樊長有 張秋月

摘 要：本文為了能夠找出懷山藥種質(zhì)資源緩慢生長離體保存方法，分別將B號山藥、47號山藥及鐵棍山藥作為試驗對象，研究比久（B9）、多效唑（PP333）等植物生長延緩劑，在低溫（4℃）、常溫（25℃）環(huán)境下，試管苗的保存效果。

關鍵詞：植物生長延緩劑;多效唑;比久;懷山藥;離體保存

懷山藥不僅能藥用，也可食用，因而受到社會的普遍喜愛。由于懷山藥長時間處于無性繁殖狀態(tài)，使得其遭受許多病原菌感染，在種質(zhì)資源的保存方面，有著比較大的隱患與不足。所以，要想將懷山藥種質(zhì)資源較好的保存下來，離體保存實為一個不錯的方法。本文以懷山藥為研究對象，探討多效唑、比久等植物生長延緩劑在常溫與低溫狀態(tài)下對其保存所具有的影響，找尋更加有效的保存方法。

一、懷山藥的藥用價值分析

懷山藥是一種典型的薯蕷科植物，薯蕷的塊莖屬于多年生的纏繞本草植物。懷山藥不僅能蔬、能糧，還能藥，有報道指出，其每百克當中含有1.9g的蛋白質(zhì)、0.2g的脂肪、12.4g碳水化合物，能夠提供56千卡/234千焦的能量。另外，其中還富含有多種礦物元素與維生素，有著比較全面的營養(yǎng)含量。懷山藥性平且味甘，歸肺、胃、腎經(jīng)等。傳統(tǒng)中醫(yī)理論指出，懷山藥具有益胃補腎、固腎益精、強筋骨、助五臟、聰耳明目、健脾補肺、延年益壽及長志安神等作用，此外，還有補虛贏、化痰涎及止瀉痢等功效。

二、懷山藥種植的生物學特性

懷山藥喜溫暖濕潤，怕干旱，忌積水，在那些排水良好、土層深厚及肥沃疏松的砂紙壤土上適合種植。懷山藥莖葉喜干燥、高溫，而不宜霜凍，最合適的生長溫度為25～28℃。其塊莖非常耐旱，因此，以沙壤土最為合適種植。如果是粘土，塊莖根大、莖須多，且形狀不正，容易出現(xiàn)分叉及扁頭等情況。當種植且出苗后，塊莖生長前期需要并不多的水分，以利塊莖深入土層與塊莖形成，而到了塊莖生長盛期，則不可缺水。

三、多效唑和比久對懷山藥離體保存的影響

1.資料與方法

（1）材料。所選用的B號山藥、47號山藥及鐵棍山藥，均來自某中藥材保育中心。而對于比久（B9）、多效唑（PP333）等植物生長延緩劑，純度均達分析純級別。（2）方法。切無菌苗，使之成為一個長為1～1.5cm，且?guī)в?個腋芽的節(jié)段，在MS上接種，且附帶如0.5mg/L、1.0mg/L、2.5mg/L、5.0mg/L、10.0mg/L等質(zhì)量濃度PP333，及1.0mg/L、2.0mg/L、5.0mg/L、10.0mg/L、15.0mg/L等質(zhì)量濃度B9的培養(yǎng)基上，并將沒有B9與PP333附加的培養(yǎng)基作為各自的對照;當PP333組合于NAA、KT時，NAA、KT會將PP333的部分效果抵消掉，提高其適宜濃度，因此，可將其濃度分別設為1.0mg/L、2.5mg/L、5.0mg/L與10.0mg/L。

將培養(yǎng)基40mL分別加入到各三角瓶當中，并與4個帶1個腋芽的節(jié)段接種，每種培養(yǎng)基均制作10瓶。全部處理均持續(xù)進行3次。常溫條件：光強2000lx，光照14h/d，溫度為（25±2）℃。當進行低溫保存時，首先于常溫下，把接種材料持續(xù)培養(yǎng)7d，然后再在低溫環(huán)境下（4℃），即置于展示柜中，在自然光下進行保存。每30d便對其生長情況觀察1次，記錄存活率。

2.懷山藥試管苗離體保存中PP333所產(chǎn)生的影響

（1）常溫保存的影響。當處于常溫狀態(tài)下，如果PP333的質(zhì)量濃度維持在0mg/L時，那么針對各個山藥試管苗而言，當其持續(xù)保存到120d時，均死亡;而經(jīng)過PP333處理后，其存活率得到顯著提升。經(jīng)深層次分析得知，試管苗的保存效果密切相關于PP333的質(zhì)量濃度，并且各基因型山藥所需要的適宜質(zhì)量濃度存在差異。在試驗設計的既定框架內(nèi)，針對B號山藥、47號山藥即鐵棍山藥來講，當組合添加NAA、KT與PP333時，其適宜PP333質(zhì)量濃度分別為10.0、5.0、2.5mg/L，如果僅添加PP333，那么三種山藥的適宜PPP333質(zhì)量濃度分別是5.0、2.5、1.0mg/L，之所以會出現(xiàn)此情況，可能因為使用NAA與KT后，其將PP333的部分作用抵消掉了。如果質(zhì)量濃度比較適宜，在常溫狀態(tài)下，持續(xù)保存180d后，各種山藥在存活率方面，單用PP333相比與組合添加，并沒有明顯差異。前者依次為80%、75%與75%，而后者依次為75%、80%、70%。

（2）低溫保存的影響。如果上述類型的山藥有著相同的保存時間，那么相比于高溫下的存活率，低溫下的明顯偏高。在低溫條件下，如果試管苗使用了PP333，那么其存活率較對照組明顯偏高，并且PP333的質(zhì)量濃度維持在較低值，對試管苗存活率的提升有利;如果在適宜的PP333質(zhì)量濃度下，即鐵棍山藥為5.0mg/L，47號山藥為2.5mg/L，B號山藥為1.0mg/L時，其試管苗會有最高的存活率，而其質(zhì)量濃度相比常溫使，均偏低，究其原因，可能與PP333與低溫同時起作用的結(jié)果。當保存至180d時，鐵棍山藥的最高存活率為100%，47號山藥為100%，B號山藥為95%，相比于常溫保存時的存活率（80%、75%、75%），均明顯偏高。由此表明，對于山藥試管苗，PP333對其低溫保存效果要明顯好于常溫。

3.B9對懷山藥試管苗離體保存所產(chǎn)生的影響

當處于常溫狀態(tài)下，各個對照山藥試管苗持續(xù)保存120d后，均死亡，而添加B9后，持續(xù)保存180d，仍有較大比例的存活。當處于低溫狀態(tài)下，不管是否添加有B9，試管苗在保存周期上均會得到延長。在特定的B9質(zhì)量濃度下，鐵棍山藥于低溫下保存的最合適質(zhì)量濃度是5.0mg/L，47號山藥為2.0mg/L，而B號為2.0mg/L，相比于常溫狀態(tài)下保存的適宜質(zhì)量濃度（10.0.5.0.2.0mg/L），均明顯偏低，并且在合適質(zhì)量濃度下，持續(xù)保存180d，低溫下的存活率依次為55%、45%。40%，相比于常溫下的最合適質(zhì)量濃度存活率（35%、30%、20%），要明顯偏高。

四、結(jié)語

綜上，在低溫環(huán)境中，各基因型懷山藥的保存效果要明顯好于常溫，相比于B9的保存效果，PP333的更優(yōu)。針對緩慢生長保存法而言，其能夠有效規(guī)避因頻繁繼代所引起的污染或種質(zhì)變異情況，因而能夠切實保障種質(zhì)的遺傳穩(wěn)定性，最終達到長時間保存植物種質(zhì)資源的目的。而對于低溫保存而言，其乃是保存植物培養(yǎng)物，使其緩慢生長的不錯方法。有報道指出，植物不同，或是同一植物但基因型不同，那么其對低溫的敏感性也會存在差異。而由本次研究得知，相比于室溫下保存，懷山藥節(jié)段在接種之后，于室溫環(huán)境下培養(yǎng)7d，后開展低溫保存，能使其存活率得到明顯提高。

參考文獻：

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