汪宏才 溫國(guó)元 羅青平

摘要：新城疫（Newcastle disease，ND）的防控主要通過生物安全和加強(qiáng)免疫進(jìn)行預(yù)防。目前預(yù)防新城疫的疫苗主要有弱毒疫苗和滅活疫苗。為了降低成本、減少免疫次數(shù)，達(dá)到“一針防多病”的目的，國(guó)內(nèi)外很多學(xué)者在新城疫單苗的基礎(chǔ)上研制出了一系列多聯(lián)疫苗。通過對(duì)中國(guó)新城疫多聯(lián)疫苗的研究進(jìn)展進(jìn)行闡述，分析了疫苗的應(yīng)用效果，為臨床應(yīng)用提供參考。

關(guān)鍵詞：新城疫;多聯(lián)疫苗;進(jìn)展

中圖分類號(hào)：S851? ? ? ? ?文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

文章編號(hào)：0439-8114（2018）24-0005-04

DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2018.24.001? ? ? ? ? ?開放科學(xué)（資源服務(wù)）標(biāo)識(shí)碼（OSID）：

Abstract： The prevention and control of Newcastle disease（ND） is mainly prevented by biological safety and enhanced immunity. The current vaccines for prevention of Newcastle disease include attenuated vaccines and inactivated vaccines. In order to reduce costs， reduce the number of immunizations， and achieve the goal of “one needle against multiple diseases”， researchers at home and abroad have developed a series of multi-linked vaccines based on Newcastle disease single seedlings. This article elaborates the research progress of Chinas Newcastle disease multi-linked vaccine， analyzes the application effect of vaccine， and provides reference for clinical application.

Key words： Newcastle disease; multi-component vaccine; progress

新城疫（Newcastle disease，ND）是由新城疫病毒（Newcastle disease virus，NDV）引起的急性、高度接觸性傳染病，也是危害養(yǎng)雞業(yè)的重要疫病之一。自1926年被確認(rèn)已來已有90多年歷史，在世界范圍內(nèi)廣為傳播，它給養(yǎng)禽業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失，迄今仍是禽類最重要的疾病之一[1]。眾多臨床病例表明，新城疫在中國(guó)家禽群體中仍呈常在的地方流行，仍然是養(yǎng)禽業(yè)必須關(guān)注的重點(diǎn)疫病[2]，而疫苗免疫是預(yù)防新城疫的重要途徑和方法[3]。在規(guī)?；B(yǎng)殖方式下，新城疫往往不是單獨(dú)發(fā)病，而是經(jīng)常并發(fā)或繼發(fā)其他病毒性或細(xì)菌性疾病，導(dǎo)致病情更加復(fù)雜。為了有效防控這些疫病，可通過研制聯(lián)合疫苗，達(dá)到“一針防多病”的目的。而中國(guó)禽用聯(lián)苗的研制多數(shù)以新城疫為基礎(chǔ)，目的是在減少疫苗注射次數(shù)的同時(shí)，預(yù)防更多種類的疾病。臨床上聯(lián)苗的應(yīng)用不僅可以提高疫苗接種覆蓋率，還可以減少應(yīng)激反應(yīng)、降低成本等。多聯(lián)疫苗的研制相對(duì)復(fù)雜，不是將現(xiàn)有疫苗簡(jiǎn)單組合，而是在綜合考慮各抗原組分間的穩(wěn)定性、免疫原性的前提下，解決抗原之間互相干擾、表達(dá)抑制以及不良反應(yīng)加重等情況。本文對(duì)以新城疫為基礎(chǔ)的多聯(lián)疫苗的研制進(jìn)展情況進(jìn)行了闡述，為家禽疫病防控提供參考。

1? 以新城疫為基礎(chǔ)的病毒類聯(lián)苗

1.1? 以新城疫為基礎(chǔ)的二聯(lián)疫苗

1.1.1? 新城疫與傳染性支氣管炎聯(lián)苗? 中國(guó)早在20世紀(jì)就開始進(jìn)行聯(lián)苗的研制，最早研制的新城疫聯(lián)苗新城疫、傳染性支氣管炎二聯(lián)疫苗，在國(guó)內(nèi)早已廣泛應(yīng)用，在預(yù)防兩種疾病上取得了良好的效果。目前在國(guó)內(nèi)廣泛使用的傳染性支氣管炎疫苗株主要是屬于馬塞諸塞型（簡(jiǎn)稱Mass-type）的毒株，常見的包括H120、H52、Ma5和W93等[4]。衛(wèi)廣森等[5]采用雞新城疫Lasota和腎型傳染性支氣管炎W93弱毒同胚培養(yǎng)，制成雞新城疫、傳染性支氣管炎二聯(lián)活疫苗。靖寧等[6]研制了雞新城疫Lasota株與傳染性支氣管炎H120株二聯(lián)活疫苗，抗體水平檢測(cè)顯示，在免疫后21 d新城疫HI最高，平均值為5.37log2，免疫后35 d傳染性支氣管HI最高，平均值為5.97log2。通過工藝改進(jìn)，李偉[7]對(duì)新城疫、傳染性支氣管炎N-2-HACC/CMC納米二聯(lián)活疫苗進(jìn)行了研制，該疫苗穩(wěn)定性強(qiáng)、釋藥時(shí)間長(zhǎng)，對(duì)病毒抗原具有保護(hù)作用，經(jīng)滴鼻免疫后，增加了抗體持續(xù)期，増強(qiáng)了免疫效果，可明顯延長(zhǎng)免疫保護(hù)期。楊峻等[8]開展了雞新城疫Lasota株、傳染性支氣管炎M41株二聯(lián)油乳劑苗的研制，采用同胚培養(yǎng)的方法，獲得了十分理想的免疫效果。劉娣等[9]采用新城疫Lasota株和傳染性支氣管炎H120+W93株制成新城疫、傳染性支氣管炎二聯(lián)滅活疫苗，免疫雞群能耐受呼吸道型、嗜腎型傳染性支氣管炎強(qiáng)毒攻擊。傳染性支氣管炎病毒由于血清型多，各血清型之間交叉保護(hù)效果較差，因此新型疫苗的研制勢(shì)在必行。

1.1.2? 新城疫與減蛋綜合征聯(lián)苗? 減蛋綜合征是由腺病毒EDS76引起，能垂直傳播，所有年齡雞均可感染。種雞產(chǎn)蛋階段接種疫苗是預(yù)防該病的有效手段。邱昌慶等[10]首次用蜂膠作為佐劑，研制出雞新城疫、減蛋綜合征二聯(lián)滅活疫苗。張安國(guó)等[11]以減蛋綜合征病毒株、新城疫Laosota株為制苗毒株，分別經(jīng)鴨胚和雞胚增殖后甲醛滅活，滅活毒液按適當(dāng)比例混合加入油佐劑中，乳化制成聯(lián)苗。王采先等[12]用減蛋綜合征AV-127和新城疫Lasota毒株分別接種鴨胚和雞胚，收獲尿囊液，福爾馬林滅活，用白油佐劑乳化成二聯(lián)滅活疫苗，二聯(lián)苗和單苗有相同的免疫效果，兩者無干擾性。侯順利等[13]應(yīng)用新城疫Lasota株和減蛋綜合征EDS76 LA3株，制成雞新城疫、減蛋綜合征二聯(lián)油佐劑疫苗，25 d后ND和EDS76抗體可先后達(dá)到高峰，免疫期可達(dá)1年。

1.1.3? 新城疫與禽流感聯(lián)苗? 低致病性H9亞型禽流感病毒感染雞群，雖不會(huì)引起雞大量死亡，但常會(huì)影響產(chǎn)蛋雞的生產(chǎn)性能，造成產(chǎn)蛋率的大幅下降。規(guī)?；B(yǎng)殖場(chǎng)中，非典型新城疫和低致病性禽流感感染率較高，嚴(yán)重影響雞群的健康和生產(chǎn)性能。目前，禽流感并無特別有效的治療方法，疫苗的接種仍是預(yù)防H9亞型禽流感發(fā)生與流行的最有效手段。新城疫與禽流感聯(lián)合疫苗主要是以新城疫Lasota株和禽流感H9亞型聯(lián)合生產(chǎn)滅活疫苗。杜元釗[14]、白軍[15]等開展了新城疫Lasota株、禽流感H9二聯(lián)油乳劑滅活疫苗的研制，臨床上取得了較好的應(yīng)用效果。由于禽流感毒株具有高度變異性的特點(diǎn)，造成抗原性差異較大。因此，國(guó)內(nèi)新城疫與禽流感（H9亞型）二聯(lián)疫苗大多以Lasota株和禽流感地方分離株進(jìn)行聯(lián)合，如WD株、SZ株、SY株、SS株、LG1株、JY株、HP株、HN106株、F株等。

1.1.4? 新城疫與傳染性法氏囊病聯(lián)苗? 傳染性法氏囊病是一種免疫抑制病，雞群感染后對(duì)疫苗免疫效果產(chǎn)生免疫抑制作用，給養(yǎng)雞業(yè)帶來了很大的經(jīng)濟(jì)損失。一般在種雞階段采用滅活疫苗或在雛雞階段使用活疫苗進(jìn)行免疫。1996年，喬忠等[16]用雞新城疫La Sota F4株和傳染性法氏囊病TAD弱毒株研制成功雞ND-IBD二聯(lián)弱毒疫苗。2006年，叢華等[17，18]進(jìn)行了新城疫Lasota株和傳染性法氏囊病NF8株二聯(lián)活疫苗研究，結(jié)果表明，用二聯(lián)活疫苗免疫SPF雛雞后，NF8株與La Sota株間不產(chǎn)生明顯的相互干擾作用，攻毒保護(hù)率與各自的單苗相比無明顯差異。國(guó)內(nèi)聯(lián)苗常使用的法氏囊毒株有NF8株、HQ株、BJQ902株、SD株、VNJO株和VNJO株。

1.2? 以新城疫為基礎(chǔ)的三聯(lián)疫苗

多聯(lián)疫苗的研發(fā)是禽用疫苗的發(fā)展方向。禽用聯(lián)苗大多是在新城疫、傳染性支氣管炎二聯(lián)疫苗的基礎(chǔ)上，增加其他種類病毒，形成多聯(lián)疫苗，達(dá)到一針防多病的目的。在目前規(guī)?；B(yǎng)殖場(chǎng)，多聯(lián)多價(jià)疫苗的使用很大程度上節(jié)約了人力物力，減少了雞群的應(yīng)激。劉文惠等[19]在同一宿主細(xì)胞——雞全胚細(xì)胞（CE）上同步增殖培育了雞新城疫N79株、支氣管炎H120株、法氏囊病Cu-IM株3株細(xì)胞弱毒，研制出三聯(lián)細(xì)胞弱毒疫苗。康文彪[20]開展了新城疫Lasota株、傳染性支氣管炎（H120+H52株）、傳染性法氏囊BJ836株三聯(lián)弱毒疫苗的研制，以常規(guī)劑量頸部皮下接種免疫雞后，7 d產(chǎn)生免疫力，免疫后14 d對(duì)雞新城疫、雞傳染性支氣管炎、雞傳染性法氏囊病三株強(qiáng)毒攻擊的保護(hù)率均為100%，對(duì)15日齡雛雞首免，其免疫期至少為30 d。楊峻等[21]研制出雞新城疫Lasota株、傳染性支氣管炎M41株、傳染性法氏囊病HB909株三聯(lián)油乳劑滅活疫苗研制，三聯(lián)苗免疫18～28日齡雛雞，免疫后21 d攻毒測(cè)保護(hù)力，3種傳染病保護(hù)率均在90%～100%，ND HI抗體≥1∶32，IBDV AGP陽性率為100%，IB VN抗體≥1∶8，疫苗免疫期可達(dá)4個(gè)月以上。朱國(guó)強(qiáng)等[22]、喬忠等[23]、陳昌海等[24]也進(jìn)行了新城疫、傳染性支氣管炎、雞減蛋綜合征三聯(lián)油乳劑滅活疫苗的研制。唐秀英等[25]用接種新城疫病毒克隆30株、雞傳染性支氣管炎病毒F株（或M株）和病毒性關(guān)節(jié)炎病毒S-1133株的含毒雞胚尿液制成三聯(lián)油乳劑滅活疫苗，保護(hù)率達(dá)90%～100%，免疫期達(dá)5個(gè)月以上。馬增軍等[26]采用新城疫Lasota株以及EDS76V、IBDV地方分離株JD2株和D78株制成雞新城疫、減蛋綜合征、傳染性法氏囊病三聯(lián)油乳劑滅活疫苗，該三聯(lián)疫苗均能產(chǎn)生較高效價(jià)的抗體，其中IBD AGP抗體效價(jià)達(dá)7.42log2，ND HI抗體效價(jià)達(dá)9.24log2，EDS76 HI抗體效價(jià)達(dá)9.18log2。

1.3? 以新城疫為基礎(chǔ)的四聯(lián)疫苗

隨著疫苗制造技術(shù)的進(jìn)步和“免疫減負(fù)”計(jì)劃的提出，多聯(lián)疫苗市場(chǎng)需求增加。姜北宇等[27]用NDV Lasota株、IBV M41株、EDS76V HSH23株、AEV Van Roekel株為種毒，制成ND-IB-EDS76-AE四聯(lián)滅活疫苗。于漾[28]進(jìn)行了雞新城疫Lasota株、呼吸型傳染性支氣管炎M41株、減蛋綜合征AV127株、禽流感H9亞型四聯(lián)疫苗研制?？祦喣衃29]利用雞新城疫病毒LaSota株、傳染性支氣管炎病毒M41株、傳染性法氏囊病毒BJQ902株和病毒性關(guān)節(jié)炎病毒T98株制成四聯(lián)滅活疫苗，免疫28 d后，新城疫抗體水平達(dá)到6.0log2以上，攻毒后全部保護(hù)，各組分之間無干擾現(xiàn)象。高換河等[30]對(duì)新城疫Lasota株、傳染性支氣管炎M41株、減蛋綜合征Z16株、傳染性法氏囊病HQ株四聯(lián)滅活疫苗效力試驗(yàn)表明，新城疫抗體與單苗相近，各種抗原成分彼此間沒有干擾現(xiàn)象。崔艷麗[31]對(duì)雞新城疫La Sota株、傳染性支氣管炎M41株、減蛋綜合征HS25株和禽流感H9亞型HZ株四聯(lián)滅活疫苗進(jìn)行了安全性評(píng)價(jià)，證明疫苗安全。多聯(lián)疫苗的應(yīng)用極大地降低了免疫次數(shù)，減少了雞群應(yīng)激，降低了人工成本。禽用四聯(lián)疫苗的研制成功在生產(chǎn)上極大地減少了免疫次數(shù)，使免疫覆蓋范圍更廣。

2? 新城疫與細(xì)菌類聯(lián)合疫苗

早期畜禽養(yǎng)殖場(chǎng)大多依賴抗生素進(jìn)行細(xì)菌性疾病的防治，但隨著抗生素濫用問題日益嚴(yán)重，耐藥細(xì)菌不斷出現(xiàn)并呈全球化流行趨勢(shì)，畜禽細(xì)菌類疫苗研制將成為熱點(diǎn)。新城疫感染后，容易產(chǎn)生細(xì)菌性繼發(fā)感染，造成死亡率增加、生產(chǎn)性能下降。而目前以新城疫為基礎(chǔ)的細(xì)菌類聯(lián)苗僅有禽霍亂、傳染性鼻炎以及慢性呼吸道病。溫俊板等[32]采用新城疫Ⅰ系弱毒毒種和禽霍亂弱毒進(jìn)行同胚培養(yǎng)制成二聯(lián)弱毒疫苗。李維義等[33]采用自行選育的禽霍亂弱毒菌株731、731S與新城疫Ⅰ系疫苗株制成新城疫、禽霍亂二聯(lián)弱毒疫苗。常維毅等[34]開展了新城疫Ⅰ系和禽霍亂B26-T1200株弱毒二聯(lián)活疫苗的研制，保護(hù)率達(dá)到100%。盧桂娟等[35]對(duì)雞新城疫、禽多殺性巴氏桿菌病二聯(lián)活疫苗效力試驗(yàn)表明，在2月齡以上雞上應(yīng)用效果明顯。由于新城疫Ⅰ系弱毒株毒力較強(qiáng)，國(guó)內(nèi)學(xué)者多采用免疫原性強(qiáng)、安全性高的Lasota株制成聯(lián)苗。袁松齡等[36]用新城疫Lasota株和禽霍亂1812、1502、X-73株制成二聯(lián)疫苗，無干擾現(xiàn)象。應(yīng)用雞新城疫和禽霍亂油乳劑滅能二聯(lián)疫苗接種2個(gè)月齡以上的雞，雞新城疫HI效價(jià)幾何平均值為9.32log2，一年后攻強(qiáng)毒，可獲100%保護(hù);禽霍亂保護(hù)率91.4%，免疫后6～7個(gè)月仍可保護(hù)60%。邵華斌等[37]采用新城疫病毒Lasota株感染雞胚尿液毒和多殺性巴氏桿菌接種固體培養(yǎng)基收獲菌液，經(jīng)滅活后制備成油乳劑滅活疫苗。傳染性鼻炎、慢性呼吸道綜合征為常見的呼吸系統(tǒng)疾病，常造成產(chǎn)蛋減少，淘汰率增加，嚴(yán)重影響生產(chǎn)性能。張培君等[38]以副雞嗜血桿菌血清型A的菌株Hpg-8、血清型C菌株Hpg-668和雞新城疫LaSota制成雞傳染性鼻炎和新城疫滅活油佐劑二聯(lián)疫苗。張琪等[39]采用自行分離的菌毒株，與新城疫病毒同胚培養(yǎng)后制成二聯(lián)疫苗。滅活苗在免疫后20 d抗體水平達(dá)8log2以上，30 d達(dá)8log2～9log2。戴建華[40]進(jìn)行了雞新城疫Lasota株、慢性呼吸道病MGS6株二聯(lián)油乳劑滅活疫苗的研制。

3? 展望

禽用聯(lián)苗的研發(fā)給養(yǎng)禽業(yè)疫病防控帶來便利。目前聯(lián)苗的應(yīng)用在臨床上日益增多，既減少了免疫次數(shù)，同時(shí)也減少了應(yīng)激反應(yīng)，在規(guī)?；a(chǎn)的今天，越來越受到養(yǎng)殖者的歡迎。隨著基因工程技術(shù)的應(yīng)用，抗原濃縮工藝的成熟，將有更多聯(lián)苗研制出來。以新城疫作為基礎(chǔ)的聯(lián)苗將成為中國(guó)家禽疫病防控的主力軍。雖然早期LaSota株及其克隆化株Clone-30等在中國(guó)廣泛應(yīng)用且公認(rèn)免疫效果較好[41]，但是近年來，調(diào)查顯示中國(guó)及周邊地區(qū)流行的新城疫病毒主要為基因Ⅶ型，而基因Ⅱ型的Lasota株仍廣泛使用。分子流行病學(xué)分析顯示，其與流行株的遺傳距離較遠(yuǎn)。疫苗株與流行株之間的基因型差異被認(rèn)為是免疫禽群中新城疫強(qiáng)毒發(fā)生感染的主要原因之一[42]。因此，基于新城疫基因Ⅶ型的多聯(lián)疫苗將成為禽用聯(lián)苗的研制方向。

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