5.8 h。馬挺軍等[11]人研究了苦蕎顆粒沖劑對小鼠的潤腸通便作用，其中小腸墨汁推進(jìn)率高劑量組和中劑量組分別為46.2%和44.4%，相比于模型對照組的40.1%有所提高，但未達(dá)到顯著差異。說明蕎麥在促進(jìn)腸道蠕動(dòng)方面具有一定的影響。其二，蕎麥?zhǔn)旆壑械目扇苄陨攀忱w維和外源添加的膳食纖維補(bǔ)充劑可能在其中發(fā)揮著重要的作用?？剐院菍⒈嚎竞碾y消化成分提取并精煉而成的一種低熱量葡聚糖，屬于可溶性膳食纖維補(bǔ)充劑，其持水性為10.22 g/g[14]。另一可溶性膳食纖維補(bǔ)充劑-菊粉，持水性2.85 g/g[15]，當(dāng)聚合度為2～9時(shí)又稱為低聚果糖[16]，在攝入劑量為0.5 g/mL(高劑量)、0.25 g/mL(中劑量)和0.125 g/mL(低劑量)時(shí)，炭末推進(jìn)率分別為63.15%、46.57%和66.98%，相較于模型對照組(50.92%)，高劑量和低劑量組具有顯著差異，而中劑量組無差異，這說明低聚果糖對小腸蠕動(dòng)具有促進(jìn)作用，這與何為濤等[17]人的研究結(jié)果相一致，但是用量是其潤腸功效的關(guān)鍵[1]。在苦蕎熟粉的基礎(chǔ)上適量添加抗性糊精，彌補(bǔ)了苦蕎原粉中可溶性膳食纖維含量低的缺陷，使得復(fù)合苦蕎粉中的膳食纖維配比更加均衡。結(jié)合前人的研究及本實(shí)驗(yàn)的結(jié)果，可以說明復(fù)合苦蕎粉中的可溶性膳食纖維，是發(fā)揮潤腸作用的關(guān)鍵成分。

表4 復(fù)合苦蕎粉對小鼠首粒排黑便時(shí)間、排黑便粒數(shù)和黑便質(zhì)量的影響Table 4 The effect of compound tartary buckwheat flour on the first black feces time, the number of black feces and feces weight in mice

由表4可以看出，便秘模型組動(dòng)物的首次排黑便時(shí)間，排黑便粒數(shù)和黑便質(zhì)量與空白對照組相比具有顯著的差異(p<0.05)，動(dòng)物排便功能出現(xiàn)顯著異常，表明復(fù)方地芬諾酯誘導(dǎo)小鼠便秘模型成立。給藥后高、中、低劑量組小鼠的首粒排黑便時(shí)間(175.5 min、170.0 min和173.9 min)與便秘模型組(181.2 min)相比有所減少但無顯著差距，表明復(fù)合苦蕎粉不能縮短首粒排黑便時(shí)間，這與腸推進(jìn)試驗(yàn)結(jié)果產(chǎn)生差別。其原因可能是復(fù)合苦蕎粉中的可溶性膳食纖維能夠抵抗小腸中的消化酶的酶解，利用其粘性和高持水性，使食糜膨潤光滑，提高推進(jìn)速度，而進(jìn)入大腸后被腸道微生物降解利用，產(chǎn)生乙酸、丙酸、丁酸等短鏈脂肪酸和氣體，無法成為糞便的一部分，也無法利用本身的物理特性提高糞便含水量，改善糞便質(zhì)地，也無法有效提高糞便在大腸中的推進(jìn)速度。各劑量組與便秘模型組比較，排黑便粒數(shù)和黑便質(zhì)量增加，均具有顯著性差異。其中高劑量組的排黑便粒數(shù)和黑便質(zhì)量與便秘模型組間有極顯著差異(p<0.01)，中劑量組和低劑量組的排黑便粒數(shù)與便秘模型組相比有顯著差異(p<0.05)，黑便質(zhì)量與便秘模型組的差異有極顯著性意義(p<0.01)。上述結(jié)果表明，復(fù)合苦蕎粉能明顯增加便秘小鼠的排黑便粒數(shù)并增加其所排糞便質(zhì)量。復(fù)合苦蕎粉中的不可溶性膳食纖維在其中扮演重要角色。Marzanna等[18]的研究表明蕎麥全籽粒中總膳食纖維的含量為12.18 g/100 g，其中可溶性膳食纖維為2.21 g/100 g，不可溶性膳食纖維的含量為9.97 g/100 g，以不可溶性膳食纖維為主，熟化后三者的含量均顯著提高。纖維素、半纖維素和木質(zhì)素的含量分別為0.67 g/100 g、6.94 g/100 g和2.39 g/100 g，半纖維素的含量最高。這與Danuta等[19]人的研究數(shù)據(jù)相一致。以上數(shù)據(jù)說明蕎麥全籽粒中的膳食纖維含量較高且以不可溶性膳食纖維為主。Zhou等[20]人測得的蕎麥麩皮膳食纖維持水性和吸水膨脹性分別為2.22 g/g和2.33 g/g。酶法提取后的膳食纖維的持水性和吸水膨脹性有所提高變?yōu)?.38 g/g和4.67 g/g。蕎麥中的不可溶性膳食纖維難以被腸道微生物分解利用，可以在腸道中保持其完整性，直接增加糞便質(zhì)量，使排便量增大；另外，不可溶性膳食纖維顆?？梢詸C(jī)械性的刺激腸壁，通過局部反射促使大腸粘膜的上皮細(xì)胞和大腸腺中的杯狀細(xì)胞分泌黏液中的黏液蛋白，粘液能保護(hù)黏膜、提高糞便含水量并潤滑糞便，從而間接地增大糞便體積、改善糞便質(zhì)量和質(zhì)地，使糞便易于下行。復(fù)合苦蕎粉能顯著提高糞便粒數(shù)，改善糞便質(zhì)量，重點(diǎn)在于蕎麥不可溶性膳食纖維。

目前對于膳食纖維通便功效的作用機(jī)制，臨床研究表明存在兩方面：(1)膳食纖維能抵抗發(fā)酵并且在大腸內(nèi)保持完整，成為糞便的一部分；(2)有效提高糞便含水量，進(jìn)而增加糞便質(zhì)量，使得糞便柔軟，體積變大且易于排出。而提高增加糞便含水量的途徑同樣有兩種：一種是具有粘性且在水中形成凝膠的非發(fā)酵纖維，這種纖維的持水性與膨脹力可以改善食糜的質(zhì)地，通過大腸時(shí)可以保持其凝膠特性和持水能力，形成柔軟、大體積、易于排出的糞便；二是不可溶性膳食纖維，如果纖維的顆粒足夠大且粗糙，其在大腸中仍是完整的顆粒，可以機(jī)械性的刺激腸道粘膜，增加水分和粘液的分泌，從而提高糞便的含水量[21～23]。復(fù)合苦蕎粉中的可溶性膳食纖維和不可溶性膳食纖維，在消化吸收的過程中，相輔相成，通過不同的作用機(jī)制潤滑腸道，促進(jìn)排便。

3 結(jié)論

復(fù)合苦蕎粉能顯著提高墨汁在小鼠小腸中的推進(jìn)速度，增加小鼠6 h內(nèi)排黑便粒數(shù)和黑便質(zhì)量。小腸運(yùn)動(dòng)試驗(yàn)結(jié)果為陽性，同時(shí)，6 h內(nèi)排黑便粒數(shù)和黑便質(zhì)量結(jié)果為陽性，可判定該項(xiàng)試驗(yàn)結(jié)果陽性。通過試驗(yàn)結(jié)果分析可知，復(fù)合苦蕎粉具有潤腸通便作用，復(fù)合苦蕎粉中的總膳食纖維是潤腸通便的主要成分，具體原因有待進(jìn)一步的證實(shí)。

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