徐 敏，李平明

(安順職業(yè)技術(shù)學(xué)院，貴州 安順 561000)

HLP是高脂血癥的簡稱，是由于遺傳、飲食結(jié)構(gòu)不合理及運動等因素導(dǎo)致的血漿中的三酰甘油(TG)或膽固醇(TC)濃度異常升高而引起的脂類代謝紊亂的一種疾病。尤其是隨著人們生活水平的提高，HLP人群逐年上升，已經(jīng)被列為嚴(yán)重威脅人類健康的三大殺手之一[1]。人類疾病動物模型是指為生物醫(yī)學(xué)的研究而建立的，模擬人類疾病表現(xiàn)的動物疾病模型，即能復(fù)制出人類疾病來的動物。把這些用于生物醫(yī)學(xué)來研究人類疾病的動物稱為疾病動物模型(AMD)。動物模型是用生物醫(yī)學(xué)等手段在動物身上模擬人類疾病的狀態(tài)，它可全面地、系統(tǒng)地反映疾病的發(fā)生、發(fā)展全過程，也可體現(xiàn)某個系統(tǒng)或局部的特征變化。通過HLP動物模型的研究，可以更有效地模擬和認(rèn)識理解人類此類疾病的發(fā)生和發(fā)展，更好地防治此類疾病。HLP動物模型的建立對于HLP發(fā)病機制及相關(guān)藥物的篩選及開發(fā)研究具有重要作用，也成為近期研究的熱點。通過對HLP動物的干預(yù)來觀察對血脂的影響作用，進而推測出對人類HLP的影響，是常用的方法。因此建立一個實用的、穩(wěn)定的、合理的HLP動物疾病模型，對該病發(fā)病機制的探索、治療方法的研究均具有重要意義。至今已研究建立的常見的HLP動物模型有：高脂膳食誘導(dǎo)大鼠HLP模型、高脂膳食誘導(dǎo)小鼠HLP模型、Triton誘導(dǎo)小鼠HLP模型、高脂膳食誘導(dǎo)家兔HLP模型、高脂膳食誘導(dǎo)鵪鶉HLP模型、高脂膳食誘導(dǎo)豚鼠HLP模型等。每一種動物模型有不同的特點，建議根據(jù)實驗的要求選擇適當(dāng)?shù)腍LP動物模型。

1 高脂膳食誘導(dǎo)大鼠HLP模型

本模型是通過高脂膳食中的豬油、膽固醇、膽酸鈉、甲基硫氧嘧啶或丙基硫氧嘧啶等主要成分的喂食，誘導(dǎo)大鼠HLP模型。本模型的造模機理是：高脂肪、高膽固醇飼料，喂食一段時間后，動物體內(nèi)的脂肪堆積，進而誘導(dǎo)動物形成HLP。在飲食中，加入的膽酸鈉可以促進膽固醇的吸收，加入的甲基硫氧嘧啶或丙基硫氧嘧啶是甲狀腺抑制藥，可促進和加重病變形成的進程。此模型的造模方法有三種：第一種是選用SD大鼠，雌雄各半，體重180～200 g，在大鼠的基礎(chǔ)飼料中添加5%膽固醇、0.5%豬膽鹽、5%蛋黃、10%豬油和0.2%丙基硫氧嘧啶，連續(xù)4周可造模成功[2]。第二種是用Wistar大鼠，雌雄各半，體重150～220 g，周星等用10%膽固醇、30%豬油、5%膽酸鈉、1%丙基硫氧嘧啶、20%吐溫-80配制成的高脂乳劑灌胃大鼠，連續(xù)2周可造模成功[3]；而趙金明等用2.5%膽固醇、15%豬油、2.5%蛋黃粉、0.5%丙基硫氧嘧啶、1%吐溫-80、78.5%蒸餾水(配方2)或者2.5%膽固醇、15%豬油、2.5%蛋黃粉、5%葡萄糖、1%吐溫-80、74%蒸餾水(配方3)或者2.5%膽固醇、15%豬油、2.5%蛋黃粉、0.5%豬膽酸鈉、0.25%丙基硫氧嘧啶、2.5%葡萄糖、1%吐溫-80、75.75%蒸餾水(配方6)連續(xù)2周即可造成大鼠HLP模型[4]。

大鼠是經(jīng)典的HLP模型動物的代表，由于大鼠體內(nèi)形成的病理改變與人類早期相似，而且具有價格低廉、便于飼養(yǎng)、生產(chǎn)周期較短、采血量大，可滿足多個指標(biāo)檢測等優(yōu)點，所以是國內(nèi)實驗中常選的HLP模型動物。但是由于大鼠血漿中低密度脂蛋白(LDL)和高密度脂蛋白(HDL)含量比例與人類差距較大，所以國外用大鼠做HLP模型動物的比例在減少[5]。又由于大鼠在進食高脂飼料時，不可能做到均衡，也無法定量，所以具有一定的局限性。而采用高脂乳劑灌胃來代替高脂飼料喂養(yǎng)的方法，從而復(fù)制出與人類HLP相同或相近的動物模型，已被廣泛應(yīng)用。

2 高脂膳食誘導(dǎo)小鼠HLP模型

本模型通過高脂乳劑復(fù)制小鼠HLP動物模型，由于具有周期短、價格經(jīng)濟、飼養(yǎng)方便、易于采樣等優(yōu)點，所以用小鼠建立的HLP模型動物，在研究中占據(jù)重要地位，尤其是高脂乳劑灌胃的方法值得推廣。

此模型的造模方法有兩種：第一種方法是選用KM小鼠，雌雄各半，體重18～22 g，用20%豬油、10%膽固醇、2%膽酸鈉和1%丙基硫氧嘧啶的高脂乳劑[6-7](即20 g豬油、10 g膽固醇、2 g膽酸鈉、1 g丙基硫氧嘧啶、20 ml吐溫-80和20 ml丙二醇不斷攪拌，最后用蒸餾水調(diào)至100 ml即成)每日上午定時灌胃小鼠，連續(xù)6w造模；第二種方法是取ICR小鼠，雌雄各半，體質(zhì)量是18～20 g，用75%的蛋黃乳液[8-9](即用60 g左右的新鮮雞蛋，蛋清去除，用滅菌過的生理鹽水按3∶1比例充分混勻配制成的)腹腔注射，連續(xù)6周制備此模型。本模型優(yōu)點可顯而易見，但由于采血量少，一些指標(biāo)的檢測受到了限制。

3 Triton誘導(dǎo)小鼠HLP模型

本模型是通過TritonWR-1339(簡稱Triton)一種表明活化劑來復(fù)制小鼠HLP模型[10-13]。一般選用KM小鼠或NIH小鼠，大多是雄性，體重18～22 g，采用尾靜脈注射或肌肉注射或腹腔注射Triton，注射Triton的劑量和時間點也各有不同，并觀察不同時間點對小鼠血脂水平的影響，一般作為小鼠急性HLP的動物模型。該模型的造模機理是[14]：Triton對體內(nèi)脂蛋白酯酶的活性起著抑制作用，從而增加極低密度脂蛋白膽固醇(VLDL-C)的含量，并且由于VLDL-C的大量堆積，致使血漿中TG、TC的量增多。該模型造模的方法是：用生理鹽水稀釋Triton，翟羽佳等或胡明月等給小鼠尾靜脈注射Triton 300 mg/kg，注射后18 h后，眼眶取血，離心血清，并檢測血脂指標(biāo)，發(fā)現(xiàn)TC、TG含量顯著升高(P<0.01)，造模成功[10-11]；卓俊城等給小鼠肌肉注射Triton 400 mg/kg、800 mg/kg、1 500 mg/kg三個劑量，并把每個劑量設(shè)置了不同的時間點，即：24、32、48、56、72、80、96 h，經(jīng)過研究發(fā)現(xiàn)，800 mg/kg和1 500 mg/kg劑量在32 h、48 h、56 h復(fù)制小鼠HLP模型成功，TC、TG、LDL-C含量明顯升高[12]；賈銀芝等給小鼠腹腔注射Triton 400 mg/kg，注射16h后，眼眶取血，離心血清，檢測血清中的TC、TG、LDL-C的含量，結(jié)果表明，HLP模型組小鼠血清中的TC、TG、LDL-C的含量顯著升高(P<0.01)，復(fù)制模型成功[13]。

該模型操作簡單，造模時間短，用于篩選調(diào)節(jié)血脂的藥物。而且復(fù)制該模型的Triton的劑量與血脂升高的量成正相關(guān)趨勢，另外血脂量的變化也與造模后在一定時間內(nèi)延長有關(guān)系。

4 高脂膳食誘導(dǎo)家兔HLP模型

此模型的造模方法有兩種：第一種方法是選用新西蘭白兔，雄性，體重2.5～3.0 kg，采用高脂飼料喂食來造模[15-20]。蔣蓮秀等采用高脂飼料(5%豬油、8%蛋黃、5%膽固醇、82%基礎(chǔ)飼料)喂食，連續(xù)5周造模，生化指標(biāo)TC、TG、LDL升高水平顯著，成功復(fù)制HLP模型[15]；高越等用高脂飼料(5%豬油、15%蛋黃、0.5%膽固醇、79.5%基礎(chǔ)飼料)喂食，連續(xù)6周造模成功[16]；靳書剛等用高脂飼料(10%豬油、15%鮮蛋黃、1%膽固醇、74%基礎(chǔ)飼料)喂食[17]，黃雪君等用高脂飼料(10%豬油、0.2%丙基硫氧嘧啶、2%膽固醇、87.8%基礎(chǔ)飼料)喂食，連續(xù)8周，造模成功[18]；王琳等用高脂飼料(5%豬油、10%蛋黃粉、1%膽固醇、84%基礎(chǔ)飼料)喂食，每日喂食不超過150g/只[19],劉仰斌等采用高脂飼料(10%豬油、6%蛋黃粉、1%膽固醇、83%基礎(chǔ)飼料)喂食，每日給予100 g/只,連續(xù)12周，造模成功[20]；第二種方法是選用日本大耳白兔，雄性，體重2.5～3.0 kg，采用脂肪乳劑灌胃，1次/d，每次每只灌胃量2 ml/kg，連續(xù)2周造模[21-22]，通過血清中TC、TG等生化指標(biāo)的檢測，效果明顯，可成功復(fù)制出家兔HLP模型。脂肪乳劑的配制方法如下：取80 g豬油加熱融化，加入40 g膽固醇、8 g膽酸鈉和4 g丙基硫氧嘧啶片，使之溶化并充分?jǐn)嚢瑁偌尤?0 ml吐溫-80、80 ml丙二醇及適當(dāng)?shù)恼麴s水，不斷攪拌成均勻狀，最后用雙蒸水調(diào)至400 ml，充分混勻，即制成脂肪乳劑。以上兩種造模方法，其中第一種高脂飼料的造模方法，由于喂食家兔時間較長，另外在實驗中存在著一些困難，如不能準(zhǔn)確給家兔喂食相應(yīng)的劑量等。而第二種灌胃脂肪乳劑的造模方法，就避免了第一種造模方法的不足，造模時間短，能準(zhǔn)確地給家兔灌胃相應(yīng)的劑量，所以給家兔灌胃脂肪乳劑的造模方法是值得我們采用的。家兔在研究HLP模型動物中是最早的動物，雖然對高脂膳食十分敏感，且對外源性TC的吸收率高，但是由于家兔是草食性動物，產(chǎn)生的病變與人類有所不同，TC的代謝也與人類存在較大差異，所以在選擇HLP動物模型時應(yīng)該有針對性地進行。

5 高脂膳食誘導(dǎo)鵪鶉HLP模型

此模型的造模方法有兩種：第一種方法是選用朝鮮種鵪鶉，雄性，體重95～140 g，采用高脂飼料(1%膽固醇、6%花生油、14%豬油、79%基礎(chǔ)飼料[23-24]或1%膽固醇、16%豬油、83%基礎(chǔ)飼料[25])喂食，連續(xù)4周造模，血清中TC、TG、LDL-C、HDL-C的含量較正常對照組顯著升高(P<0.05或P<0.01)，HLP模型造模成功；第二種方法是選用鵪鶉，雄性，體重110～130 g，采用高脂飼料[26](1%膽固醇、20%豬油、79%基礎(chǔ)飼料)喂食，連續(xù)6周造模，可使血清TG、TC含量增加明顯，與正常對照組比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)，使 HDL-C含量降低(P<0.05)，復(fù)制HLP模型成功。

這種通過高脂膳食誘導(dǎo)鵪鶉的HLP動物模型，一般造成脂肪在肝臟中堆積，與人類攝入過多的脂肪或糖類引發(fā)的脂肪肝類似，所以此模型適合于研究脂肪肝的防治和發(fā)病機制等。另外，由于鵪鶉的飼料簡單，有充足的來源和便于飼養(yǎng)，所以鵪鶉也是HLP模型的常用動物。

6 高脂膳食誘導(dǎo)豚鼠HLP模型

豚鼠在膽固醇代謝上與人比較類似，而且此模型對于食物中脂類及調(diào)節(jié)血脂功效成分更接近于人，所以目前在血脂研究中已經(jīng)逐步采用豚鼠來代替大鼠、小鼠來建立HLP動物模型，該動物模型被認(rèn)為是HLP動物模型中較佳的模型[27]。此模型的造模方法有兩種：第一種方法[27]是選用Dunkin Hartley白化豚鼠或Hartley花色豚鼠，雄性，體重355～405 g，造模用的高脂飼料是由0.04%膽固醇、84.96%基礎(chǔ)飼料以及15%的橄欖油、棕櫚仁油、紅花油等組成的，連續(xù)喂食4周后，血脂指標(biāo)均出現(xiàn)了紊亂，誘導(dǎo)形成HLP動物模型成功；第二種方法是選用Hartley花色豚鼠，雄性，體重220～280 g，采用高脂飼料喂食來造模。宋鑫等用高脂飼料(0.1%豬油、0.01%膽固醇、99.89%基礎(chǔ)飼料)喂食，連續(xù)造模4周，進行血脂指標(biāo)的測定，造模成功[28]。

這種高脂膳食造成的血脂水平異常類似于人類攝入過多高脂飲食而引起的高脂血癥，而且這種高脂膳食中誘導(dǎo)豚鼠的膽固醇量很低，是誘導(dǎo)大鼠、小鼠膽固醇量的幾十倍分之一甚至幾百倍分之一。說明豚鼠對膽固醇很敏感，容易誘導(dǎo)形成HLP模型，并且有造模時間短、HLP模型特征顯著、血脂水平穩(wěn)定等優(yōu)點。

7 復(fù)制動物模型需要說明的問題

7.1動物模型的相似性：復(fù)制動物模型應(yīng)盡量與人類疾病類似，并表現(xiàn)出人類疾病的病理變化，最好能找到類似于人類疾病的動物自發(fā)性疾病。當(dāng)然，與人類疾病類似的動物自發(fā)性疾病模型不容易得到，這就需要我們研究者通過實驗復(fù)制得到，所以我們研究者在選擇實驗動物上、復(fù)制動物模型的方法上以及設(shè)計觀察檢測指標(biāo)等方面都要考慮周密，這樣才能體現(xiàn)出動物模型的價值所在，才能更好地研究人類的疾病并與之相比較。如果兩者越相似，則說明研究結(jié)果越可靠。

7.2動物模型的重復(fù)性：動物模型最理想的應(yīng)該是重復(fù)性強，可標(biāo)準(zhǔn)化的。所以為了使復(fù)制動物模型的重復(fù)性增強，設(shè)計實驗時應(yīng)該在標(biāo)準(zhǔn)化的動物實驗室內(nèi)進行，并使用標(biāo)準(zhǔn)化的實驗動物來復(fù)制動物模型。另外，應(yīng)盡量保證許多因素的一致性，如實驗環(huán)境、實驗方法、實驗動物的選擇、實驗試劑等方面的一致。

7.3動物模型的經(jīng)濟適用性：設(shè)計動物模型時，盡可能符合經(jīng)濟適用的原則。我們知道，與人類最相似的是靈長類動物，但由于價格昂貴而且稀少，所以不能普遍采用。而許多廉價的小動物如大鼠、小鼠、豚鼠等由于其遺傳背景明確，模型性狀穩(wěn)定、顯著，數(shù)量多，來源廣，微生物等級可控，易于飼養(yǎng)等，可復(fù)制出與人類疾病相似的動物模型，因而被廣泛應(yīng)用在研究中。

總之，理想的HLP動物模型的建立是我們研究高脂血癥的基礎(chǔ)，為闡明HLP的發(fā)病機理和尋找有效的治療藥物，顯得尤為重要。HLP動物模型大都是經(jīng)過高脂膳食而形成的動物模型，而高脂膳食動物模型主要包括高脂飼料喂食或者脂肪乳劑灌胃形成的動物模型，由于都是經(jīng)過消化道給予的，所以從形成的時間上相對較長，類似于人類的高脂血癥，對于環(huán)境因素影響高脂血癥形成的研究有很高的價值。而由 Triton 等一次性誘發(fā)形成的HLP模型，雖然也是由于環(huán)境因素造成的，但是不符合人類的高脂血癥特點，所以臨床上只作為篩選降血脂藥物。在今后的高脂血癥的研究中，也會有更多的HLP動物模型被我們發(fā)現(xiàn)和應(yīng)用，這些動物模型為我們研究高脂血癥提供了實驗依據(jù)和重要基礎(chǔ)，但更深入的研究還需要進一步的挖掘和應(yīng)用。

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