王興翠，林桂玉，喬 寧，曹幫華

(1. 濰坊科技學(xué)院 蔬菜花卉研究所，山東 壽光 262700；2. 山東農(nóng)業(yè)大學(xué) 生態(tài)與環(huán)境重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，山東 泰安 271018)

為提高耐鹽堿刺槐的快繁效率，滿足沿海及濱海鹽堿地區(qū)綠化要求，以耐鹽堿刺槐無性系“W009”和“W038”為試材，研究不同條件對(duì)耐鹽堿刺槐試管苗分化和生根的影響.結(jié)果表明：兩刺槐莖尖初代接種不定芽萌發(fā)率均好于莖段，“W009”離體莖尖不定芽萌發(fā)的最適培養(yǎng)基為MS+6-BA 0.5 mg·L-1+NAA 0.05 mg·L-1，莖段不定芽萌發(fā)的最適培養(yǎng)基為MS+6-BA 1.0 mg·L-1+NAA 0.1 mg·L-1；而適合“W038”離體莖尖和莖段不定芽萌發(fā)的最適培養(yǎng)基則為MS+6-BA 1.0 mg·L-1+NAA 0.1 mg·L-1；適合“W009”不定芽增殖的培養(yǎng)基為MS+6-BA 1.0 mg·L-1+NAA 0.05 mg·L-1，“W038”不定芽增殖的培養(yǎng)基為MS+6-BA 2.0 mg·L-1+NAA 0.1 mg·L-1；“W009”最適生根培養(yǎng)基為：1/2 MS+0.1 mg·L-1IBA + 0.2 mg·L-1NAA+1.0 g·L-1活性炭；“W038” 最適生根培養(yǎng)基為：1/2 MS+0.3 mg·L-1IBA + 0.2 mg·L-1NAA+1.0 g·L-1活性炭.

耐鹽堿刺槐；快繁再生；分化；生根

刺槐(RobiniapseudoacaciaL.)，又名洋槐，由于其具有適應(yīng)性強(qiáng)、生長快、抗鹽、抗旱性較好等特點(diǎn)，在內(nèi)陸鹽堿地及濱海鹽堿地大面積種植，為鹽堿地區(qū)土壤理化性質(zhì)的改良及沿海城市的綠化起到了很大作用[1-2].近年來，土地貧瘠及鹽堿化嚴(yán)重制約了濱海地區(qū)生態(tài)工程建設(shè)和經(jīng)濟(jì)的發(fā)展，隨著工業(yè)化進(jìn)程的加快及黃河三角洲高效生態(tài)經(jīng)濟(jì)區(qū)發(fā)展的迫切要求，刺槐作為一種耐鹽堿和綠化、觀賞于一體的植物日益受到重視[3-4].傳統(tǒng)的刺槐繁殖方法多采分蘗、根插，播種育苗移栽為主，但其繁殖系數(shù)低、速度慢，且易產(chǎn)生性狀分離[5].植物組織培養(yǎng)技術(shù)是刺槐優(yōu)良無性系快速繁殖的重要手段之一，尤其在目前城市園林綠化和生態(tài)建設(shè)對(duì)苗木需求加大的情況下，具有更重要的實(shí)踐意義.通過莖尖、莖段、葉、形成層等組織或細(xì)胞的離體培養(yǎng)[6-10]，可在短期內(nèi)獲得大量優(yōu)良的刺槐苗木，而不同外植體[11-14]、植物生長調(diào)節(jié)物質(zhì)[15-16]、樹齡、瓊脂用量[17-18]等因子都會(huì)產(chǎn)生一定影響.總結(jié)前人研究結(jié)果得出，不同刺槐品種無論在叢生芽直接誘導(dǎo)分化還是經(jīng)愈傷組織誘導(dǎo)分化所需的激素配比及濃度不同，說明不同的基因型其無性系的建立及優(yōu)化存在差異，因此針對(duì)不同刺槐品種材料有必要進(jìn)行再生體系的建立及優(yōu)化.為此，筆者對(duì)部分優(yōu)良速生耐鹽堿刺槐組織培養(yǎng)及植株再生的關(guān)鍵調(diào)控因子進(jìn)行研究，建立優(yōu)質(zhì)高頻穩(wěn)定快繁體系，以期為沿海地區(qū)耐鹽堿刺槐苗木的周年生產(chǎn)供應(yīng)提供參考.

1 材料與方法

1.1 材 料

供試材料為從山東省東營市黃河三角洲實(shí)生刺槐林篩選的耐鹽性較強(qiáng)的“W009”、“W038”2個(gè)刺槐無性系，將其田間種植選取當(dāng)年生健壯枝條的半木質(zhì)化嫩莖及幼嫩莖尖為試驗(yàn)材料.試驗(yàn)所用植物生長調(diào)節(jié)劑NAA、6-BA、IBA均為Sigma生物試劑進(jìn)口分裝產(chǎn)品；70%乙醇為95%乙醇(AR)稀釋配制，由天津市北辰方正試劑廠生產(chǎn)；升汞溶液由貴州省銅仁化學(xué)試劑廠生產(chǎn)的HgCl2(AR)無菌水配制而成； MS培養(yǎng)基由杭州百思生物技術(shù)有限公司生產(chǎn).

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)與方法

1.2.1 外植體的表面滅菌

將試驗(yàn)材料剪取頂部約1.5 cm幼嫩莖尖，其余部分切成1.5 cm左右的帶腋芽莖段，自來水沖洗1 h后，在超凈工作臺(tái)上分別用70%的乙醇表面消毒(40，60 s)，無菌水沖洗3～4次后，再用0.1% HgCl2加2～5滴吐溫80消毒(4，6 min)，最后用無菌水沖洗4～5次并用消毒濾紙吸干表面水分，接種到不加激素的MS培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng).每處理3次重復(fù)，每個(gè)重復(fù)20瓶，為防止交叉感染每瓶接種1個(gè)外植體， 10 d后統(tǒng)計(jì)成活率和污染率，選擇最佳外植體.

1.2.2 初代培養(yǎng)

根據(jù)1.2.1試驗(yàn)結(jié)果，幼嫩莖段經(jīng)最佳消毒處理后，接種到MS+6-BA(0，0.5，1.0 mg·L-1)+NAA(0.05，0.1，0.2 mg·L-1)+瓊脂7 g·L-1+蔗糖30 g·L-1的MS培養(yǎng)基上.每個(gè)處理接種30個(gè)外植體，重復(fù)3次.20 d后統(tǒng)計(jì)腋芽的萌發(fā)率及萌發(fā)芽的生長狀況.

1.2.3 不定芽的繼代增殖培養(yǎng)

將獲得的無菌苗材料切成約1.0 cm的莖段，轉(zhuǎn)接入MS+6-BA(1.0，2.0，3.0 mg·L-1)+NAA(0.05，0.1，0.2 mg·L-1)+蔗糖30 g·L-1+瓊脂7 g·L-1的繼代培養(yǎng)基上.每個(gè)處理接種30個(gè)外植體，重復(fù)3次.30 d后統(tǒng)計(jì)不定芽分化率和增殖系數(shù)，篩選刺槐叢生芽誘導(dǎo)最佳激素配方.

1.2.4 生根培養(yǎng)

將分化培養(yǎng)28 d的健壯叢生芽切分成單株(長度約1 cm)，分別接種于附加不同濃度的NAA(0.2,0.5 mg·L-1)和6-BA(0,0.1 mg·L-1)的MS和1/2 MS的生根培養(yǎng)基上誘導(dǎo)生根.每個(gè)處理接種30個(gè)不定芽，3次重復(fù).培養(yǎng)20 d后，觀察生根情況并統(tǒng)計(jì)生根率、生根條數(shù)，選擇最佳濃度配比的培養(yǎng)基.在此基礎(chǔ)上，添加不同濃度活性炭(0～5 g·L-1)，研究其對(duì)刺槐叢生芽生根的影響.

1.2.5 培養(yǎng)條件

以上試驗(yàn)，培養(yǎng)基均添加7 g·L-1瓊脂，30 g·L-1蔗糖，調(diào)節(jié)pH為5.8，于121 ℃高壓滅菌21 min.在 (25±2) ℃、光照條件為2 000 lx、光照周期為16 h· d-1的條件下進(jìn)行培養(yǎng).

1.2.6 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析

污染率(%)=已污染的外植體數(shù)/接種外植體個(gè)數(shù)×100%;萌發(fā)率(%)=萌發(fā)腋芽的外植體數(shù)/接種外植體個(gè)數(shù)×100%;分化率(%)=已分化的外植體數(shù)/接種外植體總數(shù)×100%;增殖系數(shù)=不定芽分化總數(shù)/外植體個(gè)數(shù);生根率(%)=已生根不定芽個(gè)數(shù)/不定芽接種個(gè)數(shù)×100%;株平均根數(shù)=總根數(shù)/生根的不定芽個(gè)數(shù).

試驗(yàn)所得數(shù)據(jù)采用Excel和DPS數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)進(jìn)行分析[19]，顯著性檢驗(yàn)采用鄧肯氏新復(fù)極差法.

2 結(jié)果與分析

2.1 外植體滅菌時(shí)間的選擇

以莖尖和帶腋芽的莖段作為最初外植體，接種到初始培養(yǎng)基后隨時(shí)觀察外植體污染情況，經(jīng)70%乙醇和0.1%升汞經(jīng)不同消毒時(shí)間組合處理后，莖段和莖尖作為外植體的污染率和成活率見表1所述.

注：表中每列數(shù)值后不同大寫字母表示處理間差異達(dá)極顯著水平(p≤0.01)，不同小寫字母表示處理間差異達(dá)顯著水平(p≤0.05).

由表1可見，莖段和莖尖作為外植體其污染率和成活率有顯著差別.以“W009”為例，隨著消毒時(shí)間的延長，莖尖和莖段污染率均呈現(xiàn)下降趨勢，但其成活率也隨之降低，雖然帶腋芽莖段污染率較莖尖低，但綜合成活率選擇，莖尖為最佳外植體選擇，70%乙醇處理40 s + 0.1%升汞處理5 min消毒效果最好，成活率達(dá)到90.0%.不同消毒滅菌處理“W038”得到的結(jié)果與“W009”的有相似的趨勢，但莖尖在70%乙醇處理60 s + 0.1%升汞處理3 min消毒后成活率達(dá)最高88.3%.

2.2 激素配比對(duì)刺槐初代培養(yǎng)不定芽萌發(fā)的影響

外植體在初代培養(yǎng)基培養(yǎng)約7 d后腋芽開始萌動(dòng)，呈現(xiàn)嫩綠色，莖基部膨大隨后產(chǎn)生愈傷組織，12 d后腋芽基部周圍產(chǎn)生數(shù)量不等的叢生芽.附加低濃度的6-BA和NAA 有利腋芽的萌發(fā)，但6-BA/NAA值較低時(shí)，莖基部產(chǎn)生的愈傷組織較大，而較高濃度的6-BA和NAA腋芽萌發(fā)受阻，且對(duì)其生長造成影響.培養(yǎng)后期發(fā)現(xiàn)，分裂素濃度越高，雖然愈傷組織產(chǎn)生較少，但外植體基部腫脹程度隨分裂素濃度的增加而增大，玻璃化現(xiàn)象越嚴(yán)重，葉片呈現(xiàn)透明程度越明顯.表2列出了激素的不同配比對(duì)刺槐初代培養(yǎng)不定芽誘導(dǎo)萌發(fā)的影響.

表2 激素配比對(duì)刺槐初代培養(yǎng)不定芽誘導(dǎo)萌發(fā)率的影響 %

品種激素/(mg·L-1)莖尖莖段NAA0.020.050.10.20.020.050.10.2W0096-BA0.561.1cdCD77.8aA64.4cC52.2fEF58.9deC70.0abB65.6cBC50.0hE1.058.9deD71.1bB75.6aAB40.0hI60.0dC66.7bcB72.2aA55.6efgCDE1.550.0fFG56.7eDE58.9deD45.6gGH52.2ghDE54.5fgCDE57.8defCD43.3iF2.034.4iJ38.9hIJ40.0hI41.1hHI33.3kH37.8jGH40.0ijFG33.3kHW0386-BA0.561.1eDE72.2bAB60.0eEF50.0ghH56.7efDE65.6bB61.1cdBCD54.4fE1.065.6dCD68.9cBC76.7aA47.8ghHI60.0de64.4bcBC72.2aA45.6gF1.551.1gGH55.6fFG46.7hHI43.3iIJ56.7efDE65.6bB61.1cdBCD54.4fE2.026.7lL34.4kK38.9jJK37.8jK27.8iH43.3gF36.7hG25.6iH

注：表中每列數(shù)值后不同大寫字母表示處理間差異達(dá)極顯著水平(p≤0.01)，不同小寫字母表示處理間差異達(dá)顯著水平(p≤0.05).

由表2可知，隨著6-BA和NAA濃度的增加，刺槐初代培養(yǎng)不定芽的萌發(fā)率基本呈現(xiàn)先增高后降低的趨勢，激素濃度越大外植體萌發(fā)率越低，對(duì)不定芽的傷害越大，表現(xiàn)為不定芽瘦弱呈黃綠色.耐鹽堿刺槐無性系“W009”離體莖尖不定芽萌發(fā)的激素配比在6-BA 和NAA組合分別為 0.5 mg·L-1+0.05 mg·L-1和1.0 mg·L-1+0.1 mg·L-1時(shí)沒有顯著性差異，第1種組合激素用量較少且不定芽萌發(fā)率高；激素配比為6-BA 1.0 mg·L-1+NAA 0.1 mg·L-1時(shí)，最有利于莖段不定芽的萌發(fā)，萌發(fā)率為72.2%；適合“W038”離體莖尖和莖段不定芽萌發(fā)的最佳激素配比則為6-BA 1.0 mg·L-1+NAA 0.1 mg·L-1.

2.3 激素配比對(duì)刺槐不定芽增殖的影響

通過觀察，附加較低濃度的6-BA 和NAA，耐鹽堿刺槐無性系“W009”無菌苗色澤鮮綠且生長旺盛，隨著NAA濃度的升高，外植體基部愈傷組織體積也隨之增大；“W038”不同處理同前者有相似的表現(xiàn)，但附加較高濃度的6-BA和NAA，各處理隨著培養(yǎng)時(shí)間的增加不同程度地出現(xiàn)生長衰弱、葉片變黃脫落的現(xiàn)象.由表3～4可以看出，繼代培養(yǎng)中較低濃度的6-BA對(duì)刺槐不定芽增殖作用顯著，隨著NAA濃度的增加，刺槐不定芽分化率和增殖系數(shù)則呈現(xiàn)相反的趨勢.耐鹽堿刺槐無性系“W009”不定芽分化率和增殖系數(shù)在6-BA濃度為1.0 mg·L-1，NAA 濃度為0.05 mg·L-1時(shí)均最大，分別為88.9%和3.5；而“W038”不定芽分化率和增殖系數(shù)在6-BA濃度為2.0 mg·L-1，NAA 濃度為0.1 mg·L-1時(shí)均最大，分別為76.7%和3.8；當(dāng)6-BA濃度為3.0 mg·L-1，NAA 濃度為0.2 mg·L-1時(shí)，兩耐鹽堿刺槐無性系不定芽分化率及增殖系數(shù)均達(dá)到最低值.

表3 激素配比對(duì)刺槐不定芽分化率的影響 %

品種激素/(mg·L-1)6-BA1.02.03.0W009NAA0.0588.9aA84.4bB74.4dC0.181.1cB74.4dC60.0fE0.265.6eD66.7eD57.8fEW038NAA0.0572.2bAB61.1dDE60.0dEF0.165.6cCD76.7aA68.9bcBC0.251.1fGH55.6eFG46.7gH

注：表中每列數(shù)值后不同大寫字母表示處理間差異達(dá)極顯著水平(p≤0.01)，不同小寫字母表示處理間差異達(dá)顯著水平(p≤0.05).

表4 激素配比對(duì)刺槐不定芽增殖系數(shù)的影響 %

品種激素/(mg·L-1)6-BA1.02.03.0W009NAA0.053.5aA3.0bAB1.7fgF0.12.9bBC2.7bcBCD1.5gF0.22.4cdCDE2.3deDE1.9efEFW038NAA0.053.1bBC3.4bAB2.3cdDEF0.12.6cCD3.8aA2.1deDEF0.22.1deEF2.6cCDE1.7eF

注：表中每列數(shù)值后不同大寫字母表示處理間差異達(dá)極顯著水平(p≤0.01)，不同小寫字母表示處理間差異達(dá)顯著水平(p≤0.05).

2.4 培養(yǎng)基、激素配比和添加活性炭對(duì)刺槐不定芽生根的影響

在生根培養(yǎng)中，經(jīng)觀察耐鹽堿刺槐無性系“W009”在附加0.1 mg·L-1IBA + 0.2 mg·L-1NAA的MS培養(yǎng)基上培養(yǎng)至第8 天時(shí)開始誘導(dǎo)生根，而“W038”在附加0.3 mg·L-1IBA + 0.2 mg·L-1NAA的MS培養(yǎng)基上培養(yǎng)至第9天時(shí)開始誘導(dǎo)生根，且誘導(dǎo)產(chǎn)生的不定根均生長迅速，部分有側(cè)根，苗生長正常；10 d后可以看到兩耐鹽堿刺槐所有處理組合均誘導(dǎo)無菌苗生根，但隨著激素濃度的增大，各處理試管苗的生根表現(xiàn)為緩慢、發(fā)根量變少、根細(xì)弱，生根率下降，且試管苗莖基部有愈傷組織產(chǎn)生.前期誘導(dǎo)過程中兩耐鹽堿刺槐無性系生根數(shù)急速上升(至誘導(dǎo)20 d)，后期時(shí)間主要以根的生長為主，整體呈現(xiàn)急快-平緩趨勢(圖1).

圖中數(shù)值后不同小寫字母表示處理間差異達(dá)顯著水平(p≤0.05).圖1 不同時(shí)間刺槐不定芽誘導(dǎo)生根情況

同時(shí)可以看出(表5)，NAA和IBA 配合使用的生根效果明顯優(yōu)于單獨(dú)使用NAA的效果.以MS為基本培養(yǎng)基，耐鹽堿刺槐無性系“W009”和“W038”最佳生根濃度分別為NAA 0.2 mg·L-1+0.1 mg·L-1IBA和NAA 0.2 mg·L-1+0.3 mg·L-1IBA，生根率分別為76.7%和82.2%.以1/2 MS為基本培養(yǎng)基，最佳激素濃度配比誘導(dǎo)生根，發(fā)現(xiàn)不定根生長迅速，根系發(fā)育好，且生根率和生根條數(shù)較MS培養(yǎng)基高，耐鹽堿刺槐無性系“W009”和“W038” 生根率和生根條數(shù)分別達(dá)80.0%、3.9條和83.3%、4.5條.由此得出，兩耐鹽堿刺槐無性系最佳生根培養(yǎng)基分別為1/2 MS+0.1 mg·L-1IBA + 0.2 mg·L-1NAA 和1/2 MS+0.3 mg·L-1IBA +NAA 0.2 mg·L-1.

表5 激素配比和培養(yǎng)基對(duì)刺槐不定芽生根的影響

注：表中每列數(shù)值后不同大寫字母表示處理間差異達(dá)極顯著水平(p≤0.01)，不同小寫字母表示處理間差異達(dá)顯著水平(p≤0.05).

不同濃度活性炭(AC)對(duì)刺槐不定芽生根的影響狀況見表6所列.由表6看出，將兩耐鹽堿刺槐的叢生芽切分成單株后接種于附加蔗糖30 g·L-1+瓊脂7 g·L-1和不同濃度活性炭的最佳生根培養(yǎng)基上誘導(dǎo)生根.觀察發(fā)現(xiàn)，一定量的活性炭更有利于刺槐不定芽生根，不定芽莖基部基本無愈傷組織產(chǎn)生，側(cè)根增多，但隨著活性炭濃度的增大，刺槐生根率呈現(xiàn)下降趨勢，且植株生長衰弱、株高降低.兩耐鹽堿刺槐均在添加1.0 g·L-1的活性炭的生根培養(yǎng)基上誘導(dǎo)生根效果最好，生根率和平均生根數(shù)均較高，分別為88.9%、4.8條和99.3%、5.7條.

表6 不同濃度活性炭(AC)對(duì)刺槐不定芽生根的影響

注：表中每列數(shù)值后不同大寫字母表示處理間差異達(dá)極顯著水平(p≤0.01)，不同小寫字母表示處理間差異達(dá)顯著水平(p≤0.05).

3 討 論

3.1 外源激素對(duì)耐鹽堿刺槐不定芽分化和生長的影響

在植物離體培養(yǎng)中，外源細(xì)胞分裂素、生長素對(duì)不定芽的誘導(dǎo)和生長發(fā)育具有重要作用.Vain[20]證明植物生長調(diào)節(jié)劑在誘導(dǎo)苗再生方面的作用比植物激素本身更有效，生理活性更強(qiáng).秦愛光等[21]研究發(fā)現(xiàn)，在6-BA 1.0 mg·L-1+NAA 0.5 mg·L-1組合時(shí)，刺槐分化的不定芽最多，單個(gè)外植體分化芽數(shù)和有效芽數(shù)也最高.此外，刺槐不定芽增殖過程中，在培養(yǎng)基中加入一定配比的6-BA、IBA再配合加入TDZ及水解乳蛋白等更容易獲得不定芽，不定芽的分化率高[5].筆者的研究結(jié)果表明，耐鹽堿刺槐無性系“W009”在MS培養(yǎng)基中附加6-BA 0.5 mg·L-1、NAA 0.05 mg·L-1有利于刺槐不定芽的誘導(dǎo)和增殖；而“W038”在MS培養(yǎng)基中附加6-BA 2.0 mg·L-1、NAA 0.1 mg·L-1利于不定芽的誘導(dǎo)及增殖.

3.2 培養(yǎng)基及激素配比對(duì)刺槐不定芽生根的影響

相關(guān)研究表明，生根培養(yǎng)對(duì)基本培養(yǎng)基的類型要求不嚴(yán)，但培養(yǎng)基若富含N、P、K鹽會(huì)抑制根的發(fā)生，因此，需將含鹽濃度應(yīng)適當(dāng)稀釋或降低至更低水平[22].此外，有研究還表明在生根培養(yǎng)基中適當(dāng)加大生長素的濃度，不用或少用細(xì)胞分裂素生根效果好；生長素濃度過高時(shí)容易引起愈傷組織化和抑制根的生長[21,23].田琳琳等[24]研究得出，IBA可以快速誘導(dǎo)無刺桅桿槐和無刺槐生根,最佳生根培養(yǎng)基均為1/2MS+IBA 0.05 mg·L-1.而對(duì)于匈牙利速生刺槐NAA的生根影響大于IBA，在NAA 0.2 mg·L-1+IBA 0.1 mg·L-1時(shí)不定芽生根情況較好[21].筆者的試驗(yàn)研究結(jié)果表明，最佳誘導(dǎo)生根激素配比條件MS培養(yǎng)基較1/2 MS培養(yǎng)基兩耐鹽堿刺槐不定芽的生根率和根生長情況均較差，這與李云等[25]對(duì)刺槐生根研究的結(jié)果相似.此外，耐鹽堿刺槐無性系“W009”生根誘導(dǎo)試驗(yàn)結(jié)果與秦愛光等[21]的研究結(jié)果基本一致，但“W038”則在NAA 0.2 mg·L-1+IBA 0.3 mg·L-1時(shí)誘導(dǎo)不定芽生根情況較好.

3.3 添加活性炭對(duì)刺槐生根的影響

在植物組織生根培養(yǎng)過程中，加入一定量(0.1%～0.5%)的活性炭對(duì)誘導(dǎo)生根作用明顯，它可以提供生根的暗環(huán)境，同時(shí)還能防止褐變，提高培養(yǎng)基內(nèi)可溶性蛋白和總糖的含量，但活性炭濃度過高時(shí)，則會(huì)抑制生根[5]；此外，培養(yǎng)基加入活性炭，能夠促進(jìn)小麥試管苗外植體正常發(fā)育[22].無性系“W009”刺槐形成層愈傷組織分化不定芽生根過程中添加活性炭能顯著改善生根質(zhì)量，生根的最佳培養(yǎng)基為 1/2MS+NAA 0.2 mg·L-1+IBA 0.3 mg·L-1+AC 0.5 g·L-1 [5].該試驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)：添加活性炭在一定范圍內(nèi)對(duì)刺槐不定芽生根有促進(jìn)作用，當(dāng)活性炭濃度為1 g·L-1時(shí)，刺槐生根最好；濃度過高表現(xiàn)為生根率下降，雖然根長增加，但根變細(xì)，這可能與下列情況有關(guān)，即刺槐在再生快繁體系建立不同途徑中，外源生長調(diào)節(jié)物質(zhì)在外植體內(nèi)的積累改變了刺槐不定芽內(nèi)源激素的含量；不同濃度的活性炭其吸附能力的不同改變了不同途徑中培養(yǎng)基中的生長調(diào)節(jié)物質(zhì)和營養(yǎng)物質(zhì).

刺槐不定芽增殖及生根情況見圖1所示.

a: “W009”不定芽分化增殖; b1: “W009”未添加AC誘導(dǎo)生根時(shí)試管苗生長情況; b2: “W009”未添加AC誘導(dǎo)生根時(shí)根的生長情況; c1: “W009”添加1.0 g/LAC誘導(dǎo)生根時(shí)試管苗生長情況; c2: “W009”添加1.0 g/LAC誘導(dǎo)生根時(shí)根的生長情況; A: “W038”不定芽分化增殖; B1: “W038”未添加AC誘導(dǎo)生根時(shí)試管苗生長情況; B2: “W038”未添加AC誘導(dǎo)生根時(shí)根的生長情況; C1: “W038”添加1.0 g/LAC誘導(dǎo)生根時(shí)試管苗生長情況; C2: “W038”添加1.0 g/LAC誘導(dǎo)生根時(shí)根的生長情況.圖1 刺槐不定芽增殖及生根情況

4 結(jié)束語

消毒效果與刺槐外植體及殺毒時(shí)間有關(guān)，刺槐不定芽的分化、增殖及生根與基本培養(yǎng)基類型、激素水平及配比、是否添加活性炭等密切相關(guān)：兩刺槐無性系莖尖初代接種不定芽萌發(fā)率均好于莖段；MS+6-BA 1.0 mg·L-1+NAA 0.05 mg·L-1有利于“W009”不定芽的增殖，MS+6-BA 2.0 mg·L-1+NAA 0.1 mg·L-1有利于“W038”不定芽的增殖；“W009”最適生根培養(yǎng)基為：1/2 MS+0.1 mg·L-1IBA + 0.2 mg·L-1NAA+1.0 g·L-1活性炭；“W038” 最適生根培養(yǎng)基為：1/2 MS+0.3 mg·L-1IBA + 0.2 mg·L-1NAA+1.0 g·L-1L活性炭.

[1] 楊建偉, 梁宗鎖, 韓蕊蓮. 不同土壤水分狀況對(duì)刺槐的生長及水分利用特征的影響[J]. 林業(yè)科學(xué), 2004, 40 (5): 93-98.

[2] 盧興霞, 劉艷, 楊靜慧, 等. 種植國槐和刺槐對(duì)濱海鹽堿地理化性質(zhì)的影響[J]. 北方園藝, 2016 (4): 64-67.

[3] 張亞玲, 田小偉, 曹鋒軍. 刺槐在景觀綠化中的應(yīng)用[J]. 國土綠化, 2009 (2): 47-48.

[4] 張璐, 孫向陽, 尚成海, 等. 津?yàn)I海地區(qū)鹽堿地改良現(xiàn)狀及展望[J]. 中國農(nóng)學(xué)通報(bào), 2010, 26 (18): 180-185.

[5] 韓義. 刺槐遺傳轉(zhuǎn)化受體系統(tǒng)建立及轉(zhuǎn)RpNHX1基因[D]. 泰安: 山東農(nóng)業(yè)大學(xué)林學(xué)院, 2014.

[6] RéDEI K, OSVTH-BUJTS Z, BALLA I. Clonal approaches to growing black locust (Robiniapseudoacacia)in Hungary: a review [J]. Forestry, 2002, 75 (5): 547-552.

[7] EWAKD D, ULRICH K, NAUJOKS G, et al. Induction of tetraploid poplar and black locust plants using colchicine: chloroplast number as an early marker for selecting polyploidsinvitro[J]. Plant Cell, Tissue and Organ Culture, 2009, 9 (3): 353-357.

[8] HAN K H, KEATHLEY D E, GORDON M P. Cambial tissue culture and subsequent shoot regeneration from mature black locust (RobiniapseudoacaciaL. )[J]. Plant Cell Reports, 1993, 12 (4): 185-188．

[9] KAMLESH K, SEHGAL R N, DEEPAK S. Effect of explants type on the micro propagation ofRobiniapseudoacaciaL. [J]. India Journal of Forestry, 1995, 18 (1): 47-52.

[10] ARRILLAGA I, MERKLE S A. Regenerating plants from in vitro culture of black locust cotyledon and leaf explants[J]. Hort Science, 1993, 28 (9): 942-945.

[11] 姜丹, 胡瑞陽, 隋依含, 等. 刺槐子葉的不定芽誘導(dǎo)及植株再生[J]. 東北林業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào), 2012, 40 (10): 12-18.

[12] 習(xí)洋, 胡瑞陽, 王歡, 等. 刺槐未成熟合子胚的體細(xì)胞胚胎發(fā)生和植株再生[J]. 林業(yè)科學(xué), 2012, 48 (1): 60-69.

[13] 李允菲. 刺槐、紅花槐花藥培養(yǎng)研究[D]. 北京: 北京林業(yè)大學(xué)生物科學(xué)與技術(shù)學(xué)院, 2013.

[14] 任云輝, 陳夢如, 馮明, 等. 刺槐下胚軸不定芽誘導(dǎo)及植株再生[J]. 東北林業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào), 2015, 43 (11): 9-13.

[15] 王莉, 李春燕, 邢震, 等. 培養(yǎng)基激素配比及瓊脂用量對(duì)四倍體刺槐組培苗生根的影響[J]. 林業(yè)科技, 2004, 29 (2): 1-2.

[16] NAGAR D S, JHA S K, JANI J. Direct adventitious shoot bud formation on hypocotyls explants inMillettiapinnata(L. )Panigrahi-abiodiesel producing medicinal tree species[J]. Physiology and Molecular Biology of Plants, 2015, 21 (2): 287-292.

[17] HAN K H, KEATHLEY D E, DAVIS J M, et al. Regeneration of a transgenic woody legume (RobiniapseudoacaciaL., black locust)and morphological alterations induced by Agrobacterium rhizogenes-mediated transformation[J]. Plant Science, 1993, 88 (2): 149-157.

[18] OLIVEIRA S C, NUNES A C P, CARVALHO C R, et al. In vitro polyploidization from shoot tips ofJatrophacurcasL.: a biodiesel plant [J]. Plant Growth Regulation, 2013, 69 (1): 79-86.

[19] 唐啟義. DPS數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)[M]. 北京: 科學(xué)出版社, 2010: 105-110.

[20] VAIN P. Intron-mediated enhancement of gene expression in maize (ZeamaysL. )and bluegrass (PoapratensisL. )[J]. Plant Cell Rep， 1996, 15 (7): 489-494.

[21] 秦愛光, 羅曉芳. 匈牙利速生型刺槐遺傳轉(zhuǎn)化再生體系的建立[J]. 林業(yè)科學(xué), 2006, 22 (5): 128-129.

[22] 姬玉梅, 王嶺. 活性炭對(duì)小麥試管苗繼代培養(yǎng)的影響[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué), 2013, 4 (12): 47-48.

[23] 劉芳伊. 單葉刺槐和百子蓮組培快繁體系建立[D]. 保定: 河北農(nóng)業(yè)大學(xué)園藝學(xué)院, 2013.

[24] 田琳琳, 趙梁軍. 無刺桅桿槐和無刺槐再生體系的研究[J]. 中國農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào), 2010, 15 (4): 39-44.

[25] 李云, 王樹芝. NAA和IBA對(duì)四倍體刺槐試管苗生根影響及不定根發(fā)育過程解剖觀察[J]. 林業(yè)科學(xué), 2004, 40 (3): 75-80.